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文檔簡介

藥物分離與純化技術課程電泳技術--電泳的分離方法電泳的分離方法—電泳技術大綱紙電泳2.凝膠電泳3.醋酸纖維素薄膜電泳4.等電聚焦電泳5.等速電泳6.雙向凝膠電泳7.免疫電泳電泳的分離方法—電泳技術

指用濾紙作為支持載體的電泳方法。

是最早使用的區帶電泳。紙電泳操作：將濾紙條水平地架設在兩個裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點于濾紙中央。當濾紙條被緩沖液潤濕后，再蓋上絕緣密封罩，即可由電泳電源輸入直流電壓（100V～1000V）進行電泳。1.紙電泳平臥式電泳槽紙電泳電泳的分離方法—電泳技術2.凝膠電泳

由區帶電泳中派生出一種用凝膠物質作支持物進行電泳的方式，被稱為凝膠電泳。普通的凝膠電泳在板上進行，以凝膠作為介質。電泳的分離方法—電泳技術2.凝膠電泳

電泳中常用的凝膠:

葡聚糖、交聯聚丙烯酰胺和瓊脂糖。它具有機械強度好、彈性大、透明、化學穩定性高、無電滲作用、設備簡單、樣品量小(1～100μg）、分辨率高等優點。瓊脂糖凝膠電泳電泳的分離方法—電泳技術3.醋酸纖維素薄膜電泳

電泳時經過膜的預處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。

此電泳的特點是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。電泳的分離方法—電泳技術4.等電聚焦電泳

是一種利用有pH值梯度的介質，分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。適用于中、大分子量如蛋白質、肽類、同工酶等生物組分的分離分析。電泳的分離方法—電泳技術5.等速電泳采用兩種不同濃度的電解質組成，一種為前導電解質，充滿整個毛細管柱；另一種為尾隨電解質，置于一端的電泳槽中。

前導電解質的遷移率高于任何樣品組分，后者則低于任何樣品組分，被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間，在強電場的作用下，各被分離組分在前導電解質與尾隨電解質之間的空隙中移動，實現分離。電泳的分離方法—電泳技術6.雙向凝膠電泳（二維電泳）第一向采用等電聚焦，根據復雜的蛋白質成分中各個蛋白質的PI的不同，將蛋白質進行分離。

第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳，按蛋白質分子量的大小使其在垂直方向進行分離。其結果呈現為斑點狀。雙向電泳電泳的分離方法—電泳技術7.免疫電泳：瓊脂平板電泳和雙相免疫擴散兩種方法的結合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進行電泳，使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開，然后加入抗體，做雙相免疫擴散，把已分離的各抗原成分與抗體，

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