梅毒血清學檢測策略及影響因素2019/12/142021/10/101梅毒概述梅毒是由蒼白螺旋體引起的一種慢性、系統性性傳播疾病。人體受感染后，幾乎可侵犯全身各組織與器官，臨床表現多種多樣，且時顯時隱，病程較長。?中華人民共和國傳染病防治法?規定要管理的主要性病之一。早期主要侵犯皮膚及粘膜，晚期除侵犯皮膚、粘膜外，還可侵犯心臟血管系統及中樞神經系統；另一方面，梅毒又可多年無癥狀呈潛伏狀態。梅毒主要通過性接觸傳染，亦可通過血液和母嬰垂直傳播。2021/10/102

梅毒螺旋體

梅毒是一種性傳播疾病，病原體為梅毒螺旋體，屬于密螺旋體屬，蒼白密螺旋體蒼白亞種(Treponemapallidumsubspeciespallidum)

極細亞種雅司病地方亞種地方性梅毒蒼白亞種梅毒蒼白螺旋體品他螺旋體品他病

密螺旋體屬2021/10/103我國基本消滅（1950-1964年）現在呈逐年增加的趨勢我國政府針對梅毒控制的相關政策中國預防與梅毒規劃（2010-2020年）性病管理辦法（2013年）預防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播工作實施方案………2021/10/104梅毒分期時間一期梅毒二期梅毒三期梅毒隱形梅毒胎傳梅毒2021/10/105梅毒是一個可以臨床治愈的傳染病病例診斷依據（ws273-2007）病史癥狀實驗室檢查實驗室檢查結果對梅毒診斷及判愈有決定性意義2021/10/106梅毒實驗室檢測方法病原學檢測梅毒血清學檢測組織病理學檢測白細胞檢測蛋白檢測2021/10/107病原學檢測暗視野顯微鏡檢查鍍銀染色法核酸檢測

（血液標本？？）2021/10/108梅毒血清學檢測方法

（1）梅毒非特異性抗體檢測（非梅毒螺旋體抗原血清學試驗）（2）梅毒特異性抗體檢測（梅毒螺旋體抗原血清學試驗）2021/10/109梅毒非特異性抗體檢測原理梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對螺旋體表面的脂質做出免疫應答，產生抗類脂抗原的抗體（即非特異性抗體）。未經治療的患者，其血清內的非特異性抗體可長期存在。經過正規治療后，非特異性抗體可以逐漸減少滴度或直至轉為陰性。2021/10/1010反應原理抗原抗體結合形成復合物，凝集成網狀沉淀顆粒被肉眼所見抗原基本成分心磷脂、卵磷脂和膽固醇方法包括：快速血漿反應素環狀卡片試驗(RPR)不加熱血清反應素(USR)甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）性病研究實驗室試驗(VDRL)等。2021/10/1011中華人民共和國衛生行業標準WS/T491-2016梅毒非特異性抗體檢測操作指南2021/10/1012常見的測定影響因素水平旋轉儀（100+2r/min）反應時間專用抗原滴針的加樣量要求，抗原量每滴為17ul左右反應板的要求：無污染、試劑打開后不可冷藏保存2021/10/1013局限性假陰性反應感染梅毒螺旋體后，機體免疫應答需要一定過程，抗類脂質的抗體濃度尚處于實驗方法的檢測限之下，稱為窗口期，可發生假陰性反應。少數早期梅毒和神經梅毒以及部分晚期梅毒，可發生定性試驗假陰性反應。2021/10/1014前帶現象部分早期梅毒（1%-2%的二期梅毒，0.5%-1%的一期梅毒）的樣品可出現前帶現象樣品類型

血漿中抗體濃度顯著高于血清，同一患者的血清和血漿檢測結果不可直接比較。2021/10/1015

雖然VDRL、RPR、TRUST的檢測原理基本相同，但因采用的抗原原料和生產工藝的不同，各種方法和試劑之間可能存在一定范圍的敏感性和特異性的系統性差異。任何2中方法的定性和半定量結果，相互之間不可直接比較。當采用梅毒非特異性抗體作梅毒篩查用途時，應選擇敏感性高的方法或試劑。2021/10/1016假陽性問題假陽性：非梅毒患者的血清反應呈陽性①技術性假陽性

由于標本的保存不當（如細胞污染或溶血）、試劑質量差或過期、或實驗室操作錯誤所造成。②生物學假陽性

是由于患者有其他疾病或生理狀態發生變化，使梅毒血清試驗出現陽性。2021/10/1017

急性生物學假陽性反應的疾病風疹水痘傳染性單核細胞增多癥傳染性肝炎上呼吸道感染肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎牛痘疹2021/10/1018慢性生物學假陽性反應的疾病系統性紅斑狼瘡自身免疫性溶血性貧血盤狀紅斑狼瘡結節性多動脈炎類風濕性關節炎橋本氏甲狀腺炎風濕性心臟病干燥綜合征毒品癮者慢性腎炎肝硬化老年麻風

(是唯一產生慢性生物學假陽性的感染性疾病)2021/10/1019梅毒特異性抗體檢測抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異性抗原），檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗呈陽性，則該患者基本終生陽性。2021/10/1020梅毒螺旋體的抗原結果外膜脂蛋白抗原 47、44.5、43、36、34、17、15KDa成分，其中47含量高，免疫原性強，為主要抗原，但與其他兩種致病性螺旋體有交叉反應）軸絲抗原

軸絲為運動器官，37、35.5、33KDa4D抗原

為梅毒螺旋體特異性表面抗原，均勻分布在梅毒螺旋體表面。2021/10/1021梅毒特異性抗體檢測技術梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）梅毒螺旋體血球顆粒凝集試驗（TPHA）酶聯免疫試驗（ELISA）化學發光免疫分析法（CLIA）免疫層析法—梅毒快速檢測（RT）熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）蛋白印跡試驗（WB）2021/10/1022TPPA/TPHA原理TPPA試驗原理與TPHA試驗基本相同TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒TPHA試驗中梅毒螺旋體致敏羊紅細胞特點梅毒螺旋體(Nichols株)全抗原2021/10/1023SerodiaTPPA的操作步驟6、結果判讀1、加入樣品稀釋液100μl25μl25μl25μl孔號143212、加入測試樣品25μl孔號14321致敏顆粒4、加入明膠顆粒最終稀釋倍數孔號143211:401:8025μl25μl未致敏顆粒5、混勻，加蓋，孵育2個小時3、樣品的倍比稀釋孔號14321最終稀釋倍數1:201:4025μl25μl25μl25μl棄去2021/10/1024判斷標準粒子光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊粒子光滑覆蓋大部分孔底粒子光滑覆蓋孔底，周圍有一細胞環粒子光滑覆蓋孔底，周圍有一明顯細胞環粒子沉積孔底，中央形成一小點粒子緊密沉積孔底中央2021/10/10252021/10/1026ELISA/CLIA原理

用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標記物，形成抗原抗體復合物與酶標記物結合，用酶標儀判定試驗陽性反應。特點

本法可用于大規模血清檢測?；瘜W發光法的臨床應用意義基本同ELISA。化學發光的敏感性？？2021/10/1027免疫層析2021/10/1028梅毒IgM抗體IgM抗體的產生是感染后的早期體液免疫應答反應。IgM抗體不能通過胎盤屏障和血腦屏障，而母體的IgG抗體可以通過胎盤屏障傳給胎兒，血液中的IgG抗體也可以通過血腦屏障進入腦脊液中，因此若在新生兒血中檢測到IgG抗體不能作為先天梅毒的診斷依據，而IgM抗體可作為先天梅毒的診斷依據。同時，梅毒IgM抗體檢測還可以用于神經梅毒、早期梅毒的診斷依據。2021/10/1029梅毒各類抗體出現時間2021/10/1030先天梅毒的診斷先天梅毒的診斷標準必須具備以下條件之一：1.暗視野顯微鏡鏡檢梅毒螺旋體陽性；2.梅毒螺旋體IgM抗體陽性；3.RPR/TRUST檢測陽性，滴度比母親分娩前最近一次滴度高4倍以及上；4.RPR/TRUST檢測隨訪中，任何一次滴度不下降或反而上升；5.滿18月齡后，TPPA檢測仍為陽性。2021/10/1031梅毒的血清固定2021/10/1032梅毒血清學實驗室檢測策略2021/10/1033梅毒血清學檢測目的與策略的關系2021/10/1034傳統策略2021/10/1035逆向策略2021/10/10362021/10/1037雙檢策略試驗結果參考結果解釋梅毒特異性抗體檢測梅毒非特異性抗體檢測陽性陽性可能為現癥梅毒陰性陽性非梅毒螺旋體血清學試驗假陽性陽性陰性臨床治愈的早期梅毒（既往感染者）或極早期梅毒陰性陰性排除梅毒感染或極早期梅毒2021/10/1038總結非特異性和特異性兩類抗體檢測均可作為梅毒初篩試驗。任