自身免疫病疫苗第一頁，共六十頁，2022年，8月28日NewvaccinedevelopmentNewvaccinesagainstinfectiousdiseases DevelopmentofDNAvaccines Developmentoftherapeuticvaccines

Advancesincurrentvaccines Streptococcuspneumoniae、InfluenzavirusNewvaccinesagainstnon-infectiousdiseases Cancer

AutoimmunediseasesNewvaccinedeliverytechnology第二頁，共六十頁，2022年，8月28日Principleofdeliveringvaccinesinedibleplants.Agenefromahumanpathogenisinsertedintoabacteriumthatinfectsplants(A).Thebacteriumtheninfectsculturedleafsegmentsoftheselectedfoodplant(B),whichsproutintowholeplantscontainingthehumanpathogengene(C).Oncetheplantiseaten,ittriggersanimmuneresponsetothepathogenNewvaccinedeliverytechnology第三頁，共六十頁，2022年，8月28日一、自身免疫病的基本概念：自身免疫（autoimmunity）

機體免疫系統對自身成分發生免疫應答，產生自身抗體或自身反應性T淋巴細胞的現象。自身免疫病（autoimmunedisease，AID）

若自身耐受機制遭破壞，自身免疫應答的質或/和量發生異常，則自身抗體和自身反應性淋巴細胞可攻擊并破壞自身組織細胞，機體出現病理改變和相應臨床表現。自身免疫病第四頁，共六十頁，2022年，8月28日基本特征1.可測到高效價的自身抗體和（或）自身應答性T細胞2.自身抗體或應答T細胞→作用于自身組織細胞→造成損傷或功能障礙3.可復制出相似的動物模型，用患者血清或致敏淋巴細胞可使疾病被動轉移等4.病情轉歸與自身免疫應答強度密切相關5.反復發作和慢性遷延6.有遺傳傾向7.部分自身免疫性疾病易發生于女性其中，第1、第2條不可缺少。第五頁，共六十頁，2022年，8月28日自身免疫性疾病的分類：器官特異性糖尿病、多發性硬化癥器官非特異性系統性紅斑狼瘡、 類風濕性關節炎第六頁，共六十頁，2022年，8月28日

自身免疫病自身抗原器官特異性自身免疫病：

慢性甲狀腺炎甲狀腺球蛋白、微粒體、細胞膜表面抗原 、第二膠質抗原(CA2)毒性彌漫性甲狀腺腫(Graves病) 甲狀腺細胞表面TSH受體原發性腎上腺皮質萎縮(Addison病) 腎上腺細胞惡性貧血 胃壁細胞、內因子慢性潰瘍性結腸炎 結腸上皮細胞男性自了性不育癥 精子青少年型胰島素依賴性糖尿病 胰島細胞伴共濟失調-毛細血管擴張的 胰島素受體胰島素低抗型糖尿病重癥肌無力 乙酰膽堿受體自身免疫性溶血性貧血 紅細胞特發性血小板減少性紫癜 血小板干燥綜合征(Sjogrenssyndrome) 唾液腺管、細胞核、甲狀腺球蛋白非器官特異性自身免疫病：

類風濕關節炎 變性IgG系統紅斑狼瘡 核成分(DNA、DNA-核蛋白、RNA、Sm抗 原)、紅細胞、血小板、細胞漿成分(線粒 體、微粒體)第七頁，共六十頁，2022年，8月28日自身免疫病舉例：系統性紅斑狼瘡（SLE）類風濕關節炎（RA）I型糖尿病（IDDM）多發性硬化（MS）強直性脊椎炎（AS）第八頁，共六十頁，2022年，8月28日系統性紅斑狼瘡（SLE）東方人和黑人育齡婦女常見。多克隆淋巴細胞非特異活化抗體介導的損傷發病特征：關節疼痛、面部蝶形紅斑、血尿、蛋白尿、白細胞貧血。血液中含大量自身抗原和抗原－抗體復合物。免疫病理由抗原－抗體復合物沉積于關節、腎小球基底膜致炎癥。第九頁，共六十頁，2022年，8月28日系統性紅斑狼瘡（SLE）：

一類不治的器官非特異性自身免疫病。患者多種組織、臟器受損。臉部紅斑（左下）、下肢狼瘡青斑（右下）、形成紫紅色染色狼瘡細胞為SLE的典型病變。右上圖為SLE發病的全球分布。高發區低發區未知區第十頁，共六十頁，2022年，8月28日SystemicLupusErythematosus(SLE)

ischaracterizedbyfever,weakness,arthritis,skinrashes(seefigureatleft),pleurisy,andkidneydysfunction.AffectedindividualsmayproduceautoantibodiestoarangeoftissueantigenssuchasDNA,histones,RBCs,platelets,leukocytes,and

clottingfactors.SLEtypicallyappearsinwomenbetween20and40yearsofagewithafemale:maleratioof10:1.

AnexampleofcomplicationsarisingfromSLEiswhenimmunecomplexesofautoantibodiesandvariousnuclearantigensaredepositedalongthewallsofsmallbloodvessels.Thisdepositionactivatesthecomplementsystem,resultinginglomerulonephritisanddamagetotheblood-vesselwall(vasculitis).Thisbloodvesseldamagecanleadtowidespreadtissuedamage.第十一頁，共六十頁，2022年，8月28日類風濕關節炎（RA）1％人口發病。發病年齡40～50歲女性發病率為男性3倍60％～80％攜帶HLA-DR4基因發病特征：慢性進行性關節滑膜、軟骨壞損。血液中含高水平RF因子（抗自體IgG的IgM抗體）。早期關節腫脹、疼痛；晚期關節變形，失去功能。第十二頁，共六十頁，2022年，8月28日類風濕關節炎（RA）：是一類嚴重的自身免疫病，患者關節滑囊被破壞，使手指僵硬變形。第十三頁，共六十頁，2022年，8月28日I型糖尿病（IDDM）缺乏胰島素造成糖代謝紊亂和血糖濃度增高。發病年齡11～12歲遺傳幾率高達25％發病特征：多飲食、多尿，體重下降，尿酮過多，乏力，視力下降。自身免疫反應損傷胰島b細胞。患者依賴外源注射胰島素來維持葡萄糖代謝。第十四頁，共六十頁，2022年，8月28日多發性硬化（RA）慢性進行性中樞神經系統脫髓鞘疾病。T淋巴細胞介導的自身免疫病。發病可能與麻疹病毒慢性潛伏感染有關。發病特征：重復出現視覺、運動、觸覺等神經功能的短暫喪失。大腦切片顯示多處白斑。白斑內浸潤大量T、B淋巴細胞和巨嗜細胞。第十五頁，共六十頁，2022年，8月28日強直性脊椎炎（AS）脊椎關節的慢性進行性炎癥。發病率1％，患者90％以上攜帶HLA-B27基因。男/女發病比例為9：1。發病特征：脊椎慢性炎癥，最終脊椎關節完全融合，不能靈活彎曲。血液中無RF因子。慢性炎癥細胞浸潤脊椎關節、骶骼關節、肌腱骨膜附著處。第十六頁，共六十頁，2022年，8月28日免疫耐受（immunologicaltolerance）是指機體免疫系統接觸抗原后導致的特異性免疫無應答性和低應答性。淋巴細胞識別抗原后的兩種后果：1、淋巴細胞識別抗原后發生特異性的免疫應答－免疫原2、免疫耐受性的形成－耐受原免疫系統“自我識別”識別自我與非我－自身耐受二、免疫耐受機制第十七頁，共六十頁，2022年，8月28日1、中樞耐受

1）T細胞克隆在胸腺中的缺失（陰性選擇）

2）B細胞克隆缺失2、外周耐受

1）克隆無能或免疫忽視

2）免疫抑制細胞的作用

3）免疫隔離部位的抗原在生理條件下不致免疫應答第十八頁，共六十頁，2022年，8月28日天然免疫耐受：異卵雙生小牛共用胎盤第十九頁，共六十頁，2022年，8月28日1957年Burnet：Theclonalselectionhypothesis.Duringitsnormalcourseofdevelopment,eachlymphocyteprogenitorisabletogiverisetomanylymphocytes,eachbearingadistinctantigenreceptor.Manylymphocyteswithreceptorsthatbindubiquitousselfantigensareeliminatedearlyindevelopmentbeforetheybecomeabletorespond,assuringtolerancetosuchselfantigens.Whenantigeninteractswiththereceptoronamaturelymphocyte,thatcellsisactivatedtobecomeablastcell(lymphoblast)andthenstartstodivide.Itgivesrisetoacloneofidenticalprogeny,allofwhosereceptorsbindthesameantigen.Antigenspecificityisthusmaintainedastheprogenyproliferateanddifferentiateintoeffectorcells.Onceantigeniseliminatedbytheseeffectorcells,theimmuneresponseceases.第二十頁，共六十頁，2022年，8月28日中樞耐受T細胞及B細胞分別在胸腺及骨髓微環境中發育，此間進行陰性選擇啟動細胞凋亡，致克隆消除減少生后自身免疫病的發生第二十一頁，共六十頁，2022年，8月28日中樞免疫耐受：陰性選擇第二十二頁，共六十頁，2022年，8月28日

1、中樞耐受

對自身抗原形成的耐受

1）T細胞克隆在胸腺中的缺失（陰性選擇）

Kappler：中樞器官I-E+小鼠表達Vb17aTcell

外周器官I-E+小鼠不表達Vb17aTcell

外周器官I-E－小鼠表達Vb17aTcellVb17aTcell識別I-E復合體的自身抗原后被清除

2）B細胞克隆缺失第二十三頁，共六十頁，2022年，8月28日NegativeselectionofBcellsin

bonemarrow胸腺和骨髓克隆消除－普遍表達的自身抗原外周器官的組織特異性抗原？第二十四頁，共六十頁，2022年，8月28日

2、外周耐受

1）克隆無能(clonalanergy)或免疫忽視(immunological

ignorance)

自身應答T細胞克隆與相應組織特異抗原并存，正常情況下，不導致自身免疫病。因感染、病原體與自身抗原的分子模擬作用，使APC活化，產生效應T細胞

第二十五頁，共六十頁，2022年，8月28日1.

T細胞無能反應

1）

缺乏第二信號

CostimulatorCD28-B7或信號弱

2）

增殖活化信號傳遞受阻第二十六頁，共六十頁，2022年，8月28日2.B細胞克隆無能反應

1）

膜免疫球蛋白表達的抑制Nossal克隆流產成熟Bcell+SmIg內吞重新表達未成熟Bcell+SmIg內吞不表達，特異性耐受 細胞不死亡，抗原受體永久消失8-24h第二十七頁，共六十頁，2022年，8月28日2）

功能性無反應性：含有多重相同結構表位的Ag（多糖物質）作為致耐原 交聯而不遞呈2.B細胞克隆無能反應第二十八頁，共六十頁，2022年，8月28日免疫耐受小鼠淋巴細胞正常小鼠另一小鼠取皮膚移植存活如耐受血液中除去淋巴細胞，則沒有免疫耐受發生2）免疫抑制細胞的作用Gershon首先發現Ts第二十九頁，共六十頁，2022年，8月28日3）免疫隔離部位的抗原在生理條件下不致免疫應答

1.

生理屏障 腦、眼前房、胎盤2.抑制性細胞因子TGF-inhibitTh2

IL-4、IL-10inhibitTh1第三十頁，共六十頁，2022年，8月28日三、自身免疫病的致病因素及機制誘發自身免疫異常的環境因素自身抗原出現

1.分子模擬（molecularmimicry）

2.表位擴展（epitopespreading）

3.自身抗原性質改變

4.隱蔽抗原釋放

免疫應答和免疫調節異常個體自身免疫相關的遺傳因素第三十一頁，共六十頁，2022年，8月28日自身免疫性疾病的致病相關因素

1.自身抗原的改變或與自身抗原有關引起自身免疫病的抗原

一）

隱蔽抗原的釋放（晶狀體、精子、甲狀腺）

未在胚胎期與免疫系統接觸淋巴細胞克隆存在 手術、外傷或感染 輸精管結扎自身免疫性睪丸炎 眼外傷自身免疫性交感性眼炎第三十二頁，共六十頁，2022年，8月28日二）

自身抗原發生改變

Ag變性 代謝改變 遺傳結構改變致Ag表達改變 藥物影響

a-甲基多巴：RBC膜上e抗原抗RBCAb自身溶血性貧血肼苯噠嗪：改變核成分抗核AbSLE樣綜合癥病毒感染：整合DNA抗自身Ab，干擾FasL表達，T、B增生 變性的IgG－抗IgGFc抗體－自身抗體

第三十三頁，共六十頁，2022年，8月28日三）

交叉抗原的作用:

A型乙型溶血性鏈球菌 人心肌Ag12型溶血性鏈球菌 腎小球基底膜大腸桿菌O14型 結腸抗原四）

分子模擬作用:病原體氨基酸序列和人的多肽序列相同第三十四頁，共六十頁，2022年，8月28日HSP60已知自身自身抗原相似有關疾病區域抗原區域程度%1～17 髓過氧化物酶 594～610 60

腎小球腎炎7～21 細胞色素P450 359～372 64

慢性活動性肝炎65～75 甲狀腺球蛋白 393～403 58

慢性甲狀腺炎86～100 肌凝蛋白重鏈 516～530 62

柯薩基心肌炎101～123 細胞角蛋白 83～105 58

類風濕性關節炎108～117 DNA-結合蛋白 73～82 58 SLE468～480 乙酰膽堿受體 133～145 63

重癥肌無力HSP60與人自身抗原相似性第三十五頁，共六十頁，2022年，8月28日五）

表位擴展的現象優勢決定基(dominantdeterminant),隱蔽決定基(crypticdeterminant)T細胞或B細胞在免疫應答的早期對個別表位的應答發展到對其它表位的應答；從單克隆或寡克隆T/B細胞被活化，擴展到多個克隆被活化。1）T細胞表位擴展：實驗性自身免疫性腦脊髓膜炎（EAE）髓鞘堿性蛋白MBP或蛋白脂蛋白PLPMBP顯性表位Ac1－11；84－104為次顯性表位PLP顯性表位139－151；178－191、249－173為次顯性表位第三十六頁，共六十頁，2022年，8月28日PLP139－151SJL/J小鼠R－EAE脾細胞1、對PLP139－151強烈增生2、對PLP178－191強烈增生：分子內擴展MBP84－104SJL/J小鼠R－EAE脾細胞對PLP139－151強烈增生：分子間擴展小鼠腦脊髓炎病毒SJL/J小鼠R－EAE脾細胞對MBP強烈增生：病毒表位內源性自身表位第三十七頁，共六十頁，2022年，8月28日2）B細胞表位擴展：系統性紅斑性狼瘡SmB/B’八肽抗八肽抗nRNP(nuclearribonucleoprotein)抗DNASLE干燥綜合癥的表位擴展(血清中有抗La和Ro自身抗體）重組La抗LaC片斷抗LaA片斷抗LaF片斷重組Ro抗LaA片斷第三十八頁，共六十頁，2022年，8月28日2、表位擴展的可能機制專職性APC（包括抗原特異性B細胞）與非專職性APC攝取組織碎片，加工處理抗原和呈遞抗原的能力以及協同刺激分子表達增高，即刺激T細胞能力增強專職性與非專職性APC內質體的蛋白酶發生變化，導致裂解肽鏈的位置發生變化，使原次顯性和陰性表位變成顯性或次顯性表位，因而使耐受性喪失自身反應細胞應答能力增高，易產生應答。例如TCR和粘附分子表達增加，易產生激活在抗原持久刺激下，BCR或TCR親和力經抗原選擇后而增高易發生免疫調節紊亂第三十九頁，共六十頁，2022年，8月28日2.免疫調節異常一）多克隆刺激劑的旁路活化：

微生物或其產物非特異性地直接誘導B細胞產生自身抗體

二）MHCII類抗原的異常表達：

IFN-g、IL-1、IL-2、MHCII↑三）輔助刺激因子表達異常（增高）：

B7↑

第四十頁，共六十頁，2022年，8月28日四）

Th比例失調或功能失衡：

Th1功能亢進－IDDM、MS Th2功能亢進－抗體介導的自身免疫病如SLE第四十一頁，共六十頁，2022年，8月28日抗凋亡現象：1）凋亡是維持自身穩定的重要機制2）自身反應性細胞凋亡障礙是自身免疫性疾病發病的關鍵因素之一五）

Fas、FasL表達異常:第四十二頁，共六十頁，2022年，8月28日自身免疫病易感性的遺傳因素主要組織相容性復合體基因免疫球蛋白基因T細胞受體基因細胞因子基因 Th1和Th2不平衡凋亡基因 lpr、lprcg、gldY染色體連鎖自身免疫性加速基因 Yaa/影響B細胞粘附因子的表達－低親合力Th與B結合－Aag胞質酪氨酸磷酸酶基因系統造血和免疫系統異常第四十三頁，共六十頁，2022年，8月28日自身免疫病的組織損傷機制自身抗體介導Ⅱ型超敏反應自身抗原-抗體復合物介導III型超敏反應自身反應性T細胞介導IV型超敏反應第四十四頁，共六十頁，2022年，8月28日

四、自身免疫病的治療臨床常規治療

對癥治療

1.抗炎：阿斯匹林類藥物、糖皮質激素

2.替代補充：注射胰島素、甲狀腺素

3.胸腺切除和血漿置換：去除自身抗體和免疫復合物非特異性免疫抑制治療環孢素A抑制T細胞特異性免疫治療1.T細胞疫苗2.拮抗性多肽3.單克隆抗體4.阻斷協同刺激信號第四十五頁，共六十頁，2022年，8月28日原則及種類（一）口服疫苗1、經口耐受性的產生

淋巴細胞對抗原誘導的細胞增生和分泌淋巴因子的功能均減弱淋巴因子的功能有質的變化增強CD8＋T細胞的功能，產生大量T細胞生長因子（TGF-），對致病細胞起到對抗作用第四十六頁，共六十頁，2022年，8月28日2、動物及人類自身免疫病的治療

II型膠原性關節炎實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）虹膜睫狀炎（EAU）

Copdymer合成多肽口服治療MS第四十七頁，共六十頁，2022年，8月28日（二）合成性多肽疫苗1、原則：阻止自身反應性T細胞的激活研究抗原和鑒定自身與T細胞相互作用的決定簇，以及與其功能相關的特定氨基酸序列，從而研究出一種與決定簇結構相似但功能完全相反的多肽，防止自身抗原對反應性T細胞的激活作用。 第四十八頁，共六十頁，2022年，8月28日2、方法：抗原競爭一個關鍵氨基酸的替換仍可能會激活原先的T細胞，但該細胞表達不同的功能3、應用：多發性硬化癥（MS）第四十九頁，共六十頁，2022年，8月28日抗原結構改變誘導的免疫抑制第五十頁，共六十頁，2022年，8月28日新合成的多肽中有相當一部分本身具有免疫反應的刺激作用，甚至會誘發對疾病無益而有害的反應誘發過量細胞因子的生成尋找新的多肽，研制對于不同遺傳背景的病人都有益而無害的肽類制劑仍任重道遠第五十一頁，共六十頁，2022年，8月28日（三）T細胞或T細胞受體疫苗1、基本原理：來源于獨特型－抗獨特型理論。即從T細胞庫中選擇自身反應性T細胞，滅活后免疫，激發機體的保護性免疫（調節性T細胞）。MS:MBP、PLP等

MBP反應性的T細胞在MS病人激活1st

腦脊液T細胞PHA刺激甲醛固定回輸病人MBP自身反應性T細胞頻率進行性降低3次接種自身反應性T細胞消除第五十二頁，共六十頁，2022年，8月28日2、免疫調節機制：1）抗獨特型T細胞調節；2）抗獨特型抗體反應；3）免疫偏移3、應用：MS和RA的治療及臨床效果4、潛在的限制性因素：1）克隆變化和表位擴展2）來源時間延長、克隆變化

MBP自身反應性T細胞重新出現MS潛在的克隆變化和MBP自身反應性T細胞的表位擴展優勢地位的自身反應性T細胞克隆被去除其它識別MBP的T細胞克隆取代和恢復對MBP的自身免疫性MBP的作用？寡克隆T細胞？第五十三頁，共六十頁，2022年，8月28日T細胞疫苗研究現狀MS的T細胞疫苗：采用標準SplitWell技術從外周血和腦脊液（CSF）中篩選對MBP特異的T細胞克隆（刺激指數>3）擴增，輻射。受者接受3次皮下注射，每次2～4個克隆，間隔2～4個月。所有病人MBP反應性T細胞頻率降低，3次后清除，已獲FDA批準，進入II期臨床RA的T細胞疫苗：多