ICS1330011100

;

A80..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T35526—2017

化學(xué)品抗雄性性征短期篩選試驗

()

大鼠Hershberger生物檢測法

Chemicals—Ashort-termscreeninassaforantiandroenicroerties—

gy()gpp

Hershbergerbioassayinrats

2017-12-29發(fā)布2018-07-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

中華人民共和國

國家標(biāo)準(zhǔn)

化學(xué)品抗雄性性征短期篩選試驗

()

大鼠Hershberger生物檢測法

GB/T35526—2017

*

中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

:400-168-0010

年月第一版

20181

*

書號

:155066·1-58303

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T35526—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)與經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織化學(xué)品測試方法大鼠生物檢測

(OECD)NO.441《Hershberger:

抗雄性性征短期篩選試驗

()》[Hershbergerbioassayinrats:Ashort-termscreeningassayfor(anti)

技術(shù)內(nèi)容一致

androgenicpropertiest](2009)。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國危險化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC251)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局中國檢驗檢疫科學(xué)研究院復(fù)旦大學(xué)

:、、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人姚麗芳陳俊水蔣偉陳相陳會明張靜李蔚繆文彬趙頤晴鄭華鄔春華

:、、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T35526—2017

引言

年開始修訂并發(fā)展檢測和篩選內(nèi)分泌干擾物的試驗方法上述活動之一就是發(fā)展了

1998,OECD。

大鼠生物篩選試驗方法通過在醫(yī)藥工業(yè)使用幾十年后年該方法首次被官方專

Hershberger。,1962,

業(yè)委員會作為一種雄性激素化學(xué)品的標(biāo)準(zhǔn)篩選工具年年生物篩選試驗進(jìn)

。2001—2007,Hershberger

行了大量的驗證項目包括方法背景資料研究具體試驗方法匯總解剖技術(shù)的發(fā)展以及實驗室內(nèi)部和

:、、

實驗室之間試驗方法可靠性和重現(xiàn)性的驗證研究上述驗證研究使用雄性激素參照物丙酸睪丸酮

。()、

兩種合成的雄性激素醋酸去甲雄三烯醇酮和甲基睪丸素抗雄性激素藥物氟他胺天然雄性激素合

()、()、

成抑制劑非那雄胺幾種弱抗雄性激素農(nóng)藥利谷隆乙烯菌核利速克靈和和α還原酶

()、(、、p,p'-DDE)5-

抑制劑非那雄胺和兩種陰性對照物二硝基苯酚和壬基苯酚本標(biāo)準(zhǔn)是長期生物鑒定試驗和驗證

()()。

試驗的經(jīng)驗總結(jié)

。

生物篩選試驗是一種使用雄性生殖系統(tǒng)中有關(guān)組織的短期在體篩選方法試驗始于

Hershberger。

世紀(jì)年代年代的時候增加了雄性生殖系統(tǒng)中的雄性激素反應(yīng)肌世紀(jì)年代使用標(biāo)準(zhǔn)

2030,40。2060,

方法對多種可能的雄性激素進(jìn)行了評估本標(biāo)準(zhǔn)是基于檢測去勢后的雄性大鼠體內(nèi)五種雄性激素

700。

依賴組織質(zhì)量改變的一種篩選方法本方法用于評估化學(xué)品類似雄性激素激動劑雄性激素拮抗劑或

。、

者還原酶抑制劑的生物活性五種雄性激素依賴組織為腹側(cè)前列腺精囊包括液體和

5α-。(VP)、(SV)(

凝固腺提肛肌球海綿體肌復(fù)合體肌成對的尿道球腺和龜頭在去勢的雄性

)、-(LABC)、(COW)(GP)。

大鼠中受雄性激素的影響上述五種組織的質(zhì)量會發(fā)生相應(yīng)增加同一受試動物使用雄性激素參照

,,。,

物后五種組織的質(zhì)量均發(fā)生增長再使用雄性激素拮抗劑能使五種組織的質(zhì)量均發(fā)生下降三個階段

,。

的驗證試驗證實生物篩選試驗的首選動物模型是去勢的青春期前的雄性大鼠

,Hershberger。

生物篩選試驗是一種雄性激素受體激動劑雄性激素拮抗劑和α還原酶抑制劑的篩

Hershberger、5-

選方法作為提供單一的內(nèi)分泌機(jī)理數(shù)據(jù)的體內(nèi)篩選試驗方法被包括在內(nèi)分泌干擾化學(xué)品的

。OECD

測試和評估框架第級中本試驗包含在內(nèi)分泌干擾物體內(nèi)和體外系列試驗中用于判斷受試物是否

3。,

對內(nèi)分泌系統(tǒng)產(chǎn)生潛在干擾作用從而導(dǎo)致人類健康和環(huán)境的危害

,。

考慮到動物福利未經(jīng)去勢的剛斷奶的雄性大鼠也可以作為生物篩選的替代動物模

,Hershberger

型這種方法也通過驗證但是微量的抗雄性激素驗證研究中未經(jīng)去勢的剛斷奶的雄性大鼠不能夠產(chǎn)

。,,

生一致的響應(yīng)因此本標(biāo)準(zhǔn)中并不包括這項試驗的內(nèi)容

。,。

作為雄性激素受體的配體雄性激素受體激動劑和拮抗劑可分別激活或抑制受體控制的基因轉(zhuǎn)錄

,。

此外在一些雄性激素的靶組織中某些化學(xué)品會抑制睪酮轉(zhuǎn)化為更有活性的二氫睪酮α還原酶抑制

,,(5-

劑這些物質(zhì)有可能對生殖和發(fā)育產(chǎn)生不利影響因此需要迅速評估并評價化學(xué)品是否是雄性激素

)。。,

受體激動劑拮抗劑或α還原酶抑制劑雖然通過受體結(jié)合體外報告基因的轉(zhuǎn)錄激活效應(yīng)檢測到的

、5-。、

雄性激素配體對受體的親和力與其產(chǎn)生危害有一定關(guān)系但并不是潛在危害的決定性因素其他因素

,。

還包括進(jìn)入體內(nèi)之后的代謝活化滅活靶器官中的分布情況和體內(nèi)的清除情況這就需要在篩選化學(xué)

、、。

品的時候在相關(guān)的條件和暴露下進(jìn)行如果化學(xué)品的吸收分布代謝清除已知則體內(nèi)

。———(ADME),

的評估就相對不重要一些在雄性激素刺激下去勢的青春期前的雄性大鼠體內(nèi)雄性激素依賴組織生

。,

長迅速明顯嚙齒類動物特別是大鼠廣泛用于毒性危害研究因此本試驗中使用去勢的青春期

、。,,。,,

前的雄性大鼠和五種靶組織篩選雄性激素受體激動劑拮抗劑和α還原酶抑制劑

、5-。

本標(biāo)準(zhǔn)的可信性和重現(xiàn)性是通過實驗室內(nèi)部和實驗室間的比對驗證了的所有的雄性激

OECD。

素和雄性激素拮抗劑的操作步驟均在本標(biāo)準(zhǔn)中體現(xiàn)

。

雖然在檢測抗雄性激素的驗證試驗中不同實驗室使用的丙酸睪丸酮劑量有所區(qū)別分別為

,,

Ⅱ

GB/T35526—2017

或皮下注射但強抗雄性激素物質(zhì)和弱抗雄性激素物質(zhì)的檢測結(jié)

0.2mg/(kg·d)0.4mg/(kg·d)(),

果表示不同劑量的丙酸睪丸酮試驗結(jié)果沒有差別但是應(yīng)明確丙酸睪丸酮的劑量不應(yīng)該太高以免影

。,,

響弱雄激素受體拮抗劑的作用也不能太低否則即使沒有雄性激素拮抗劑的情況下雄性激素依賴組

,,,,

織也不發(fā)生質(zhì)量變化

。

單個雄性激素依賴組織的生長反應(yīng)并不完全是由雄性激素引起的即雄性激素激動劑之外的化合

。

物可能改變特定組織的質(zhì)量然而幾個組織同時發(fā)生反應(yīng)則證明雄性激素的特定反應(yīng)機(jī)理例如

。,,。:

高劑量的雌激素可以增加精囊的質(zhì)量但不會增加其他雄性激素依賴組織的質(zhì)量抗雄性激素化學(xué)品

,。

既可以是雄性激素受體拮抗劑也可以是α還原酶抑制劑不同組織轉(zhuǎn)化成二氫睪酮不同因此α

,5-。,5-

還原酶抑制劑對不同組織具有不同的效應(yīng)與雄性激素拮抗劑氟他胺相比抑制α還原酶的抗雄性

。,5-

激素非那雄胺對腹側(cè)前列腺作用更大這種差異可用于區(qū)別是由于雄性激素受體介導(dǎo)的反應(yīng)還是α

。5-

還原酶的介導(dǎo)的反應(yīng)此外在生物進(jìn)化上雄性激素受體與類固醇激素和其他激素有關(guān)如加強類固

。,,,

醇的代謝降低血清睪酮含量也可能抑制雄性激素依賴組織的生長因此生物篩選試驗

、,,,Hershberger

的任何陽性結(jié)果均應(yīng)結(jié)合雄性激素受體和雌性激素受體結(jié)合試驗轉(zhuǎn)錄活化分析等體外試驗或者檢測

、

類似雄性激素靶器官的體內(nèi)試驗如雄性動物發(fā)育試驗天成年雄性動物試驗天或天重復(fù)劑

,、15、2890

量試驗進(jìn)行綜合評價

。

經(jīng)驗表明雄性激素比抗雄性激素更加罕見因此生物篩選試驗更廣泛應(yīng)用于抗雄

,。,Hershberger

性激素的篩選然而雄性激素檢測方法可用于甾體類或類固醇類化學(xué)品或者框架文件第級或第

。,12

級試驗結(jié)果顯示具有疑似雄性激素作用的化學(xué)品的檢測類似的與抗雄性激素相關(guān)的危害可以在

。,()

第級試驗中觀察得到用于評估化學(xué)物的危害是否與內(nèi)分泌有關(guān)

5,。

所有的動物相關(guān)的程序應(yīng)該符合地方動物保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)本標(biāo)準(zhǔn)中描述的動物保護(hù)和使用標(biāo)準(zhǔn)都是最

,

低標(biāo)準(zhǔn)可被地方性法規(guī)代替

,。

Ⅲ

GB/T35526—2017

化學(xué)品抗雄性性征短期篩選試驗

()

大鼠Hershberger生物檢測法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化學(xué)品抗雄性性征短期篩選試驗大鼠生物檢測法的術(shù)語和定義試

()Hershberger、

驗原理試驗方法與步驟數(shù)據(jù)與報告

、、。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于評估化學(xué)品類似雄性激素激動劑雄性激素拮抗劑或還原酶抑制劑的生物活性

、5α-。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

實驗動物環(huán)境及設(shè)施

GB14925

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

雄性激素效應(yīng)androgenicity

化學(xué)品對雄性激素依賴組織的促進(jìn)作用

。

32

.

抗雄性激素效應(yīng)antiandrogenicity

化學(xué)品抑制哺乳動物體內(nèi)丙酸睪丸酮號活性的作用

(TP,CAS57-82-5)。

33

.

劑量dose

給予受試物的量用每天單位體重動物給予受試物的質(zhì)量來表示即