[2015高考考綱解讀】

1.從生物材料中提取某些特定的成分II

2.植物的組織培養(yǎng)II

3.蛋白質(zhì)的提取和分離1【

4.PCR技術(shù)的基本操作和應(yīng)用I

[2014高考在線】

1.（2014?北京卷）在25℃的實(shí)驗(yàn)條件下可順利完成的是（）

A.光合色素的提取與分離

B.用斐林（本尼迪特）試劑鑒定還原糖

C.大鼠神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)

D.制備用于植物組織培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基

【答案析】A【解析】光合色素的提取和分離實(shí)蛉在常溫下進(jìn)行，即在25七的條件可順利完成，A項(xiàng)正

確。用斐林試劑鑒定還原糖實(shí)蛉中需要水浴加熱，才能出現(xiàn)植紅色沉淀，常溫條件下不發(fā)生反應(yīng)，B項(xiàng)錯(cuò)誤。

哺乳動(dòng)物和人類神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)的生存環(huán)境溫度是汽?二七，C項(xiàng)錯(cuò)誤。制備用于植物組織培養(yǎng)的固體培

養(yǎng)基的溫度一般是18?22七，D項(xiàng)錯(cuò)誤。

2.（2014?四川卷）下列有關(guān)實(shí)驗(yàn)方法或檢測試劑的敘述，正確的是（）

A.用改良苯酚品紅染色觀察低溫誘導(dǎo)的植物染色體數(shù)目變化

B.用健那綠和毗羅紅染色觀察DNA和RNA在細(xì)胞中的分布

C.用紙層析法提取菠菜綠葉中的色素和鑒定胡蘿卜素提取粗品

D.用標(biāo)志重捕法調(diào)查田鼠種群密度及農(nóng)田土壤小動(dòng)物的豐富度

t答案】A【解析】改良苯酚品紅染液是觀察細(xì)胞分裂時(shí)染色體形態(tài)的優(yōu)良染色劑，可用于染色體數(shù)目的觀

察，A項(xiàng)正確。健那綠是活細(xì)胞中線粒體染色的專一性染料，3項(xiàng)錯(cuò)誤。紙層析法可用來分高色素，而不能

提取色素，C項(xiàng)錯(cuò)誤。土壤小動(dòng)物由于個(gè)體小，活動(dòng)力強(qiáng)，不宜用標(biāo)志重捕法，常用取樣器取樣的方法進(jìn)行

采集、調(diào)查，D項(xiàng)錯(cuò)誤。

3.（2014?江蘇卷）下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.酵母和菜花均可作為提取DNA的材料

B.DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸儲(chǔ)水

C.向雞血細(xì)胞液中加蒸微水?dāng)嚢瑁梢姴０羯嫌邪咨鯛钗?/p>

D.DNA溶液加入二苯胺試劑沸水浴加熱，冷卻后變藍(lán)

【答案】C【解析】酵母和菜花都含DNA物質(zhì)，都可用來提取DNA,A項(xiàng)正確。DNA在0.14

mol/L的NaCI溶液中溶解度最小，所以DNA在2mol/L的NaCl溶液或者蒸儲(chǔ)水中都能溶解,

B項(xiàng)正確。雞血細(xì)胞加水?dāng)嚢瑁?xì)胞吸水漲破釋放出DNA,DNA存在于溶液中，C項(xiàng)錯(cuò)誤。

DNA與二苯胺在沸水浴條件卜反應(yīng)，冷卻后變藍(lán)，D項(xiàng)正確。

4.(2014?福建卷)［牛.物——現(xiàn)代生物科技專題］&歸2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞。

科研人員利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖：

分離,培養(yǎng)上皮細(xì)胞

(1)步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的。

(2)步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞。

(3)步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag2基因的表達(dá)教體。可以根據(jù)R"g2基因的設(shè)計(jì)引物,

利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段。用，山皿1和PsrI限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得汽咫2

基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有酶

的酶切位點(diǎn)。

(4)為檢測Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的，用抗蛋白的抗

體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)技術(shù)花藥離體培養(yǎng)技術(shù)

【答案】，①，細(xì)胞核

(2)囊胚

⑶核甘酸序列曲曲n和PsH

(4)蛋白質(zhì)

【解析】(1)步驟①是核移植過程，是將上皮細(xì)胞的細(xì)胞核移植到去核卵母細(xì)胞。

G)重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞。

(3)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其條件是模板D\A、據(jù)Rag：基因的核甘酸序列設(shè)計(jì)的引物、四種脫氧核

甘酸、熱穩(wěn)定DNA聚合酶等，欲獲得目的基因Rag:需要用小，411和P5JI兩種限制酶切割，所以選擇的表

達(dá)載體上應(yīng)具有引，疝H和Pal酶的酶切位點(diǎn)。

T)檢測Rag：基因是否表達(dá)成功就需要檢測有無Rag-基因表達(dá)產(chǎn)物，又據(jù)用抗Rag：蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)

驗(yàn)，所以應(yīng)提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測。

【重點(diǎn)知識(shí)梳理】

一、植物的組織培養(yǎng)技術(shù)

1.植物組織培養(yǎng)。

(1)原理：細(xì)胞的全能性。

理論依

植物細(xì)胞的全能性

據(jù)

相同基本過外植體f愈傷組織f叢芽f生根f移栽；無菌技術(shù)及接種操作基本相

點(diǎn)程同

影響因

選材、營養(yǎng)、激素、pH、溫度、光照等

素

不同選材體細(xì)胞生殖細(xì)胞(精子)

點(diǎn)生殖方

無性生殖有性生殖

式

(2)過程：脫分化和再分化。

2.植物組織培養(yǎng)技術(shù)和花藥離體培養(yǎng)技術(shù)的異同。

特別提醒：

(1)材料的選取：菊花的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝，該部分

不僅分生能力強(qiáng)，而且無病毒侵染。月季花粉的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)選擇花粉發(fā)育過程中的單核

靠邊期的花藥進(jìn)行培養(yǎng)，且在花蕾期，因?yàn)榇藭r(shí)質(zhì)地幼嫩，花瓣未開，微生物不易侵入，容

易消毒。

(2)剝離花藥時(shí)，盡量不要損傷花藥，同時(shí)要徹底去除花絲，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生干擾。

(3)外植體消毒：所用消毒劑為體枳分?jǐn)?shù)70%的酒精和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液，所使用

的清洗液是無菌水。

(4)培養(yǎng)過程：在初期，菊花的組織培養(yǎng)需光照，月季的花藥培養(yǎng)不需光照，而后期均需光照。

3.植物激素與組織培養(yǎng)。

生長素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素，其作用及特點(diǎn)為:

(1)在生長素存在的情況下，細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強(qiáng)的趨勢。

(2)使用順序不同，結(jié)果不同。

使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果

先使用生長素，后使用細(xì)胞分裂素有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不分化

先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長素細(xì)胞既分裂又分化

同時(shí)使用分化頻率提高

(3)用量比例不同，結(jié)果也不同。

/且［高：利于根的分化、抑制芽的形成

細(xì)蒜爹囂量的值'低：利于芽的分化、抑制根的形成

〔適中：促進(jìn)愈傷組織的生長

二、DNA的提取與鑒定

1.基本原理。

(l)DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低。

(2)DNA不溶于酒精溶液。

(3)DNA不被蛋白酶所水解。

(4)DNA在沸水浴條件下可被二苯胺染成藍(lán)色。

2.DNA與蛋白質(zhì)在不同NaCl溶液中溶解度不同。

2mol/L

0.14mol/LNaCl

NaCl溶解規(guī)律

溶液

溶液

1

V

DNA溶解析出

-------1--------A

0.14mol/LNaCl溶液

蛋白部分發(fā)生NaCl溶液從2mol/L降低過程中，溶解度逐漸增

溶解

質(zhì)鹽析沉淀大

3.DNA的析出與鑒定。

(1)析出：將處理后的溶液過濾，加入與濾液等體積的冷卻酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%)靜置2?

3min,溶液中會(huì)出現(xiàn)白色絲狀物(此即粗提取的DNA),且玻璃棒沿一個(gè)方向攪拌卷起絲狀物。

⑵鑒定:

比較加入物質(zhì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖示

實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)絲狀物(DNA),溶液逐漸

組變藍(lán)

均加入：①4mL二苯胺

咐照蝌-

試劑慫

對(duì)照

②2mol/LNaCl溶液5mL

不變藍(lán)

組i

三、蛋白質(zhì)的提取與分離

1.常用的分離蛋白質(zhì)的方法。

蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)如形狀、大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)、親和力等千

差萬別，由此可提取和分離各種蛋白質(zhì)。常用的分離蛋白質(zhì)的方法有凝膠色譜法、凝膠電泳

法等。

(1)凝膠色譜法的原理：相對(duì)分子質(zhì)量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快；

相對(duì)分子質(zhì)量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長，流動(dòng)慢。

(2)凝膠電泳法的原理：不同蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)、電量、形狀和大小不同，在電場中受到的作

用力大小、方向、阻力不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場中的運(yùn)動(dòng)方向和運(yùn)動(dòng)速度不同。

2.血紅蛋白的提取和分離程序。

(1)樣品處理：

①紅細(xì)胞的洗滌：除去雜蛋白，以利于后續(xù)步驟的分離純化。

②血紅蛋白的釋放：使紅細(xì)胞破裂，血紅蛋白釋放出來。

③分離血紅蛋白溶液：經(jīng)過離心使血紅蛋白和其他雜質(zhì)分離開來，便于下,步對(duì)血紅蛋白的

純化。

(2)粗分離——透析：除去樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)。

(3)純化：一般采用凝膠色譜法對(duì)血紅蛋白進(jìn)行分離和純化。

(4)純度鑒定：一般用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法來測定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量，即對(duì)血紅蛋

白進(jìn)行純度鑒定。

特別提醒：

(1)人和哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中不含細(xì)胞核，也沒有DNA,不適于作DNA提取的材料?，但

卻是提取血紅蛋白的理想材料。

(2)紅細(xì)胞洗滌過程中，洗滌3次后，上清液仍有黃色，可增加洗滌次數(shù)，否則無法除去血漿

蛋白。離心時(shí)轉(zhuǎn)速要低，時(shí)間要短，否則白細(xì)胞等會(huì)同沉淀，達(dá)不到分離效果。

(3)血紅蛋白釋放過程中，蒸儲(chǔ)水的作用是漲破紅細(xì)胞，甲苯的作用主要是溶解細(xì)胞膜。

四、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段

1.細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制與體外DNA擴(kuò)增(PCR技術(shù))的比較。

細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制PCR

80~100℃高溫解旋，雙鏈

解旋解旋酶，邊解旋邊復(fù)制

完全分開

酶解旋酶，DNA聚合酶，DNA連接酶TaqDNA聚合酶

不引物RNADNA或RNA

同能量ATP不加

點(diǎn)

溫度體內(nèi)溫和條件高溫

一條鏈連續(xù)(先導(dǎo)鏈)，另一條鏈不連

子鏈

續(xù)，先合成片段，再由DNA連接酶兩條子鏈均連續(xù)合成

合成

連接(滯后鏈)

細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制PCR

相①提供DNA模板

同②4種脫氧核甘酸作原料

點(diǎn)③子鏈延伸的方向都是從5'端到3'端

2.PCR反應(yīng)的過程及結(jié)果。

(l)PCR反應(yīng)過程：

①變性：當(dāng)溫度上升到90C以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈，如圖:

5JI1..I.H1.I11.llj

約95工

..........................5'5'...........................3,

②復(fù)性：系統(tǒng)溫度下降至50℃左右時(shí)，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合,

如下圖：

y-JJ-U-Ll''1115,5,1'^（ILLLUly

引物I引物口

③延伸：當(dāng)系統(tǒng)溫度上升至72℃左右，溶液中的4種脫氧核甘酸（A、T、G、C）在DNA聚合

酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成新的DNA鏈，如下圖：

5JII1111111yy-ULLlLLLlJJ-Ly

引物i引物n

（2）結(jié)果：

①PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)都包括變性、復(fù)性、延伸三步。

②兩引物之間的固定長度的DNA序列呈指數(shù)擴(kuò)增。

特別提醒：

DNA復(fù)制需要引物的原因：DNA聚合酶不能從5,端開始合成DNA,而只能從3,端延伸DNA

鏈。

【高頻考點(diǎn)突破】

考點(diǎn)一、植物的組織培養(yǎng)技術(shù)

【例1】下列關(guān)于影響植物組織培養(yǎng)的因素的敘述不正確的是（）

A.幼嫩組織較成熟組織易培養(yǎng)成功

B.給外植體消毒用70%的酒精

C.接種花藥后一段時(shí)間內(nèi)不需要光照，但幼小植株形成后需要光照

D.生長素與細(xì)胞分裂素含量之比較高時(shí)有利于芽的分化

解析：生長素與細(xì)胞分裂素含量之比較高時(shí)，有利于根的分化；較低時(shí)，有利于芽的分化；

二者相當(dāng)時(shí)，促進(jìn)愈傷組織的生長。

答案：D

【舉一反三】下列有關(guān)植物組織培養(yǎng)的敘述中，正確的是（）

A.愈傷組織是一團(tuán)有特定結(jié)構(gòu)和功能的薄壁細(xì)胞

B.二倍體植株的花粉經(jīng)脫分化與再分化后得到穩(wěn)定遺傳的植株

C.用人工薄膜將胚狀體、愈傷組織等分別包裝可制成人工種子

D.植物耐鹽突變體可通過添加適量NaCl的培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選而獲得

解析：在普通培養(yǎng)基中添加適量的NaCl,制成選擇培養(yǎng)基，可用來篩選植物耐鹽突變體，故選項(xiàng)D正確。

愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞；二倍體植株的花粉經(jīng)

離體培養(yǎng)后得到單倍體植株，該單倍體高度不肓，不能穩(wěn)定遺傳：用人工懣膜將胚狀體等進(jìn)行包裝可制成

人工種子，愈傷組織不能作為制作人工種子的材料，故選項(xiàng)A、B、C錯(cuò)誤。

答案：D

考點(diǎn)二、DNA的提取與鑒定

【例2】在利用雞血進(jìn)行“DNA的粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)中，相關(guān)敘述中正確的是（）

A.用蒸儲(chǔ)水將NaCl溶液濃度調(diào)至0.14mol/L,濾去析出物

B.調(diào)節(jié)NaCl溶液濃度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分雜質(zhì)

C.將絲狀物溶解在2moi/LNaCl溶液中，加入二苯胺試劑即呈藍(lán)色

D.用菜花替代雞血作為實(shí)驗(yàn)材料，其實(shí)驗(yàn)操作步驟相同

解析：用蒸儲(chǔ)水將NaCl溶液濃度調(diào)至0.14mol/L時(shí)，濾取析出物；將絲狀物溶解在2moi/L

的NaCl中，加入二苯胺試劑，需沸水浴加熱幾分鐘，才呈藍(lán)色；用菜花替代雞血為實(shí)驗(yàn)材料，

需要對(duì)材料的細(xì)胞壁進(jìn)行處理。調(diào)節(jié)NaCl溶液濃度改變不同物質(zhì)在其中的溶解度，加入木瓜

蛋白酶分解蛋白質(zhì)都可以去除部分雜質(zhì)，故B正確。

答案：B

【舉一反三】DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，而細(xì)胞中

的某些物質(zhì)溶于酒精溶液。下圖“DNA的粗提取”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)操作步驟，其操作目的錯(cuò)誤的是

()

蒸福成、95%酒精

黏稠物附

含DNA的I

雞血細(xì)-2mol/L含DNA的」

濃NaCl溶液「NaCl溶滬=

胞液濃NaCl溶液

①②③④

A.①是洗滌紅細(xì)胞，去除紅細(xì)胞表面的雜質(zhì)

B.②是稀釋NaCl溶液至0.14mol/L,析出DNA

C.③是選用2moi/LNaCl溶液，溶解黏稠物中的DNA

D.④是純化DNA,去除溶于95%酒精的雜質(zhì)

解析：①過程是讓雞血細(xì)胞吸水漲破釋放出DNA；②是降低NaCl溶液的濃度，析出DNA：

③是對(duì)析出的DNA再溶解，除去不溶于2moi/LNaCl溶液中的雜質(zhì)；④用95%的酒精析出

DNAo

答案：A

考點(diǎn)三、蛋白質(zhì)的提取與分離

【例3】以下關(guān)于豬血紅蛋白提純的描述中，不正確的是（）

A.洗滌紅細(xì)胞時(shí)，使用生理鹽水可防止紅細(xì)胞破裂

B.豬成熟紅細(xì)胞中缺少細(xì)胞器和細(xì)胞核，提純時(shí)雜蛋白較少

C.血紅蛋白的顏色可用于凝膠色譜法分離過程的監(jiān)測

D.在凝膠色譜法分離過程中，血紅蛋白比分子量較小的雜蛋白移動(dòng)慢

解析：豬成熟紅細(xì)胞中玦少細(xì)胞器和細(xì)胞核，提純時(shí)雜蛋白校少，是提純血紅蛋白的理想材料。提純血紅

蛋白分四步：紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶淹、透析，其中洗滌紅細(xì)胞時(shí)，要用生理

鹽水反復(fù)洗滌，既要將紅細(xì)胞洗滌干凈，又要不破壞紅細(xì)胞，然后再用薯儲(chǔ)水和甲苯使紅細(xì)胞破裂，釋放

出血紅蛋白。分離提純血紅蛋白時(shí)用凝膠色譜法，是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來分離蛋白質(zhì)，相對(duì)分子質(zhì)

量大的蛋白質(zhì)移動(dòng)速度較快；血紅蛋白的顏色可用于觀察紅色區(qū)帶的移動(dòng)情況，并據(jù)此判斷分離效果。故D

不正確。

答案:D

【舉一反三】雙選）在血紅蛋白的提取和分離實(shí)驗(yàn)中，下列操作正確的是（）

A.分離紅細(xì)胞時(shí)需去除上層透明的黃色血漿

B.紅細(xì)胞釋放出血紅蛋白時(shí)只需加入蒸儲(chǔ)水

C.分離血紅蛋白溶液是低速短時(shí)間離心

D.洗脫時(shí)，待紅色蛋白質(zhì)接近色譜底端時(shí)，用試管收集流出液

解析：血紅蛋白的釋放：加蒸鐳水到原血液的體積，再加40%體積的甲苯，充分?jǐn)嚢?0min,

紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白；分離血紅蛋白溶液是以2000r/min的速度離心10min,從而將

溶液分成四層。

答案：AD

考點(diǎn)四、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段

【例4】多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。PCR過程一般經(jīng)歷

三十多次下述循環(huán)：95℃條件下使模板DNA變性、解鏈一55℃條件下復(fù)性（引物與DNA模

板鏈結(jié)合）-72℃條件下引物鏈延伸（形成新的脫氧核甘酸鏈）。下列有關(guān)PCR過程的敘述，不

正確的是（）

A.變性過程中破壞的是DNA分子內(nèi)堿基對(duì)之間的氫鍵，也可利用解旋能實(shí)現(xiàn)

B.復(fù)性過程中引物與DNA模板鏈的結(jié)合是依靠堿基互補(bǔ)配對(duì)原則完成的

C.延伸過程中需要DNA聚合酶、ATP、4種核糖核甘酸

D.PCR與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制相比，其所需要酶的最適溫度較高

解析：PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，每次循環(huán)可以分為變性、復(fù)性和延伸三步。從第二輪循環(huán)開始，上

一次循環(huán)的產(chǎn)物也作為模板參與反應(yīng)，并且由引物I延伸而成的D\A單璉會(huì)與引物H結(jié)合，進(jìn)行DNA的

延伸。DNA變性（9。?95七）：雙捱DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單椎DNA。復(fù)性（55?65七）：

系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙推。延伸??乃七）：在預(yù)酶I在72t!左右活性最高）

的作用下，以4TP（三磷酸脫氧核糖核苜酸的縮寫）為原料，從引物的5,端向3端延伸，合成與模板鏈互補(bǔ)

的DNA鏈。

答案：C

:舉一反三】標(biāo)準(zhǔn)的PCR過程一般分為變性、復(fù)性、延伸三大步，這三大步需要的溫度依次

是（）

A.94℃、55°C、72℃

B.72℃>50℃、92℃

C.50°C、92℃、72℃

D.80℃、50℃、72℃

解析：當(dāng)溫度上升到9413（90-95七）左右時(shí)，雙鏈DNA解聚為單璉，稱之為變性；當(dāng)溫度下降到55七

（55-60七）左右時(shí)，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單避DNA結(jié)合，稱為復(fù)性;當(dāng)溫度上升到72七（70?

7$七）左右時(shí)，溶液中的四種脫氧核苜酸（A、T、C\G）在預(yù)DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原

則合成新的DNA鏈，稱為延伸。

答案：A

【高考真題解析】

1.（2012?江蘇高考，18）下列關(guān)于“DNA粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是（）

A.洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度

B.將DNA絲狀物放入二苯胺試劑中沸水浴后冷卻變藍(lán)

C.常溫下菜花勻漿中有些酶類會(huì)影響DNA的提取

D.用玻棒緩慢攪拌濾液會(huì)導(dǎo)致DNA獲得量減少

解析洗滌劑可瓦解植物細(xì)胞膜，利于釋放DXA，但不能增加DNA在NaC：溶液中的溶解度，A項(xiàng)錯(cuò)誤：

合DNA的絲狀物應(yīng)先溶解在物質(zhì)的量為2moiL的NaC：溶灑卬,再加入二苯胺試劑在沸水浴條件下檢測，

冷卻后觀察變成藍(lán)色，B項(xiàng)錯(cuò)誤；用玻璃棒緩慢攪拌濾港可使DNA分子充分溶解，可提高DNA的獲得量，

D項(xiàng)錯(cuò)誤。菜花勻漿中含有多種酶，可影響到的提取，C項(xiàng)正確。

答案C

2.（2013?海南，30）根據(jù)生物相關(guān)知識(shí)，回答胡蘿卜素提取和酶應(yīng)用方面的問題：

（1）從胡蘿卜中提取胡蘿卜素時(shí)，通常在萃取前將胡蘿卜粉碎和,以提高萃取效率；

水蒸氣蒸播法（填"適合”或"不適合"）胡蘿卜素的提取，原因是;鑒定萃取物

中是否含有胡蘿卜素時(shí)，通常可采用法，并以樣品作為對(duì)照。

（2）若要提高衣物上血漬的去除效果，可在洗衣粉中加入酶，因?yàn)樵撁改軐⒀t蛋白

水解成可溶性的和;若要提高衣物上油漬的去除效果，洗衣粉中可添加

酶；使用加酶洗衣粉時(shí)，水溫過低或過高洗滌效果不好的原因分別是。

答案（1）干燥不適合水蒸氣蒸偌法適用于蒸儲(chǔ)揮發(fā)性物質(zhì)，而胡蘿卜素為非揮發(fā)性物質(zhì)，不能隨水蒸

氣蒸儲(chǔ)出紙層析標(biāo)準(zhǔn)的胡蘿I、素（2）堿性蛋白（或蛋白）氨基酸小分子肽脂肪水溫過低時(shí)酶活

性較低，水溫過高會(huì)使酶變性失活

解析（D萃取是將粉碎、干燥的植物原料用有機(jī)溶劑浸泡，使芳香油溶解在有機(jī)溶劑中。水蒸氣蒸儲(chǔ)法是

植物芳香油提取的常用方法，它的原理是利用水蒸氣將揮發(fā)性較強(qiáng)的芳香油攜帶出來，形成油水混合物，

冷卻后，混合物又會(huì)重新分出油層和水層。胡蘿I，素粗品通過紙層析法進(jìn)行鑒定，如果萃取樣品中出現(xiàn)了

和標(biāo)準(zhǔn)樣品一樣的層析帶，說明提取胡蘿I、素的實(shí)瞼成功。

仁）血漬中含有蛋白質(zhì)，可用含蛋白酶的洗衣粉洗滌。其原理是蛋白酶能將蛋白質(zhì)分解為小分子的肽和氨基

酸。油漬的主要成分是脂肪，需用含脂肪商的洗衣粉。水溫過低抑制酶的活性，水溫過高會(huì)使酶變性失活。

3.（2011?高考海南卷）許多植物含有天然香料，如薄荷葉中含有薄荷油。現(xiàn)用薄荷葉提取薄荷

油。回答問題：

⑴薄荷油是揮發(fā)性物質(zhì)，提取薄荷油忖應(yīng)選用（鮮、干）薄荷葉作原料，其原因是

___________________________________________________________________________O

（2）用萃取法提取薄荷油時(shí)，采用的溶劑是,原理是

___________________________________________________________________________O

⑶用水蒸氣蒸鐳法提取薄荷油時(shí)，在油水混合物中加入氯化鈉的作用是

。常用于分離油層和水層的器皿是o分離出的油層中加

入無水硫酸鈉的作用是,除去固體硫酸鈉的常用方法是。

解析：本題考查有關(guān)提取薄荷油的知識(shí)。⑴因?yàn)槠押捎褪菗]發(fā)性物質(zhì)，所以應(yīng)選取鮮薄荷葉作為提取材料。

⑵用萃取法提取蒲荷油時(shí)，應(yīng)選用有機(jī)溶劑，因?yàn)楸『捎鸵兹苡谟袡C(jī)溶劑。⑶用水蒸氣蒸儲(chǔ)法提取薄荷油

時(shí)，在油水混合物中加入氯化鈉的作用是增加鹽濃度，促進(jìn)油水分層，常用于分離油層和水層的器皿是分

液漏斗。分離出的油層中加入無水硫酸鈉吸掉水分后再用過濾法除去固體硫酸鈉。

答案：⑴鮮薄荷葉中薄荷油易揮發(fā)

⑵有機(jī)溶劑薄荷油易溶于有機(jī)溶劑

⑶增加鹽濃度，促進(jìn)油水分層分液漏斗啜水過濾

【當(dāng)堂鞏固】

1.下列有關(guān)花藥離體培養(yǎng)，說法錯(cuò)誤的是（）

A.對(duì)材料的選擇最常用的方法是焙花青一銘機(jī)法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色

B.材料消毒時(shí)需先用酒精浸泡，然后用氯化汞或次氯酸鈣溶液浸泡，最后用無菌水沖洗

C.接種花藥后一段時(shí)間內(nèi)不需要光照，但幼小植株形成后需要光照

D.若接種的花藥長出愈傷組織或釋放出胚狀體后，要適時(shí)轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基，以便進(jìn)一步分化成再

生植株

解析：確定花粉發(fā)育的時(shí)期最常用的方法是醋酸洋紅法，有些植物細(xì)胞核不易著色時(shí)，需采

用焙花青一倍磯法。

答案：A

2.植物組織培養(yǎng)中的“脫分化”過程是指（）

A.已休眠的種子經(jīng)過處理使種子盡快萌發(fā)的過程

B.植物根尖、莖尖等處分生組織細(xì)胞有絲分裂產(chǎn)生新細(xì)胞后分化為各種組織

C.愈傷組織細(xì)胞分化為根與芽的過程

D.離體的植物組織、細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生愈傷組織的過程

解析：脫分化指讓已經(jīng)分化的細(xì)胞，經(jīng)過誘導(dǎo)后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化

細(xì)胞的過程。A、B、C都是細(xì)胞分裂、分化的過程。

答案：D

3.下列關(guān)于細(xì)胞全能性的理解，錯(cuò)誤的是（）

A.大量的科學(xué)事實(shí)證明，高度分化的植物細(xì)胞仍具有全能性

B.細(xì)胞內(nèi)含有個(gè)體發(fā)育所需的全部基因是細(xì)胞具有全能性的內(nèi)在條件

C.通過植物組織培養(yǎng)得到的試管苗，是植物細(xì)胞在一定條件下表現(xiàn)全能性的結(jié)果

D.通過動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)獲得細(xì)胞株或細(xì)胞系，證明了動(dòng)物體細(xì)胞也體現(xiàn)出了全能性

解析：動(dòng)物體細(xì)胞大部分為高度分化的細(xì)胞，其全能性受到了限制，只有其細(xì)胞核在一定條

件下可表現(xiàn)全能性。全能性的體現(xiàn)要看是否產(chǎn)生了新個(gè)體。

答案：D

4.紅細(xì)胞中含有大量血紅蛋白，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動(dòng)物的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來

提取和分離血紅蛋白。下列對(duì)血紅蛋白提取和分離的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.血紅蛋白提取和分離一般按照“樣品處理一粗分離一純化—純度鑒定”的順序進(jìn)行

B.純化過程中要用生理鹽水充分溶脹凝膠來配制凝膠懸浮液

C.粗分離時(shí)透析的目的是去除相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)

D.可經(jīng)SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定

解析：蛋白質(zhì)的提取和分禽一般分為四步：樣品處理,粗分離、純化和純度鑒定。提取和分離血紅蛋白時(shí),

苜先通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放'離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品處理；其次通過透析法

除去相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；再次通過凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量較大的雜蛋白除去,

即樣品純化，純化過程中凝膠應(yīng)用蒸僧水充分溶脹后，配制成凝膠懸浮液，而不是用生理鹽水;最后經(jīng)SDJ

聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。

答案：B

5.下列有關(guān)植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)的敘述中，錯(cuò)誤的是（）

A.花藥、胚不能作為組織培養(yǎng)的材料

B.植物細(xì)胞具有全能性

C.外植體是指用于培養(yǎng)的植物組織或器官

D.外植體可誘導(dǎo)出愈傷組織

解析：考查植物組織培養(yǎng)的過程和原理。植物的器官、組織和細(xì)胞以及花藥均可作為組織培

養(yǎng)的外植體。故A項(xiàng)不正確。

答案：A

6.在采用雞血為材料對(duì)DNA進(jìn)行粗提取的實(shí)驗(yàn)中，若需進(jìn)一步提取雜質(zhì)較少的DNA,可以依

據(jù)的原理是（）

A.在物質(zhì)的量濃度為0.14mol/L的氯化鈉溶液中DNA的溶解度最小

B.DNA遇二苯胺在沸水浴的條件下會(huì)染成藍(lán)色

C.DNA不溶于酒精而細(xì)胞中的一些物質(zhì)易溶于酒精

D.質(zhì)量濃度為0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液具有抗凝血作用

解析：考查了DNA粗提取的實(shí)驗(yàn)原理。①DNA在氯化鈉溶液中的溶解度，是隨著氯化鈉濃度

的變化而變化的。當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0.14mol/L時(shí)，DNA的溶解度最低。利用這一原

理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出。②DNA不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些物

質(zhì)則可以溶于酒精。利用這?原理，可以進(jìn)一步提取H1含雜質(zhì)較少的DNA。③DNA遇二苯胺（沸

水浴）會(huì)染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

答案：C

7.關(guān)于血紅蛋白的提取和分離操作不正確的是（）

A.色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，一旦發(fā)現(xiàn)有氣泡，必須重裝

B.凝膠用自來水充分溶脹后，配成凝膠懸浮液

C.為加快凝膠膨脹，可以將加入洗脫液的濕凝膠用沸水浴加熱，逐漸升溫至沸騰，通常只需

1?2h

D.在血紅蛋白提取過程中，不斷用磷酸緩沖液處理，是讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，

維持其結(jié)構(gòu)和功能

解析：由于本題中用到的是商品凝膠，為干燥的顆粒，使用前需要用蒸儲(chǔ)水充分溶脹后，配成凝膠懸浮液,

再用洗脫酒進(jìn)行充分洗滌平衡，使凝膠裝填緊密，也可在沸水浴中加熱膨脹，可節(jié)約時(shí)間，除去凝膠中微

生物，排除膠粒內(nèi)空氣。

答案：B

8.用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過程中，關(guān)于蛋白質(zhì)的敘述，正確的是（）

A.相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程大于相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)

B.相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程小于相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)

C.相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程等于相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)

D.兩者無法比較

解析：相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)擴(kuò)散進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)，所以行程長；而相對(duì)分子質(zhì)量較大

的蛋白質(zhì)則被排阻在顆粒之外，所以行程短。

答案：A

9.玫瑰精油提取的過程是（）

A.鮮玫瑰花+水一水蒸氣蒸儲(chǔ)一油水混合物一分離油層一除水

B.鮮玫瑰花+水一油水混合物-水蒸氣蒸鐳一分離油層一除水

C.鮮玫瑰花+水-油水混合物t除水一分離油層

D.鮮玫瑰花+水一油水混合物一水蒸氣蒸譙一除水

解析：玫瑰精油提取的實(shí)驗(yàn)流程是：鮮玫瑰花+水一水蒸氣蒸僧一油水混合物一分離油層一

除水。

答案：A

10.下列有關(guān)胡蘿卜素的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.胡蘿卜素是化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，溶于水，不溶于乙醇的物質(zhì)

B.胡蘿卜是提取天然p-胡蘿卜素的原料

C.微生物的發(fā)酵生產(chǎn)是工業(yè)提取0-胡蘿卜素的方法之一

D.提取后，干燥過程中，時(shí)間不能太長，溫度不能太高

解析：胡蘿卜素的化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油酸等有機(jī)溶劑。

答案：A

11.下列有關(guān)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)原理和技術(shù)操作的敘述中，正確的是（）

A.提取細(xì)胞中的DNA和蛋白質(zhì)都必須用蒸緇水漲破細(xì)胞

B.研究某遺傳病的遺傳方式，一定要調(diào)查患者家系的情況

C.與利用鮮酵母相比，等量酵母菌制成的凝膠珠發(fā)酵生產(chǎn)酒精更迅速

D.用顯微鏡觀察細(xì)胞時(shí)，若細(xì)胞為無色透明，可調(diào)節(jié)通光孔使視野暗一些

解析：提取細(xì)胞中的DNA利蛋白質(zhì)可以用研磨后離心分離等方法；酵母菌制成的凝膠珠可重

復(fù)利用，但發(fā)酵較慢。通光孔的大小是固定的，無法調(diào)節(jié)，可以通過調(diào)節(jié)光圈和反光鏡使視

野變暗。

答案：B

12.下列關(guān)于實(shí)驗(yàn)敘述中，不正確的是（）

A.血紅蛋白的提取和分離實(shí)驗(yàn)中使用的交聯(lián)葡聚糖凝膠G-75,其中“75”表示每克凝膠膨脹時(shí)

吸水7.5克

B.在色素的提取和分離的實(shí)驗(yàn)中，葉綠素b在層析液中的溶解度最低，擴(kuò)散速度最慢

C.用洋蔥作實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)時(shí)，加入一定的食鹽的目的是有利于溶解

DNA

D.制取細(xì)胞膜、血紅蛋白的提取和分離均以雞血細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)材料

解析：血紅蛋白的提取和分離以雞血細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)材料；制取細(xì)胞膜不能用雞血細(xì)胞，雞血

細(xì)胞有核膜。

答案：D

13.草莓生產(chǎn)上傳統(tǒng)的繁殖方式易將所感染的病毒傳播給后代，導(dǎo)致產(chǎn)量降低、品質(zhì)變差。

運(yùn)用微型繁殖技術(shù)可以培育出無病毒幼苗。草莓微型繁殖的基本過程如下：

外植體一工愈傷組織上二芽根一＞植株

請(qǐng)回答：

⑴微型繁殖培育無病毒草售時(shí)，-一般選取作為外植體，其依據(jù)是

(2)在過程①中，常用的MS培養(yǎng)基主要成分包括大量元素、微量元素和,在配制好的

培養(yǎng)基中，常常需要添加,有利于外植體啟動(dòng)細(xì)胞分裂形成愈傷組織。接種后2?5d,

若發(fā)現(xiàn)外植體邊緣局部污染，原因可能是。

⑶在過程②中，愈傷組織在誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基中未形成根，但分化出了芽，其原因可能是

解析：⑴植物組織培養(yǎng)時(shí)常采用根尖或莖尖部位，原因是該部位含病毒極少。

⑵MS培養(yǎng)基的成分包括大量元素、微量元素和有機(jī)物，在配制好的培養(yǎng)基中，常需要添加生長素和細(xì)胞分

裂素等植物激素。植物組織培養(yǎng)也應(yīng)注意無菌操作。

⑶生長素與細(xì)胞分裂素的比例低時(shí)有利于芽的分化，生長素與細(xì)胞分裂素的比例高時(shí)有利于根的分化。

答案：⑴莖尖域根尖j'莖尖(或根尖病毒極少，甚至無病毒

⑵有機(jī)物植物激素外植體消毒不徹底

⑶培養(yǎng)基中生長素類物質(zhì)用量與細(xì)胞分裂素類物質(zhì)用量的比值偏低

14.根據(jù)PCR反應(yīng)系統(tǒng)模式圖回答下列問題：

|微htDNA樣

D\A互補(bǔ))分開為單鏈片