標準解讀

《LY/T 2347-2014 剛竹屬DNA擴增片段長度多態性(AFLP)分析方法》是一項針對剛竹屬植物的分子標記技術標準，旨在通過AFLP技術對不同種類或個體間的遺傳差異進行鑒定。該標準詳細規定了從樣品采集到數據分析的整個流程，確保實驗結果的準確性和可重復性。

首先，在樣品采集階段，標準明確了如何選擇和處理用于提取DNA的竹子材料。要求選取健康、無病蟲害的新鮮葉片作為樣本，并且在采集后盡快進行低溫保存以防止DNA降解。

接下來是DNA提取部分，提供了具體的步驟來獲得高質量的基因組DNA。這一步驟對于后續的酶切反應至關重要，因為只有純度高且完整的DNA才能保證酶切效果良好。

然后進入AFLP核心操作環節——限制性內切酶消化與接頭連接。通過使用特定的限制性內切酶切割DNA，形成具有粘性末端的小片段；隨后將特制的人工合成接頭連接到這些片段上，為下一步的選擇性擴增做準備。

選擇性擴增是指利用帶有選擇性堿基的引物對已連接接頭的DNA片段進行PCR擴增。這一過程能夠放大那些攜帶特定序列信息的目標片段，從而使得即使是非常細微的遺傳變異也能被檢測出來。

最后，擴增產物需要經過電泳分離，并采用銀染法或其他合適的方法顯色，以便于觀察和記錄。根據條帶的位置及數量差異，可以構建出各個樣品之間的親緣關系圖譜。

此標準還強調了實驗過程中需要注意的一些細節問題，比如嚴格控制反應條件（溫度、時間等），以及合理設置對照實驗以排除假陽性或假陰性的干擾。通過遵循這套標準化的操作流程，研究人員能夠更有效地利用AFLP技術開展剛竹屬植物分類學研究、種質資源評價等工作。


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  • 現行
  • 正在執行有效
  • 2014-08-21 頒布
  • 2014-12-01 實施
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文檔簡介

ICS6502020

B65..

中華人民共和國林業行業標準

LY/T2347—2014

剛竹屬DNA擴增片段長度多態性AFLP

()

分析方法

MethodofDNAamlificationframentlentholmorhismAFLP

pggpyp()

forPhyllostachysbamboo

2014-08-21發布2014-12-01實施

國家林業局發布

LY/T2347—2014

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準的附錄為規范性附錄

。

本標準由全國竹藤標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC263)。

本標準起草單位國際竹藤中心北京林業大學中國林業科學研究院亞熱帶林業研究所

:、、。

本標準主要起草人李雪平高志民牟少華陳敏袁金玲

:、、、、。

Ⅰ

LY/T2347—2014

剛竹屬DNA擴增片段長度多態性AFLP

()

分析方法

1范圍

本標準規定了剛竹屬Phyllostachys竹種的提取酶切連接擴增實驗步驟及采用的儀器

()DNA、、、

設備

。

本標準適用于剛竹屬竹種多態性的分析

DNA。

2試劑

21所用化學試劑如沒有特殊說明均為分析純

.,。

22提取液細胞裂解液

.DNA:1mol/LTris-HClpH8.2、(1mol/LTris-HClpH7.5,0.25mol/LED-

氯化鈉與按混合在使用前加入亞硫酸鈉至終濃

TApH8.0,5mol/L,2%CTAB)5%SLS5∶5∶2,

度為

0.02mol/L。

23三氯甲烷異戊醇

.∶=24∶1。

24異丙醇

.。

25乙醇無水乙醇加蒸餾水定容到

.70%:70mL100mL。

26氯化鈉稱取氯化鈉用蒸餾水溶解后定容到

.5mol/L:29.22g,100mL。

27溴化乙錠稱取溴化乙錠用蒸餾水溶解后定容到

.0.5mg/mL:5mg,10mL。

28變性緩沖液去離子甲酰胺二甲苯青溴酚

.:50mL,EDTA(0.5mol/L,pH=8.0)1mL,FF0.125g,

藍

0.125g。

29硼酸定容到

.10×TBE:Tris108.0g,55.0g,0.5mol/LEDTA(pH8.0)40mL,1000mL。

210丙烯酰胺溶液甲叉雙丙烯酰胺丙烯酰胺混合加水定容到

.40%:2.0g,38.0g100mL。

211過硫酸胺溶液過硫酸胺加水定容到

.10%:1.0g10mL。

3儀器

31儀具有功能溫度精度

.PCR(touchdown,±0.2℃)。

32移液器

.。

33低溫離心機以上

.4℃(max14000r/min)。

34水浴鍋

.。

35電泳儀可滿足測序

.(DNA)。

36紫外分光光度計

.。

37分析天平

.。

38搖床

.。

4試驗步驟

41DNA提取

.

按照附錄的方法提取和檢測竹子基因組電泳檢測主帶完整

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