微生物檢測技術金黃色葡萄球菌檢測第1頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四主要內容金黃色葡萄球菌（GB4789.10-2010）大腸桿菌（GB4789.38-2012）沙門氏菌（GB4789.4—2010）副溶血性弧菌（GB4789.7—2013）第2頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四金黃色葡萄球菌檢驗p1531、生物學特性（重點）2、致病性3、流行病學4、國標檢驗方法（重點）5、快速檢測方法第3頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四1、生物學特性

1.1形態(tài)與染色金黃色葡萄球菌無芽孢，無鞭毛，大多數(shù)無莢膜革蘭氏染色陽性；典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。第4頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四第5頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四1.2培養(yǎng)特征易培養(yǎng)，對營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基中生長良好。需氧或兼性厭氧，在好氧條件下生長最好；大多數(shù)菌株能生長在6.5-46℃之間（最適溫度30-37℃）能在pH4.2-9.3之間生長（最適pH為6-7）；耐鹽性強，在含7～15%的氯化鈉培養(yǎng)基中仍能生長，可用于篩選菌種。第6頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四在普通營養(yǎng)瓊脂平板上培養(yǎng)18～24ｈ，可形成圓形、表面光滑、不透明的菌落?？僧a(chǎn)生金黃色色素，色素為脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落內，不滲至培養(yǎng)中。第7頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四溶血：紅細胞破裂，血紅蛋白逸出稱紅細胞溶解，簡稱溶血。溶血素是細菌分泌的一種毒性因子血平板：可形成完全透明溶血環(huán)（溶血）第8頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四細菌的溶血現(xiàn)象根據(jù)細菌對紅細胞的溶解能力可分為以下三種溶血類型及現(xiàn)象：α溶血:產(chǎn)生溶血素，不完全性溶血，在血瓊脂平皿上菌落周圍有1～2mm，較窄半透明的草綠色溶血環(huán)。β溶血:呈完全性溶血，在血平皿上菌落周圍有2～4mm寬、界限分明、無色透明的溶血環(huán)。γ溶血:不產(chǎn)生溶血素，在血瓊脂平皿上的菌落周圍無溶血環(huán)。第9頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四可產(chǎn)生卵磷脂酶，在卵黃高鹽培養(yǎng)基上形成周圍有白色沉淀環(huán)的菌落。第10頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四1.3生化反應大多數(shù)菌株分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。分解甘露醇，產(chǎn)酸。第11頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四2、致病性金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，為條件致病菌?？梢鹁植炕摳腥?，也可引起肺炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。第12頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四葡萄球菌皮膚感染第13頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四菌株致病力的強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：

a.溶血素：外毒素，分α、β、γ多種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；

b.殺白細胞素：可破壞人的白細胞和巨噬細胞；

c.血漿凝固酶：當金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關；

d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；

e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質性腸毒素，分為A、B、C、D、E五種。第14頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四2、致病性++++當金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時，經(jīng)8-10小時即可相當數(shù)量的腸毒素。腸毒素可耐受100度煮沸30min而不被破壞。人攝食該污染產(chǎn)品后2-3h便可出現(xiàn)中毒癥狀。其引起的食物中毒典型癥狀為嘔吐和腹瀉。第15頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四3、流行病學在自然界中廣泛存在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。作為人和動物的常見病原菌，其主要存在于人和動物的鼻腔、咽喉、頭發(fā)上，50%以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的機會很多。第16頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四

一般說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產(chǎn)生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴，運輸過程受到污染；奶?；蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r，對肉體其他部位的污染。金黃色葡萄球菌的流行病學第17頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四近年來，美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次于大腸桿菌。

++++金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。金黃色葡萄球菌的流行病學第18頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四4、GB4789.10—2010食品安全國家標準

食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗

1范圍本標準規(guī)定了食品中金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）的檢驗方法。本標準第一法適用于食品中金黃色葡萄球菌的定性檢驗；第二法適用于金黃色葡萄球菌含量較高的食品中金黃色葡萄球菌的計數(shù)；第三法適用于金黃色葡萄球菌含量較低而雜菌含量較高的食品中金黃色葡萄球菌的計數(shù)。第19頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四檢驗前準備工作采集與送檢預處理菌落總數(shù)大腸菌群致病菌純化分離培養(yǎng)前增菌多項鑒定及檢測實驗分析、報告食品微生物檢驗的一般程序第20頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四檢測步驟---增菌利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（可耐受15%的氯化鈉），用含7.5%氯化鈉肉湯蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g氯化鈉75g蒸餾水1000mL第21頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四檢測步驟---增菌或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯（污染嚴重時）胰酪胨（或胰蛋白胨）

17.0g植物蛋白胨（或大豆蛋白胨）

3.0g氯化鈉

100.0g磷酸氫二鉀

2.5g丙酮酸鈉

10.0g葡萄糖

2.5g蒸餾水

1000mL第22頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四檢測步驟---分離血平板：金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生溶血素，因此在血平板上產(chǎn)生明顯的溶血環(huán)。血平板上其典型菌落呈金黃色，有時也為白色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血圈。第23頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四血平板第24頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四Baird－Parker瓊脂平板(BP平板)胰蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g酵母膏1.0g丙酮酸鈉10.0g甘氨酸12.0g氯化鋰5.0g瓊脂20.0g蒸餾水950mL卵黃亞碲酸鉀增菌劑50mL

檢測步驟---分離第25頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四檢測步驟---分離BP平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和痕量礦物元素丙酮酸鈉、甘氨酸和氯化鋰是一種生長促進劑亞碲酸鹽對除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有毒性，并使菌落產(chǎn)生黑色卵黃提供營養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)第26頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四檢測步驟

---分離在BP平板上其典型菌落為：圓形，光滑突起，濕潤，直徑2-3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣常為淡色（米黃色或灰白色略帶灰色或黃色的白色），周圍為一混濁帶(沉淀環(huán))，在其外緣常有一透明圈。用接種針接觸菌落似有黃油樹膠的粘稠感。第27頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四B-P平板第28頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四檢測步驟---鑒定染色鏡檢金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生凝固酶，使血漿中纖維蛋白原轉變?yōu)槔w維蛋白，附著于細菌表面，產(chǎn)生凝固。因此對其鑒別的主要實驗是測定其凝固酶。第29頁，共32頁，2023年，2月20日，星期四血漿凝固酶試驗：

吸取1:4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL，振蕩搖勻，置36±1℃溫