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文檔簡介
測量指標:光密度與藻類生長量的對應關系藻類生長濃度測定將處于對數生長期的蛋白核小球藻和斜生柵藻接種到100mL錐形瓶中,試驗初始藻細胞密度約?個?mL-1,總體積100mL,抗生素濃度設置分別為0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、80、160mg?L-1,各濃度均設3個平行.于抗生素中暴露0h,24h,48h,96h,后分光光度法計量細胞數量藻類葉綠素熒光測定藻類在抗生素在暴露接觸96小時,通過便攜式葉綠素熒光儀進行測定,測定前避光15分鐘。超氧化物歧化酶測定超氧化物歧化酶Orgotein(SuperoxideDismutase,SOD),別名肝蛋白、簡稱:SOD。SOD是一種源于生命體的活性物質,能消除生物體在新陳代謝過程中產生的有害物質。對人體不斷地補充SOD具有抗衰老的特殊效果。有測定超氧化物歧化酶的試劑盒超氧化物歧化酶測定前處理:藻類在抗生素在暴露接觸96小時,進行測定超氧化物歧化酶前,先要進行藻類的收集,本研究采取的方法是告訴離心收集法:吸取25ml的藻液,溫度4°C,轉速10000R\min,離心10min,倒掉上清液,加入0.05M磷酸緩沖液5mL(pH7.8)0.05mol/LNaHPO溶液:稱取NaHPO.12HO17.9g溶于1L水中TOC\o"1-5"\h\z242420.05mol/LNaHPO溶液:稱取NaHPO.2HO7.8g溶于1L水中24242pH7.8的0.05M磷酸緩沖液:0.05mol/LNaHPO溶液8.5mL+0.05mol/LNaHPO溶2424液91.5mL利用快速混勻器將藻重新懸浮于磷酸緩沖液中,利用快速冷凍解凍法(放在-80C冰箱中10mim,常溫自來水沖洗?)破壞藻類細胞,該過程重復三次,然后再溫度為4攝氏度,轉速10000R\min,離心8分鐘收集上清液用于超氧化物歧化酶的測定。測定步驟分光光度計預熱30min以上,調節波長至560nm,蒸餾水調零測定前將試劑1,試劑2和試劑4在25C水浴5min以上在EP管中加入下列試劑注意:應該注意的是試劑2為懸濁液,注意混勻后加入試劑3為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置,必須最后加入每個樣品有個對照管,空白1和空白2各需要做1或2管充分混勻,室溫靜置30min后加入1mL玻璃比色皿,在560nm測定各管的吸光值試劑名稱測定管對照管空白管1空白管2試劑1(口)240240240240試劑2(口)510510510510試劑4(口)180180180180樣品(山9090蒸餾水(口)69096?試劑3(山63.SOD活性計算按照細菌或者細胞個數計算SOD活力(U/104cell)二[抑制百分率/(1-抑制百分率)*V反總]/(500*V樣/V總樣)*樣本稀釋倍數=0.0228*抑制百分率/(1-抑制百分率)*抑制百分率抑制百分率抑制百分率二(小-△A)/△A*100%盡量使抑制百分率在空白測定空白30%-70%范圍內,越靠近50%約準確,否則需要調整加樣量后重新測定。丙二醛(MDA)生物體內,自由基作用于脂質發生過氧化反應,氧化終產物為丙二醛,會引起蛋白質、核酸等生命大分子的交聯聚合,且具有細胞毒性。MDA是膜脂過氧化最重要的產物之一,它的產生還能加劇膜的損傷因此在植物衰老生理和抗性生理研究中MDA含量是一個常用指標,可通過MDA了解膜脂過氧化的程度,以間接測定膜系統受損程度以及植物的抗逆性。測定原理:丙二醛在高溫及酸性條件下可與2-流代巴比妥酸(TBA)反應產生紅棕色的產物三甲川,該物質在523mm處有一吸收高峰,并在660mm處有較小的吸收。根據532nm的消光值可以計算出溶液中丙二醛的含量,醛和可溶性糖對此反應有干擾,在450nm處有一吸收峰,可用雙組分光光度法加以排除需要的試劑有:5%三氯醋酸(TCA)0.5%流代巴比妥酸(用三氯醋酸溶解定容)0.05mol/L磷酸緩沖溶液pH7.8檢測過程:在提取液中加入5mL的5%的流代巴比妥酸,搖勻;將試管放入沸水中水浴10min(自試管內溶液中出現小氣泡開始計時)到時間后,立即將試管取出并放在冷水中水浴;待試管內溶液冷卻后。3000r離心15min,取上清液并量其體積,以5%流代巴比妥酸溶液為空白測523nm,600nm,450nm處的消光值公式:MDA(mmol/gFW)二[6.452*(D-D)-0.559*D]*V/V*W523600450ts式中vt:提取液總體積(mL)Vs:測定用提取液體積(mL)FW:樣品鮮重(是液體的怎么計算)前處理:藻類在抗生素在暴露接觸96小時,進行測定超氧化物歧化酶,丙二醛,測定超氧化物歧化酶丙二醛前,先要進行藻類的收集,本研究采取的方法是告訴離心收集法:吸取25ml的藻液,溫度4°C,轉速10000R\min,離心10min,倒掉上清液,加入0.05M磷酸緩
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