小分子肝素的制備目錄概述1制備方法2酶活測定方法及分子量測定方法3實驗進度及問題41概述肝素（Unfractionatedheparin,UFH）作為抗凝劑和抗血栓藥在臨床上使用已有60余年，但長期使用會導致出血和血小板減少等不良現象。低分子肝素(Low-molecular-weightheparin,LMWH)是由普通肝素裂解而來。與普通肝素比較，其抗血栓能力較強而抗凝血能力較低，在其抗血栓能力形成時對凝血系統的影響較小。另外低分子肝素還具有分子量小、生物利用度高、體內半衰期長、出血傾向小等特點，因此低分子肝素的制備具有重要的意義。

根據其末端鏈的差異和制備方法的不同，低分子肝素主要分為八種。平均分子量制備方法FXa/FⅡa的比例末端鏈那屈肝素依諾肝素達肝素舍托肝素亭扎肝素瑞維肝素阿地肝素帕肝素45003500-50004000-60004500-80004900400060005000亞硝酸降解乙醇分級苯甲化并堿降解亞硝酸降解凝膠過濾亞硝酸異戊酯降解肝素酶降解亞硝酸降解過氧化氫降解過氧化氫降解3.63.82.04.21.95.01.92.02，5-脫水-D-甘露糖還原末端4，5-不飽和糖醛酸非還原末端2，5-脫水-D-甘露糖還原末端2，5-脫水-D-甘露糖還原末端4，5-不飽和糖醛酸非還原末端2，5-脫水-D-甘露糖還原末端不穩定的糖苷鍵不穩定的糖苷鍵2制備方法化學裂解法亞硝酸降解法、過氧化氫降解法、β-消除降解法和其它化學降解法制備方法物理分離法有機溶劑分級沉淀法、凝膠色譜法、親和色譜法、離子交換色譜法和超濾法（不適用與工業化生產）酶解法肝素酶2.1.1亞硝酸降解法肝素鈉溶液降解液中和液沉淀低分子肝素2.1化學降解法1%醋酸PH2.3-3.0亞硝酸鈉-5～30℃，3.5h氫氧化鈉中和PH6.5-7.0無水乙醇丙酮脫水，干燥該解聚肝素的過程受溫度、溶液pH值、亞硝酸鹽的濃度及降解時間的影響較大。

2.1化學降解法2.1.2過氧化氫降解法

肝素鈉溶液溶液反應液濃縮液中和液沉淀低分子肝素

該法制備LMWH

的過程也主要受反應的溫度、pH值和過氧化氫濃度的影響

乙酸鈉PH7.8抗壞血酸、乙酸銅水溶液PH7.8邊攪拌邊加入過氧化氫PH7.8，40℃，24h真空濃縮EDTA鈉鹽PH6.5-6.7無水甲醇干燥2.1化學降解法2.1.3β-消去降解法β-消除降解法包括肝素季銨化和降解兩步處理。肝素的季銨鹽和鹵代烴或鹵代芐基化合物在二氯甲烷或二甲基甲酰胺中可以發生酯化反應,生成的肝素酯可在堿性條件下水解成LMWH。肝素解聚程度可由酯化率，堿性條件或酯的類型決定。2.1.4其它化學降解法除亞硝酸降解、β-消除降解法和過氧化氫降解這三種工業上用來制備LMWH的化學方法以外，還可采用高碘酸降解、次氯酸降解、γ-照射和硫酸一氯磺酸降解等幾種方法制備LMWH。這幾種制備方法目前沒有其投入工業化生產的報道。2.1化學降解法優點：化學裂解法工藝簡單，成本低廉，適宜工業化生產。缺點：化學裂解法在裂解過程中容易導致硫酸基丟失ATlll一結合部位減少，同時其在裂解過程中易引入有毒物污染環境。2.2酶解法肝素的酶法降解己經被用作分析肝素的結構和制備LMWH。肝素酶是能特異性的裂解肝素和類肝素主鏈糖苷鍵的酶，最初是從肝素黃桿菌（Flavobacteriumheparinum）中發現并分離。后在一些其它的微生物和真核生物中也有發現，如擬桿菌屬、棒桿菌屬和芽孢桿菌屬等幾種，真核生物的霉菌、胎盤、胸腺、血小板等中均有發現。肝素酶主要用于低分子肝素生產和鏈上精確結構的研究，現在市場上肝素酶價格昂貴且都是肝素黃桿菌肝素酶，這是由于分離肝素酶穩定性差及產量不高所造成的。2.2酶解法微生物方法構建高效表達且不易產生包涵體的基因工程菌基因工程方法相較化學裂解法，酶解法裂解環境溫和、對環境無污染，但目前市場上售賣肝素酶，價格昂貴，且均是肝