Xxx農業大學獸醫微生物學試驗匯報葡萄球菌和鏈球菌分離判定姓名＿＿＿＿＿＿＿＿＿學號＿＿＿＿＿＿＿＿＿專業班級＿＿＿＿＿＿＿＿＿指導教師＿＿＿＿＿＿＿＿＿葡萄球菌和鏈球菌分離判定摘要目標：對A.B兩種菌種進行分離判定主要方法：經過分離培養形態觀察生化試驗進行判定關鍵詞葡萄球菌鏈球菌分離判定引言葡萄球菌，屬微球菌科葡萄球菌屬，革蘭氏陽性菌。對生長環境要求不高在普通培養基上生長良好，需氧或堿性厭氧，最適培養溫度為37攝氏度。最適PH7.4.在普通培養基上形成濕潤光滑隆起邊緣整齊圓形菌落。多數菌株能分解葡萄糖乳糖麥芽糖蔗糖，產酸不產氣;致病菌株能夠分解甘露糖，還能夠產生血漿凝固酶。有致病性葡萄球菌主要是金黃色葡萄球菌，致病性葡萄球菌判定可經過色素顏色，溶血性，過氧化氫酶試驗（觸酶試驗），凝固酶試驗，甘露糖發酵試驗等判定鏈球菌，革蘭氏陽性菌，老齡菌或被吞噬細菌或展現陰性。呈圓形或卵圓形，直徑為0.5～1.0微米，常呈鏈狀或成雙排列。通常致病性鏈球菌鏈比非致病性鏈長。個別菌株有鞭毛，有菌株有菌毛，幼齡培養物可形成莢膜。大多數為兼性厭氧菌，少數為厭氧菌。致病菌對營養要求比較高，普通培養基中生長不良。在加入血液血清葡萄糖等培養基中生長良好。在血瓊脂平板上可長成直徑約0.1～1.0mm,灰白色表面光滑,邊緣整齊小菌落.多數致病菌落可形成溶血現象.強致病菌可形成β溶血.產生α溶血環鏈球菌致病性不強,為條件致病菌.γ型溶血菌落周圍無溶血現象,通常不治病.1.材料與方法1.1材料1.1.1兩種未知試驗菌種A菌B菌1.1.2培養基制作材料（1）藥品牛肉膏蛋白胨NacI瓊脂0.1mol/L和1mol/LNaoH溶液,0.1mol/L和1mol/LHCI溶液。（2）儀器天平或臺秤，高壓蒸汽滅菌器。（3）玻璃器材移液管試管燒杯量筒錐形瓶培養皿玻璃漏斗。（4）其余物品鑰匙稱量紙ph試紙記號筆脫脂棉線繩紗布試管塞牛皮紙注射器等。1.2方法1.2.1普通培養基制作方法（1）稱量：牛肉膏1克，蛋白胨2克NaCI1克蒸餾水200毫升于燒杯中。（2）溶解：加熱至沸騰，邊加熱邊用玻璃棒攪拌。（3）調整PH：利用配制好HCINaOH溶液來調整，用ph試紙測ph，直到調整至7.5為止。（4）分裝：將配置好培養基分裝入錐形瓶試管中，塞上試管塞或者錐形瓶塞，用牛皮紙包裝，扎緊瓶口，在121攝氏度溫度下高壓蒸汽滅菌20—30min。（5）倒板:將經過高壓蒸汽滅菌成有培養基錐形瓶和培養皿放在試驗臺上，點燃酒精燈。右手托著錐形瓶底，左手拔下塞子在酒精燈火焰上稍加灼燒，然后左手拿著平板，靠近酒精燈火焰，將錐形瓶口在酒精燈火焰上稍加灼燒。然后將培養基分別倒入兩個平板中，使培養基后約三毫米。倒完后將瓶塞再加灼燒后再塞上。等候十五分鐘。培養基充分冷卻后即可接種。1.2.2血瓊脂培養基制作方法（1）稱量：牛肉膏1克，蛋白胨2克NaCI1克蒸餾水200毫升于燒杯中。（2）溶解：加熱至沸騰，邊加熱邊用玻璃棒攪拌。（3）調整PH：利用配制好HCINaOH溶液來調整，用ph試紙測ph，直到調整至7.5為止。（4）分裝：將配置好培養基裝入錐形瓶30毫升，塞上塞子，牛皮紙扎緊瓶口，在121攝氏度溫度下高壓蒸汽滅菌20—30min。（5）制備血液：用注射器對兔子心臟進行抽血，抽血之前注射器先抽取0.3毫升檸檬酸鈉作為抗凝劑，抽取5毫升兔血。抽血之前，應先確定兔子心臟位置，左側第三四肋骨之間下針，先用碘酒棉擦再用酒精棉擦拭消毒。抽血完成要對試驗臺進行消毒。（6）制作血平板：將抽取血用拔掉針頭注射器沿錐形瓶瓶壁注入經過高壓蒸汽滅菌已冷卻至50攝氏度左右培養基中。輕輕搖勻后快速按照普通培養基倒板方法倒如兩個培養基中。1.2.3細菌劃線分離培養基經過高壓蒸汽滅菌之后，倒入平板，用經過滅菌接種環等工具在無菌條件下接種菌株與培養基上。第一次劃線:將接種環置于酒精燈火焰上先豎燒后橫燒。然后左手拿起培養有菌種培養基A，將灼燒后接種環先戳平板上面水蒸氣降溫，再挑菌。左手放下菌種A，拿起盛有培養基平板再靠近壁內側劃線數道。第二次劃線：將上一步接種環灼燒冷卻后，從上次劃線部位引一條線至臨側，角度約為120度。（如圖1-1所表示）第三次第四次劃線均與第二次劃線一致，參考（2）此步驟需要將A接種一個普通培養基平板，一個血平板。B菌種接種一個普通培養基平板，一個血平板。圖1-1圖1-12.結果與分析2.1普通瓊脂平板2.1.1普通瓊脂平板A.B兩菌種生長情況如圖2-1;2-22-12-22.1.2血瓊脂平板血瓊脂平板平板上AB兩菌種生長情況2-32-42.3革蘭氏染色2.3.1基本原理在經過革蘭氏染色，革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌則展現紅色。所以，能夠經過革蘭氏染色區分革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌。2.3.2器材（1）試劑；草酸銨結晶紫，革蘭氏碘溶液，乙醇95％沙黃水溶液，生理鹽，水香柏油（2）器材：載玻片，光學顯微鏡，接種環，酒精燈等2.3.3試驗步驟將載玻片置于酒精燈火焰上灼燒去除蠟層，待冷卻后兩端各滴一滴生理鹽水，用灼燒后接種環挑取菌涂抹于載破片生理鹽水里。烘干后用草酸銨結晶紫染1-2min是，水洗。革蘭氏碘液染色1-3min，水洗。乙醇脫色30s，水洗。沙黃復染30s，水洗。吸水紙拭干后在光學顯微鏡下，最終用油鏡觀察鏡檢。2.3.4試驗結果與分析葡萄球菌與鏈球菌均為革蘭氏陽性均呈紫色，如圖2-5；2-6所表示2-52-6觸酶試驗（過氧化氫試驗）2.4.1基本原理葡萄球菌能夠產生過氧化氫酶（接觸酶），此酶能夠分解過氧化氫使其分解產生水和氧氣。所以能夠從有沒有氣泡判別是否存在過氧化氫酶，進而判別出存在葡萄球菌。而鏈球菌不產生過氧化氫酶所以不產氣。2.4.2試驗器材3％過氧化氫溶液，經過滅菌小試管，玻璃棒。2.4.3試驗步驟取2ml3％過氧化氫與小試管中，將玻璃棒置于酒精燈火焰上灼燒滅菌冷卻后蘸取菌種置于小試管中，觀察現象。2.4.4試驗結果與分析在試驗中，A菌沒有產生氣泡，觸酶陽性。而B菌產生了氣泡所以為觸媒陰性。經過試驗，初步斷定A為鏈球菌，B為葡萄球菌。結果如圖2-72-72.5凝固酶試驗2.5.1試驗原理致病性葡萄球菌能夠產生凝固酶，是一個分泌至菌體外游離固酶，作用類似凝血酶原物質，能夠產生使血清凝結2.5.2試驗器材（1）試劑：0.5ml兔血清葡萄球菌（2）器材：小試管接種環酒精燈2.5.3試驗步驟用經過酒精燈火焰灼燒滅菌接種環挑取疑為葡萄球菌菌種，置于盛有兔血清小試管中，充分混勻置于36左右環境中，培養2-4h，查看結果。2.5.4試驗結果與分析B菌血清凝固，凝固酶陽性。如圖2-8.2-82.6甘露醇發酵試驗2.6.1試驗器材甘露醇發酵管接種環酒精燈2.6.2基本原理金黃色葡萄球菌發酵甘露糖產酸，使試劑管里指示劑顏色由紫變成黃色。2.6.3試驗步驟用用酒精燈灼燒過接種環挑取疑似葡萄球菌，置于甘露醇發酵管中，混勻后做好標識密封37攝氏度培養18-24h。2.6.4試驗結果與分析經過觀察B菌培養基由紫變黃，且產生渾濁。故為甘露醇試驗陽性。結果見圖2-92-93.討論3.1兔子抽血量不夠因為兔子數次抽血，造成血量不足或產血跟不上，造成在心臟跳動最快地方卻抽不出血。3.2油鏡觀察不到