標準解讀
GB/T 17480-1998 是一項中華人民共和國國家標準，全稱為《飼料中黃曲霉毒素B1的測定 酶聯免疫吸附法》。這項標準詳細規定了使用酶聯免疫吸附法（ELISA）來測定飼料中黃曲霉毒素B1含量的方法、試劑與材料要求、操作步驟、計算方法以及結果判定等內容，旨在為飼料質量和安全監控提供一個統一、準確的檢測手段。
標準適用范圍
該標準適用于各類配合飼料、單一飼料及原料中黃曲霉毒素B1的定量檢測。黃曲霉毒素B1是一種由真菌產生的有毒代謝產物，對人和動物具有高度毒性，能夠導致肝損傷甚至癌癥，因此對其在飼料中的含量進行嚴格控制至關重要。
主要內容概覽
1. 術語定義
- 明確了黃曲霉毒素B1、酶聯免疫吸附法等相關專業術語的定義，確保標準執行過程中的概念清晰。
2. 試劑與材料
- 規定了實驗所需的各種試劑如抗體、酶標抗原、顯色劑等的質量要求及配制方法。
- 列出了必要的實驗器材，包括酶標儀、離心機、移液器等，并對使用前的準備和校準進行了說明。
3. 采樣與樣品處理
- 提供了樣品采集的指導原則，確保樣品具有代表性。
- 描述了樣品的前處理步驟，包括粉碎、混合、提取和凈化，以去除干擾物質并富集待測毒素。
4. 檢測步驟
- 詳細闡述了酶聯免疫吸附法的操作流程，包括：
- 將處理后的樣品與酶標抗原競爭結合到固定于微孔板上的特異性抗體上。
- 清洗去除未結合物質后，加入酶標二抗，形成抗原-抗體-酶標二抗復合物。
- 加入顯色底物，酶催化顯色反應，顏色深淺與樣品中黃曲霉毒素B1的濃度成反比。
- 通過酶標儀讀取吸光度值，據此計算毒素含量。
5. 計算與結果判定
- 提供了計算公式，依據標準曲線將吸光度值轉換為黃曲霉毒素B1的實際濃度。
- 設定了判定限值，根據國家相關法規或標準判斷飼料中黃曲霉毒素B1是否超標。
6. 精密度與準確度
- 介紹了重復性和再現性試驗的要求，用以評估方法的精密度。
- 通過回收率試驗驗證方法的準確度，確保測試結果可靠。
實施意義
該標準的實施有助于飼料生產、檢驗機構及監管部門統一檢測方法，提高檢測效率和準確性，有效監控飼料中黃曲霉毒素B1的污染情況，保障飼料安全和動物健康，進而保護食品安全和公眾健康。
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文檔簡介
ICS65.120B46中華人民共和國國家標準GB/T17480—1998飼料中黃曲霉毒素B1的測定酶聯免疫吸附法DeterminationofaflatoxinBinfeeds-Enzyme-linkedimmunosorbentassay1998-08-28發布1999-01-01實施國家質量技術監督局發布
中華人民共和國國家標準飼料中黃曲霉毒素B的測定酶聯免疫吸附法GB/T17480-1998中國標準出版社出版發行北京西城區復興門外三里河北街16號郵郵政編碼：100045電話：63707337、637874471999年1月第一版2005年1月電子版制作書號：155066·1-15410版權專有侵權必究舉報電話：（010）68533533
GB/T17480-1998前酶聯免疫吸附(ELISA）法測定黃曲霉毒素B,AFB,）是近20年來發展起來的一種新的分析方法它比原GB8381—87薄層熒光限量法(半定量)測定AFB,具有技術先進、靈敏度高、特異性強、精確度高、重復性好、測定速度快、成本低、污染少等優點。其原理是通過AFB,抗體與酶標AFB,抗原和待測抗原之間免疫竟爭反應以及酶的催化顯色反應相結合來檢測樣品中AFB，的含量。國外已研制成專門的測試盒供檢測部門使用，如美國Agri-Screen等公司就有這種產品。本標準等效采用AOAC(美國公職分析化學家協會)中關于棉籽制品和混合飼料中AFB,酶聯免疫吸附篩選法，該法1989年首次在AOAC上獲得通過，本標準為飼料中AFB限量和定量測定法，可與原GB8381—87標準并列使用，而以原標準為仲裁法本標準由全國飼料工業標準化技術委員會提出本標準由全國飼料工業標準化技術委員會歸口本標準由江蘇省微生物研究所、上海市飼料質量監督檢驗站、國家飼料質量監督檢驗中心(北京）上海市嘉定纖檢儀器廠共同組成的起草工作組負責起草。本標準主要起草人：成恒嵩、潘中華、張瑜、陳必芳、岔曉黎、趙曉聯、袁建興、楊歡、徐燕芳、葛其德.
中華人民共和國國家標準飼料中黃曲霉毒素B的測定酶聯免疫吸附法GB/T17480-1998DeterminationofaflatoxinBinfeeds-Enzyme-linkedimmunosorbentassay范圍本標準規定了飼料中黃曲霉毒素B,<AFB,)的酶聯免疫吸附測定(ELISA)方法。本標準適用于各種飼料原料、配(混）合飼料中AFB的測定。2引用標準GB8381-87飼料中黃曲餐毒素B的測定方法3原理利用固相酶聯免疫吸附原理，將AFB，特異性抗體包被于聚苯乙烯微量反應板的孔穴中，再加入樣品提取液(未知抗原)及酶標AFB,抗原(已知抗原)使兩者與抗體之間進行免疫竟爭反應,然后加酶底物顯色，顏色的深淺取決于抗體和酶標AFB,抗原結合的量，即樣品中AFB,多,則被抗體結合酶標AFB,抗原少，顏色淺，反之則深。用目測法或儀器法與AFB,標樣比較來判斷樣品中AFB,的含量。試劑和材料4.1AFB，酶聯免疫測試盒組成4.1.1包被抗體的聚苯乙烯微量反應板：24孔或48孔。4.1.2A試劑：稀釋液，甲醇：蒸水為7：93(V/V)。4.1.3）B試劑：AFB,標準物質(Sima公司，純度100%）溶液,1.00g/L.4.1.4C試劑:酶標AFB抗原(AFB，辣根過氧化物酶交聯物,AFB-HRP),AFB,HRP(摩爾比)<2：1。4.1.5D試劑：酶標AFB抗原稀釋液，含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的pH7.5磷酸鹽緩沖液(PBS)。pH7.5磷酸鹽緩沖液的配制：稱取3.01g磷酸氫二鈉(NazHPO,·12H.O),0.25g磷酸二氫鈉(NaH.PO,·2H.O).8.76g氯化鈉(NaCl)加水溶解至1L、4.1.6E試劑：洗滌母液，含0.05%吐溫-20的PBS溶液.4.1.7F試劑：底物液a，四甲基聯苯胺(TMB）用pH5.0乙酸鈉-檸檬酸緩沖液配成濃度為0.2g/L.pH5.0乙酸鈉-檸樓酸緩沖液配制：稱取15.09g乙酸鈉(CH,COONa·3H.O),1.56g檸檬酸(C.H.O,·H.O)加水溶解至1L。4.1.8G試劑：底物液b.1mlpH5.0乙酸
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