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第十一章基因芯片技術(shù)生物芯片(biochip)概念:指采用光導(dǎo)原位合成或微量點樣等方法,將大量生物大分子有序地固化于支持物表面,組成密集二維分子排列,然后與已標(biāo)記的待測生物樣品中靶分子雜交,通過特定的儀器對雜交信號的強度進(jìn)行快速、并行、高效地檢測分析,從而判斷樣品中靶分子的數(shù)量。由于常用玻片/硅片作為固相支持物,且在制備過程模擬計算機(jī)芯片的制備技術(shù),所以稱之為生物芯片技術(shù)。特點:高通量、微型化和自動化。
根據(jù)芯片上固定的探針不同
組織芯片:組織切片基因芯片:寡核苷酸探針或DNA蛋白質(zhì)芯片:肽或蛋白細(xì)胞芯片:細(xì)胞元件型微陣列芯片通道型微陣列芯片生物傳感芯片根據(jù)芯片的原理不同生物芯片的分類:第一節(jié)基因芯片概述一、基因芯片的概念
是指通過寡核苷酸陣列原位合成或顯微打印,將數(shù)以萬計的DNA探針片段有序地固化于支持物上,產(chǎn)生二維DNA探針陣列,然后與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交。通過檢測雜交信號來實現(xiàn)對生物樣品的快速、高效檢測或診斷。由于固定于支持物上的每個分子的位置及序列為已知,當(dāng)熒光標(biāo)記的靶分子與芯片上的探針分子結(jié)合后,可通過激光共聚焦熒光掃描或電荷偶聯(lián)攝影相機(jī)對熒光信號的強度進(jìn)行檢測,從而對雜交結(jié)果進(jìn)行定量分析。二、基因芯片技術(shù)的原理1.基因芯片技術(shù)的基本原理:-----反向斑點雜交(reversedot-blothybridization,RDB),即在固相支持物上固定已知序列核苷酸,和待檢測樣品標(biāo)記后進(jìn)行雜交,根據(jù)檢測信號的有無和強弱,確定樣品中該已知序列片段的有無及含量高低。2.雜交信號檢測:信號的強弱不同:樣品與探針嚴(yán)格配對的雜交分子----最強不完全雜交的雙鏈----弱不能雜交的雙鏈----無信號通過激光共聚焦顯微鏡、激光掃描儀或熒光顯微鏡等檢測熒光信號,由計算機(jī)記錄下來,經(jīng)過專門設(shè)計的軟件對每個熒光信號的強度進(jìn)行定量分析、處理,并與探針陣列位點進(jìn)行比較,即可得到待測樣品的遺傳信息。第二節(jié)基因芯片技術(shù)的基本步驟①基因芯片設(shè)計:提出問題,確定研究目標(biāo),選擇一組特定的基因?qū)ο蟆"诨蛐酒苽洌涸O(shè)計探針序列,確定探針及探針在芯片上的分布,制備基因芯片。③靶基因制備:將樣品進(jìn)行特定的生物處理,獲取其中DNA、RNA等信息分子并加以標(biāo)記。④雜交:選擇合適的反應(yīng)條件使生物分子間反應(yīng)處于最佳狀況中,減少生物分子之間的錯配比率,從而獲取最能反映生物本質(zhì)的信號。⑤雜交信號檢測和結(jié)果分析:目前最常用的芯片信號檢測方法是將芯片置入芯片掃描儀中,通過采集各反應(yīng)點的熒光強弱和熒光位置,經(jīng)相關(guān)軟件分析圖像,即可以獲得有關(guān)生物信息。第三節(jié)
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