獸藥殘留分析技術(shù)第一節(jié)概述一、基本概念指給畜禽等動物用藥后蓄積或貯存在動物細(xì)胞、組織和器官內(nèi)的藥物或化學(xué)物質(zhì)的原形、代謝產(chǎn)物和雜質(zhì)。1.獸藥殘留（veterinarydrugresidue)3.標(biāo)示殘留物（markerresidue)4.靶組織(targettissue）指總殘留物中，在動物體內(nèi)消除緩慢、殘留量高、殘留期長、性質(zhì)穩(wěn)定、有靈敏方法檢測的組分。指殘留量高、殘留物最后消除的組織。二、獸藥殘留的原因不正確用藥不遵守休藥期宰前用藥物掩飾臨床癥狀，以逃避檢查以未經(jīng)批準(zhǔn)的藥物作飼料添加劑藥物標(biāo)簽指示用法不當(dāng)加工貯存過程中污染接觸環(huán)境中污染的藥物三、獸藥殘留種類β-興奮劑克倫特羅沙丁胺醇來克多巴胺抗菌藥硝基咪唑類、1.違禁藥物甲狀腺抑制劑丙硫氧嘧啶甲巰咪唑激素己烯雌酚、睪酮、群勃龍、雌二醇、孕酮等鎮(zhèn)靜劑氯丙嗪、安定、利血平皮質(zhì)激素類地塞米松、氫化可的松呋喃類、氯霉素工業(yè)污染物如重金屬

環(huán)境污染物如二惡英3.其他四、獸藥殘留的危害過敏反應(yīng)毒性作用激素樣作用耐藥性環(huán)境污染1.過敏反應(yīng)

經(jīng)常食用含低劑量抗菌藥物的食品能使易感個體出現(xiàn)過敏反應(yīng)，如青霉素、四環(huán)素、磺胺胺類藥物及某些氨基糖苷類抗生素等。這些藥物具有抗原性，刺激機(jī)體內(nèi)抗體的形成，造成過敏反應(yīng)，嚴(yán)重者可引起休克、喉頭水腫、呼吸困難等嚴(yán)重癥狀。磺胺類藥物的過敏反應(yīng)表現(xiàn)為皮炎、白細(xì)胞減少、溶血性貧血和藥熱。抗菌藥物殘留所致變態(tài)反應(yīng)比起食物引起的其他不良反應(yīng)所占的比例小。青霉素藥物引起的變態(tài)反應(yīng)，輕者表現(xiàn)為接觸性皮炎和皮膚反應(yīng)，嚴(yán)重者表現(xiàn)為致死性過敏性休克。2.毒性作用急性中毒如β-興奮劑慢性中毒磺胺類腎損害氯霉素再生障礙性貧血四環(huán)素骨骼和牙齒發(fā)育苯并咪唑類致畸、致癌、致突變二惡英肺、肝腫瘤3.耐藥性動物在經(jīng)常反復(fù)接觸某一種抗菌藥物后，其體內(nèi)的敏感菌株將受到選擇性的抑制，細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，使耐藥菌株大量繁殖。人體經(jīng)常食用含藥物殘留的動物性食品，動物體內(nèi)的耐藥菌株可傳播給人體，當(dāng)人體發(fā)生疾病時，就給臨床上感染性疾病的治療帶來一定的困難，延誤正常的治療。在正常條件下，人體腸道內(nèi)的菌群與人體能相互適應(yīng)，如某些菌群能抑制其他菌群的過度繁殖，某些菌群能合成B族維生素和維生素K以供機(jī)體使用。過多應(yīng)用藥物會使這種平衡發(fā)生紊亂，造成一些非致病菌死亡，使菌群的平衡失調(diào)，從而導(dǎo)致長期的腹瀉或引起維生素缺乏等反應(yīng)。4.激素樣作用β-興奮劑（瘦肉精）引起中毒。長期食用含低劑量激素動物性食品，腫瘤發(fā)生率上升。同化激素用于促進(jìn)動物生長，提高飼料利用率，目前多數(shù)國家已禁用。5.環(huán)境污染動物用藥后，藥物隨糞、尿排到環(huán)境中，對土壤微生物和昆蟲、水體均造成影響；在土壤中檢測到金霉素；在土壤中殘留的藥物，可通過生物富集和生物放大作用影響人和其他動物；3.最高殘留限量（maximumresiduelimit，MRLs)：指食品動物用藥后，允許存在于食物表面或內(nèi)部的殘留藥物或化學(xué)物質(zhì)的最高量或濃度。一般以鮮重計，用mg/kg、

g/kg或mg/kg、

g/L。獸藥最高殘留限量（MRL）的確定最大無毒性作用劑量是根據(jù)最敏感實驗動物（一般為大鼠、兔、狗）的毒理學(xué)試驗，對動物不產(chǎn)生任何毒性的最大劑量。實際是一種從實驗動物外推到人的安全性數(shù)據(jù)。具體來講，就是根據(jù)獸藥的三性（急性、亞慢性／慢性）和三致（致突變、致畸胎、致癌）試驗結(jié)果得來。（1）最大無毒性作用劑量（Noobservedeffectlevel，NOEL）的確定（2）每日允許攝入量（AcceptableDailyIntake，ADI）的確定

每日允許攝入量是指可以被一個人安全地消費(fèi)而不產(chǎn)生任何作用的量。ADI=NOEL/安全因子，其中安全因子，如果NOEL是根據(jù)急性試驗得到的，安全因子為1000；如果NOEL是根據(jù)慢性試驗得到的，安全因子則為100。其中，組織消費(fèi)量如下（按WTO推薦）：

肌肉300g脂肪50g肝臟100g腎臟50g蛋100g奶1.5L4.休藥期（withdrawaltime)指食品動物從停止給藥到許可屠宰或其產(chǎn)品許可上市的間隔時間。根據(jù)動物實驗估算按實際給藥劑量和途徑給藥后停藥在MRLs附近設(shè)置至少4個采樣點(diǎn)，采取靶組織樣品對樣品進(jìn)行殘留分析繪制殘留消除半對數(shù)曲線圖，用直線回歸法對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計處理將MRLs作為統(tǒng)計量估計時間的99%置信區(qū)間，取上限時間作為休藥期根據(jù)組織藥動學(xué)參數(shù)估算六、監(jiān)控和防范獸藥殘留的措施加強(qiáng)藥物生產(chǎn)和使用管理，完善法規(guī)嚴(yán)格規(guī)定藥物的休藥期和允許殘留量對藥物進(jìn)行安全性毒理學(xué)評價加強(qiáng)獸藥殘留分析方法的技術(shù)研究第二節(jié)殘留分析

1.篩選方法（SCREENINGMETHOD）指在一定濃度內(nèi)，用于快速檢測大量樣品的方法。如微物法、免疫化學(xué)法。一、殘留分析中的常用術(shù)語篩選方法的要求:必須限定方法的特異性允許出現(xiàn)假陽性，最低限度控制假陰性檢測限和定量限必須適合檢測目的方法快速簡便2.常規(guī)方法（ROUTINEMEITHOD）指可以基本確定樣品中某種殘留物存在和確定其濃度的方法。要求具有準(zhǔn)確的定量分析能力不一定具有準(zhǔn)確的定性分析能力方法HPLCGC3.確證方法指用于測定并確證篩選方法和常規(guī)方法檢測為陽性結(jié)果的樣品中是否存在藥物殘留及殘留量。確證方法的要求特異性高、定量分析能力強(qiáng)精密度、準(zhǔn)確度達(dá)到規(guī)定檢測限和定量限適合檢測目的常用方法GC-MS、LC-MS、GC-IR、LC-IR4.參比方法（REFERENCEMETHOD）指以被某國家或國際機(jī)構(gòu)驗證和接受的法定性確證方法，可用于驗證有關(guān)方法的精確度和精密度。5.標(biāo)準(zhǔn)分析物（STANDARDANALYTE）指在分析中用作參比的高純度已知物質(zhì)，一般用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線或測定添加回收率。6.特異性（SPECIFICITY）指樣品基質(zhì)中其他組分共存時該分析方法對待測物的分辨能力，有時稱選擇性。7.準(zhǔn)確度（ACCURACY）指測定值與其真實值的接近程度，反應(yīng)分析結(jié)果的正確性。通常用添加回收率（recovery）表示。

添加濃度m（mg/kg）

回收率（％）

m≥0.180～110

0.1＞m≥0.0170～110

001＞m≥0.00160～120

m≤0.00150～120不同添加濃度的回收率原則要求如下：8.精密度（PRECISION）指在限定條件下，用某種測定方法重復(fù)測定同一均質(zhì)樣品所得測定值的彼此接近程度。反應(yīng)分析結(jié)果的重復(fù)性和重現(xiàn)性。通常用變異系數(shù)（CV）或相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示。不同待測物濃度的精密度要求9.重復(fù)性重復(fù)性（repeatability）：指在短期內(nèi)相同條件下，測得的同一樣品各個相互獨(dú)立分析結(jié)果的符合程度。相同條件：同一實驗室、同一操作者、同一批號試劑、同一樣品、同一儀器、同樣分析方法表示方法：日內(nèi)變異系數(shù)或批內(nèi)變異系數(shù)日間變異系數(shù)或批間變異系數(shù)10.重現(xiàn)性重現(xiàn)性（reproducibility）：指在不同試驗條件下，測得同一樣品各個相互獨(dú)立的分析結(jié)果的符合程度。不同條件：不同實驗室、不同操作者、不同儀器、同一樣品、相同的分析方法。11.檢測限與定量限檢測限（limitofdetection，LOD）：指某種分析方法能夠從樣品的背景信號中檢出待測物存在的最低濃度。反應(yīng)分析方法的靈敏度，一般為空白測定平均值加2倍或3倍標(biāo)準(zhǔn)差（信/噪≥3）。定量限（limitofquantitation）：指某種分析方法能夠?qū)悠反郎y物進(jìn)行定量測定的最低濃度。具有精密度和準(zhǔn)確度要求，反應(yīng)方法在低濃度端分析結(jié)果的可靠性，為空白測定平均值加10倍標(biāo)準(zhǔn)差。二、殘留分析的原理獸藥殘留的特點(diǎn)殘留水平低，大多在0.001～1mg/kg樣品基質(zhì)復(fù)雜，殘留物不易分離純化基本原理：用物理或化學(xué)的方法將待測殘留組分從樣品中提取、分離、純化，溶于適當(dāng)溶劑，利用其光學(xué)或波譜特性，進(jìn)行定性定量檢測。三、殘留分析方法的分類1.按分離或檢測原理分：理化分析法波譜法、色譜法及聯(lián)用技術(shù)HPLC、GC、TLC、ＧＣ-ＭＳ、LC-MS免疫分析法放射免疫酶聯(lián)免疫、熒光免疫生物測定法微生物法放射受體測定法篩選方法常規(guī)方法確證方法參比方法3.按被測組分分單組分多組分2.按殘留分析目的和用途分四、殘留分析方法的建立查閱文獻(xiàn)、設(shè)計分析方法建立基本測定方法包括確定測定方法、線性范圍建立樣品處理方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法確定檢測限和定量限測定樣品回收率和變異系數(shù)穩(wěn)定性分析溫度放置時間（一）殘留檢測方法標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)（二）樣品提取及分析技術(shù)路線（三）分析方法評價及其標(biāo)準(zhǔn)檢測限與定量限添加回收率變異系數(shù)線性范圍特異性與參比方法進(jìn)行相關(guān)性比較實驗室