菌落總數(shù)國標法驗證_第1頁
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文檔簡介

菌落總數(shù)測試片驗證——國標法樣品的前處理：(建議使用蔬菜瓜果、自來水及標準細菌作為樣品)(1)蔬菜瓜果：稱取25g樣品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min?10000r/min均質(zhì)lmin?2min制成1:10的樣品勻液。自來水：以無菌直接吸吸取1mL自來水進行檢測。標準細菌：挑取平板上標準細菌的單菌落，于盛有5mLLB液體培養(yǎng)基的試管中，37°C培養(yǎng)過夜，以此作為菌原液。用1mL無菌吸管或微量移液器吸1mL菌原液于盛有9mL的稀釋液的無菌試管中，制成1:10的樣品勻液。樣本稀釋倍數(shù)：用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1mL,沿管壁緩慢注于盛有9mL的稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸管尖端不要觸及稀釋液面)，振蕩試管或換用一只無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。按此操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液，每遞增稀釋液必要時用1mol/L氫氧化鈉(NaOH)或1mol/L鹽酸(HC1)調(diào)節(jié)pH至7.0?7.2。蔬菜樣品的稀釋倍數(shù)：取100、10-1兩個稀釋度進行接種驗證。河水樣品的稀釋倍數(shù)：取10-1、10-2兩個稀釋度進行接種驗證。大腸菌群標準菌的稀釋倍數(shù)：取10-7、10-8兩個進行接種驗證。自來水的稀釋倍數(shù)：直接取自來水接種進行驗證。接種：3.1選取1~2個適宜的連續(xù)稀釋度，每個稀釋度接種2個無菌平皿，每皿1mL。同時取1mL生理鹽水加入無菌平皿作空白對照。3.2及時將15mL~20mL冷卻至46C的平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均與。3.3瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，置于36C±1C培養(yǎng)48h左右。計數(shù):

選取菌落數(shù)在30CFU?300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)，低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。注：平板瓊脂計數(shù)培養(yǎng)基成分胰蛋白胨酵母浸膏葡萄糖瓊脂蒸餾水5.0g2.5g5.0g2.5g1.0g15.0g1000mLpH7.0?7.2

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