微生物檢驗細菌消毒滅菌技術任務目標

1、掌握：細菌控制的常用方法；常用物理控制法的類型、用途。

2、熟悉：化學控制的種類、機制及影響因素。3、了解：噬菌體的概念、組成、與宿主的關系。

一、基本概念1、消毒殺滅物體上病原微生物的方法,不一定殺

死芽胞。2、滅菌殺滅物體上所有微生物的方法，包括病原微生物、非病原微生物及芽胞。3、防腐

防止或抑制細菌生長繁殖的方法。細菌一般不死亡。34、無菌操作無菌：不含活菌無菌操作：

防止微生物進入機體或污染物體的操作技術外科手術微生物實驗抽血4二、物理因素（一）溫度

原理：高溫使菌體蛋白變性或凝固，酶類失去活性，代謝障礙致細菌死亡。干熱滅菌濕熱滅菌

同一溫度下,濕熱比干熱好61.干熱滅菌法焚燒：廢棄物品，紙張、尸體燒灼：接種環、試管口干烤：干烤箱160°C～170°C/2h殺死芽胞，耐高溫、耐干燥物品，如玻璃制品（培養皿）7滅菌徹底，但僅適用于無經濟價值的物品，如廢棄的污染物或死于傳染病的人和動物尸體。將待滅菌的物品直接放于火焰中灼燒，如微生物實驗使用的接種環、接種針、試管口等多用此法滅菌。此法適用于耐高溫的物品，如玻璃器皿、瓷器、某些粉劑藥品、凡士林等，滅菌時一般加溫至160～170℃，維持2～3小時。滅菌結束后，應關閉電源，待溫度慢慢降至60℃左右時再開啟箱門，以免高溫度器皿的玻璃因驟冷而破裂。2.濕熱滅菌法高壓蒸氣滅菌法巴氏消毒法流通蒸氣消毒法間歇蒸氣滅菌法煮沸法11⑴高壓蒸氣滅菌法高壓蒸氣滅菌器121.3°C/20min,1.05kg/cm2（103.4kPa）是最常用最有效的滅菌方法用途：耐高溫、耐高壓、耐潮濕物品

手術衣、手術器械、紗布敷料、生理鹽水、玻璃制品、普通培養基12⑵巴氏消毒法巴斯德創立殺滅病原微生物而不破壞其中不耐熱營養成分61.1°C～62.8°C/30min

或71.7°C/15～30s牛奶、酒類的消毒14⑶流通蒸氣消毒法阿諾蒸鍋或蒸籠只殺死繁殖體，不能殺死芽胞100°C/30min食品的消毒16⑷間歇蒸氣滅菌法阿諾蒸氣滅菌器100°C/30min100°C/30min

100°C/30min可殺死芽胞不耐高溫營養物質：

血清培養基、雞蛋培養基1737℃24h37℃24h芽→繁芽→繁⑸煮沸法消毒：100°C/5min滅菌：100°C/2～3h，可殺死芽胞餐具、飲水、注射器消毒

加入2％碳酸鈉(Na2CO3)可提高沸點105°C，防止金屬生銹18（二）低溫原理:酶活性降低，新陳代謝減慢，抑制細菌生長大部分細菌耐低溫—冰箱(0～4℃)用途:保存菌種、食品目前保存菌種較好的方法—真空冷凍干燥法20（三）紫外線及電離輻射1、紫外線：機理：干擾細菌DNA合成殺菌波長：265～266nm特點：穿透力弱；對人體皮膚、眼睛損傷。用途：空氣及物體表面消毒

（紫外光燈）21（三）紫外線及電離輻射2、電離輻射：破壞核酸，穿透力高，X、γ導管、不耐熱物品消毒（塑料）及食品消毒22（四）干燥原理:蛋白質脫水，抑制細菌生長用途:保存菌種（冷凍真空干燥）、保存食物（用高滲溶液—糖浸、鹽淹）多數細菌在干燥環境易死亡，少數例外（結核桿菌、炭疽桿菌）23(五)過濾濾菌器濾膜孔經0.2μm消毒：液體：血清、抗生素、酶不能除去病毒、支原體、L型細菌24

許多化學藥物都具有抑菌、殺菌的作用，化學控制法就是運用適宜種類和濃度的化學藥物(消毒劑)來處理物品，從而殺死或抑制細菌等微生物，達到消毒滅菌效果。消毒劑不僅能殺死病原體，對人體細胞也有損害作用，所以消毒劑只能外用，主要用于物體表面、環境、人體表面(皮膚、黏膜、淺表傷口)的消毒。三、化學因素（一）消毒劑的殺菌機制（外用）使菌體蛋白變性或凝固使酶失去活性，影響代謝損傷細胞膜、細胞壁（二）選擇原則效果好毒力低便宜26（三）影響消毒滅菌效果的因素消毒劑的濃度與作用時間：微生物的種類與數量溫度、酸堿度：有機物的影響化學拮抗物質27

四、生物因素噬菌體細菌素28噬菌體(一)定義：是感染細菌、放線菌、真菌等微生物的一類病毒，在葡萄球菌和志賀菌中首先發現。（二）特點：個體微小，可以通過細菌濾器沒有完整的細胞結構，由蛋白質和核酸組成專性細胞內寄生的微生物嚴格的宿主特異性29（三）生物學性狀1、形態：個體小，需用電子顯微鏡觀察，多

數為蝌蚪形，少數為球形、桿形、磚形。2、組成：頭部：內含DNA/RNA尾部：包括中空尾管、尾鞘、尾絲、尾刺等。尾絲是吸附宿主細胞表面特殊受體部位。3、抗原性4、抵抗力：75°C/30min，紫外線10～15min3031噬菌體的形態結構噬菌體的種類及生活周期毒性噬菌體---溶菌周期溫和性噬菌體---溶原周期（四）與宿主的關系1、裂解殺死：毒性噬菌體

能在宿主細胞內復制增殖，產生子代噬菌體，并裂解細菌的噬菌體，稱為毒性噬菌體。

33毒性噬菌體釋放溶解宿主菌！2、溶原狀態：溫和噬菌體

噬菌體侵入細菌后，并不增殖，而是把噬菌體基因與細菌基因整合，隨細菌的分裂而傳代，這種狀態稱為溶原狀態，這種噬菌體稱為溫和噬菌體。34溫和性噬菌體釋放基因與細胞基因整合35溫和噬菌體前噬菌體

整合在細菌基因組中的噬菌體基因組稱為前噬菌體。36溶原性細菌

帶有前噬菌體基因組的細菌稱為溶原性細菌。37溶原性噬菌體溶原狀態十分穩定，能經歷許多代在某些條件如紫外線、X線、致癌劑、突變劑等作用下，可中斷溶原狀態進入溶菌性狀態。故溶原性噬菌體具有溶菌性及溶原性二個周期。（五）毒性噬菌體的復制過程吸附穿入生物合成裝配與釋放3940吸附穿入4142

生物合成復制核酸