獸藥殘留分析技術第一節概述一、基本概念指給畜禽等動物用藥后蓄積或貯存在動物細胞、組織和器官內的藥物或化學物質的原形、代謝產物和雜質。1.獸藥殘留（veterinarydrugresidue)3.標示殘留物（markerresidue)4.靶組織(targettissue）指總殘留物中，在動物體內消除緩慢、殘留量高、殘留期長、性質穩定、有靈敏方法檢測的組分。指殘留量高、殘留物最后消除的組織。二、獸藥殘留的原因不正確用藥不遵守休藥期宰前用藥物掩飾臨床癥狀，以逃避檢查以未經批準的藥物作飼料添加劑藥物標簽指示用法不當加工貯存過程中污染接觸環境中污染的藥物三、獸藥殘留種類β-興奮劑克倫特羅沙丁胺醇來克多巴胺抗菌藥硝基咪唑類、1.違禁藥物甲狀腺抑制劑丙硫氧嘧啶甲巰咪唑激素己烯雌酚、睪酮、群勃龍、雌二醇、孕酮等鎮靜劑氯丙嗪、安定、利血平皮質激素類地塞米松、氫化可的松呋喃類、氯霉素工業污染物如重金屬

環境污染物如二惡英3.其他四、獸藥殘留的危害過敏反應毒性作用激素樣作用耐藥性環境污染1.過敏反應

經常食用含低劑量抗菌藥物的食品能使易感個體出現過敏反應，如青霉素、四環素、磺胺胺類藥物及某些氨基糖苷類抗生素等。這些藥物具有抗原性，刺激機體內抗體的形成，造成過敏反應，嚴重者可引起休克、喉頭水腫、呼吸困難等嚴重癥狀。磺胺類藥物的過敏反應表現為皮炎、白細胞減少、溶血性貧血和藥熱。抗菌藥物殘留所致變態反應比起食物引起的其他不良反應所占的比例小。青霉素藥物引起的變態反應，輕者表現為接觸性皮炎和皮膚反應，嚴重者表現為致死性過敏性休克。2.毒性作用急性中毒如β-興奮劑慢性中毒磺胺類腎損害氯霉素再生障礙性貧血四環素骨骼和牙齒發育苯并咪唑類致畸、致癌、致突變二惡英肺、肝腫瘤3.耐藥性動物在經常反復接觸某一種抗菌藥物后，其體內的敏感菌株將受到選擇性的抑制，細菌產生耐藥性，使耐藥菌株大量繁殖。人體經常食用含藥物殘留的動物性食品，動物體內的耐藥菌株可傳播給人體，當人體發生疾病時，就給臨床上感染性疾病的治療帶來一定的困難，延誤正常的治療。在正常條件下，人體腸道內的菌群與人體能相互適應，如某些菌群能抑制其他菌群的過度繁殖，某些菌群能合成B族維生素和維生素K以供機體使用。過多應用藥物會使這種平衡發生紊亂，造成一些非致病菌死亡，使菌群的平衡失調，從而導致長期的腹瀉或引起維生素缺乏等反應。4.激素樣作用β-興奮劑（瘦肉精）引起中毒。長期食用含低劑量激素動物性食品，腫瘤發生率上升。同化激素用于促進動物生長，提高飼料利用率，目前多數國家已禁用。5.環境污染動物用藥后，藥物隨糞、尿排到環境中，對土壤微生物和昆蟲、水體均造成影響；在土壤中檢測到金霉素；在土壤中殘留的藥物，可通過生物富集和生物放大作用影響人和其他動物；3.最高殘留限量（maximumresiduelimit，MRLs)：指食品動物用藥后，允許存在于食物表面或內部的殘留藥物或化學物質的最高量或濃度。一般以鮮重計，用mg/kg、

g/kg或mg/kg、

g/L。獸藥最高殘留限量（MRL）的確定最大無毒性作用劑量是根據最敏感實驗動物（一般為大鼠、兔、狗）的毒理學試驗，對動物不產生任何毒性的最大劑量。實際是一種從實驗動物外推到人的安全性數據。具體來講，就是根據獸藥的三性（急性、亞慢性／慢性）和三致（致突變、致畸胎、致癌）試驗結果得來。（1）最大無毒性作用劑量（Noobservedeffectlevel，NOEL）的確定（2）每日允許攝入量（AcceptableDailyIntake，ADI）的確定

每日允許攝入量是指可以被一個人安全地消費而不產生任何作用的量。ADI=NOEL/安全因子，其中安全因子，如果NOEL是根據急性試驗得到的，安全因子為1000；如果NOEL是根據慢性試驗得到的，安全因子則為100。其中，組織消費量如下（按WTO推薦）：

肌肉300g脂肪50g肝臟100g腎臟50g蛋100g奶1.5L4.休藥期（withdrawaltime)指食品動物從停止給藥到許可屠宰或其產品許可上市的間隔時間。根據動物實驗估算按實際給藥劑量和途徑給藥后停藥在MRLs附近設置至少4個采樣點，采取靶組織樣品對樣品進行殘留分析繪制殘留消除半對數曲線圖，用直線回歸法對數據進行統計處理將MRLs作為統計量估計時間的99%置信區間，取上限時間作為休藥期根據組織藥動學參數估算六、監控和防范獸藥殘留的措施加強藥物生產和使用管理，完善法規嚴格規定藥物的休藥期和允許殘留量對藥物進行安全性毒理學評價加強獸藥殘留分析方法的技術研究第二節殘留分析

1.篩選方法（SCREENINGMETHOD）指在一定濃度內，用于快速檢測大量樣品的方法。如微物法、免疫化學法。一、殘留分析中的常用術語篩選方法的要求:必須限定方法的特異性允許出現假陽性，最低限度控制假陰性檢測限和定量限必須適合檢測目的方法快速簡便2.常規方法（ROUTINEMEITHOD）指可以基本確定樣品中某種殘留物存在和確定其濃度的方法。要求具有準確的定量分析能力不一定具有準確的定性分析能力方法HPLCGC3.確證方法指用于測定并確證篩選方法和常規方法檢測為陽性結果的樣品中是否存在藥物殘留及殘留量。確證方法的要求特異性高、定量分析能力強精密度、準確度達到規定檢測限和定量限適合檢測目的常用方法GC-MS、LC-MS、GC-IR、LC-IR4.參比方法（REFERENCEMETHOD）指以被某國家或國際機構驗證和接受的法定性確證方法，可用于驗證有關方法的精確度和精密度。5.標準分析物（STANDARDANALYTE）指在分析中用作參比的高純度已知物質，一般用于制作標準曲線或測定添加回收率。6.特異性（SPECIFICITY）指樣品基質中其他組分共存時該分析方法對待測物的分辨能力，有時稱選擇性。7.準確度（ACCURACY）指測定值與其真實值的接近程度，反應分析結果的正確性。通常用添加回收率（recovery）表示。

添加濃度m（mg/kg）

回收率（％）

m≥0.180～110

0.1＞m≥0.0170～110

001＞m≥0.00160～120

m≤0.00150～120不同添加濃度的回收率原則要求如下：8.精密度（PRECISION）指在限定條件下，用某種測定方法重復測定同一均質樣品所得測定值的彼此接近程度。反應分析結果的重復性和重現性。通常用變異系數（CV）或相對標準差（RSD）表示。不同待測物濃度的精密度要求9.重復性重復性（repeatability）：指在短期內相同條件下，測得的同一樣品各個相互獨立分析結果的符合程度。相同條件：同一實驗室、同一操作者、同一批號試劑、同一樣品、同一儀器、同樣分析方法表示方法：日內變異系數或批內變異系數日間變異系數或批間變異系數10.重現性重現性（reproducibility）：指在不同試驗條件下，測得同一樣品各個相互獨立的分析結果的符合程度。不同條件：不同實驗室、不同操作者、不同儀器、同一樣品、相同的分析方法。11.檢測限與定量限檢測限（limitofdetection，LOD）：指某種分析方法能夠從樣品的背景信號中檢出待測物存在的最低濃度。反應分析方法的靈敏度，一般為空白測定平均值加2倍或3倍標準差（信/噪≥3）。定量限（limitofquantitation）：指某種分析方法能夠對樣品待測物進行定量測定的最低濃度。具有精密度和準確度要求，反應方法在低濃度端分析結果的可靠性，為空白測定平均值加10倍標準差。二、殘留分析的原理獸藥殘留的特點殘留水平低，大多在0.001～1mg/kg樣品基質復雜，殘留物不易分離純化基本原理：用物理或化學的方法將待測殘留組分從樣品中提取、分離、純化，溶于適當溶劑，利用其光學或波譜特性，進行定性定量檢測。三、殘留分析方法的分類1.按分離或檢測原理分：理化分析法波譜法、色譜法及聯用技術HPLC、GC、TLC、ＧＣ-ＭＳ、LC-MS免疫分析法放射免疫酶聯免疫、熒光免疫生物測定法微生物法放射受體測定法篩選方法常規方法確證方法參比方法3.按被測組分分單組分多組分2.按殘留分析目的和用途分四、殘留分析方法的建立查閱文獻、設計分析方法建立基本測定方法包括確定測定方法、線性范圍建立樣品處理方法繪制標準曲線外標法內標法確定檢測限和定量限測定樣品回收率和變異系數穩定性分析溫度放置時間（一）殘留檢測方法標準結構（二）樣品提取及分析技術路線（三）分析方法評價及其標準檢測限與定量限添加回收率變異系數線性范圍特異性與參比方法進行相關性比較實驗室