本文格式為Word版，下載可任意編輯——花粉的形態(tài)觀測及生活力測定試驗(yàn)一花粉貯藏及花粉生活力的測定

花期不遇給雜交工作造成困難，有的園林植物可通過調(diào)整花期來解決，有的則不得不進(jìn)行花粉貯藏，或者從外地寄運(yùn)花粉。為了避免雜交工作失誤，在使用外地寄來的花粉或經(jīng)過一段時(shí)間貯藏的花粉之前，必需對花粉的生活力進(jìn)行檢測，以便對雜交結(jié)果進(jìn)行分析與研究。因此我們必需把握花粉貯藏及花粉生活力測定的原理和技術(shù)

一、試驗(yàn)?zāi)康?/p>

把握花粉貯藏及花粉生命力鑒定的方法和原理。二、試驗(yàn)材料

百合、金魚草、菊花等花粉。三、儀器及藥品

顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、解剖針、吸水紙、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、藍(lán)墨水。四、試驗(yàn)原理

花粉在低溫（0～2℃）、枯燥、黑暗等條件下代謝強(qiáng)度降低，花粉貯藏的原理就是要創(chuàng)造這樣低代謝的環(huán)境條件，從而延長花粉的壽命。

花粉的形態(tài)、花粉中酶的活性以及積累淀粉的多少（淀粉質(zhì)花粉）尋常與其生活力密切相關(guān)，因此可以利用花粉的形態(tài)觀測、過

氧化物酶、脫氫酶的活性高低、淀粉的含量以及在人工培養(yǎng)基上花粉管萌發(fā)的狀況作為鑒定花粉生活力高低的標(biāo)準(zhǔn)。

鑒定花粉生活力的方法好多，概括起來主要有如下幾種：1．直接測定法將待測花粉直接授粉，然后統(tǒng)計(jì)厚實(shí)狀況。此法最確鑿，但需時(shí)較長，且試驗(yàn)結(jié)果易受氣候條件的影響。也可在授粉后隔一定時(shí)間切下柱頭，在顯微鏡下壓片檢查花粉的萌發(fā)狀況，根據(jù)萌發(fā)率的高低來鑒定花粉的生活力。

2．形態(tài)觀測法直接在顯微鏡下觀測花粉的形態(tài)，根據(jù)品種花粉的典型性（如具有正常的大小、形狀、色澤等）判斷花粉的生活力，即形態(tài)正常的花粉有生活力，而一些小的、皺縮的、畸形的花粉不具有生活力。此法簡便易行但確鑿性差，一般只用于測定新鮮花粉的生活力。

3．染色觀測法

1）碘－碘化鉀染色法：以碘－碘化鉀溶液（0.3g碘＋1.3g碘化鉀溶于100ml蒸餾水）染色后于顯微鏡下觀測，花粉被染成藍(lán)色者表示具有生活力，花粉呈黃褐色者不具有生活力。

2）TTC染色法：使用TTC測定花粉生命力的原理，主要是無色藥液進(jìn)入花粉遇到活組織里的脫氫酶，接受氫離子，還原成紅色三苯基甲臘TTF，還原結(jié)果使有生命力的花粉染上紅色，死花粉不著色；花粉生活力強(qiáng)弱有異，染色深淺也有不同。在28—30℃的溫度下2小時(shí)以上(花卉不同染色時(shí)間也不同)。

4．培養(yǎng)基發(fā)芽法在培養(yǎng)基上進(jìn)行花粉的人工萌發(fā)，鑒定待測花粉萌發(fā)率的高低。此法若采用適合的培養(yǎng)基能較確切地測定出花粉的生活力，但不同植物的花粉萌發(fā)條件存在較大的差異，所以好多時(shí)候測定的結(jié)果也只是相對可靠。

五、試驗(yàn)步驟：１．花粉的貯藏：

（１）將采集的花粉進(jìn)行枯燥（涼干或放入盛有無水氯化鈣的枯燥器中枯燥），一般以花粉不相互黏結(jié)為度。

（２）將枯燥的花粉裝在指形管中（不要太多，一般以五分之一體積或更少為宜），瓶口塞以紗布，瓶外貼以標(biāo)簽，注明花粉種類、采收日期。

（３）將指形管放入無水氯化鈣控制一定濕度的枯燥器中，枯燥器置于0～2℃的冰箱內(nèi)。

２．花粉生活力的測定：

（１）染色觀測法——TTC染色法

①配制TTC染色液：稱取0.5gTTC溶于100ml磷酸鹽緩沖液（100ml蒸餾水中溶解0.832gNa2HPO4·2H2O和0.273gKH2PO4，pH7.2）中，裝入棕色瓶備用。

②制片：取少量花粉于載玻片上，滴入1～2滴0.5％TTC染色液，用鑷子攪拌均勻，蓋上蓋玻片，于35～40℃條件下凈置15～20min。

③觀測統(tǒng)計(jì)：在顯微鏡下觀測三個不同的視野，凡被染成紅色或玫瑰紅的都是有生活力的花粉，黃色或不著色者為沒有生活力的花粉。

（２）培養(yǎng)基發(fā)芽法——固體培養(yǎng)基

①配制培養(yǎng)基：稱取1g瓊脂，5g蔗糖，量取94ml蒸餾水，裝入燒杯，加熱使瓊脂溶化呈透明狀（注意補(bǔ)充水分，以保持培養(yǎng)基的濃度），即配成5%濃度的培養(yǎng)基。同法配制10%、15%、20%濃度的培養(yǎng)基。

②制片：用滴管吸取少量培養(yǎng)基，趁熱滴在載玻片的凹槽內(nèi)，放置片刻，使其凝固。

③播種花粉：將少量花粉均勻地撒播在培養(yǎng)基上，注意不可過多，否則難以觀測。

④培養(yǎng)與觀測：將制備好的片子放在墊有潮濕濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，于20～22℃的溫箱中培養(yǎng)；待花粉萌發(fā)后于顯微鏡下觀測并統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率。觀測時(shí)每片隨機(jī)取三個視野，統(tǒng)計(jì)花粉總數(shù)及發(fā)芽數(shù)，計(jì)算平均萌發(fā)率（花粉總數(shù)不少于100粒）。

六、作業(yè)及思考題：１、按下表統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果。

用染色法計(jì)算花粉生活力(3-5個視野)。

花粉生活力(％)=有生活力花粉數(shù)／觀測花粉總數(shù)×100

染色法測定結(jié)果記載表

各視野中花粉粒數(shù)量及生活力平均花其中花粉花其中花其中生活粉