ICS65.120B46中華人民共和國國家標準GB/T17480—1998飼料中黃曲霉毒素B1的測定酶聯(lián)免疫吸附法DeterminationofaflatoxinBinfeeds-Enzyme-linkedimmunosorbentassay1998-08-28發(fā)布1999-01-01實施國家質量技術監(jiān)督局發(fā)布

中華人民共和國國家標準飼料中黃曲霉毒素B的測定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T17480-1998中國標準出版社出版發(fā)行北京西城區(qū)復興門外三里河北街16號郵郵政編碼：100045電話：63707337、637874471999年1月第一版2005年1月電子版制作書號：155066·1-15410版權專有侵權必究舉報電話：（010）68533533

GB/T17480-1998前酶聯(lián)免疫吸附(ELISA）法測定黃曲霉毒素B,AFB,）是近20年來發(fā)展起來的一種新的分析方法它比原GB8381—87薄層熒光限量法(半定量)測定AFB,具有技術先進、靈敏度高、特異性強、精確度高、重復性好、測定速度快、成本低、污染少等優(yōu)點。其原理是通過AFB,抗體與酶標AFB,抗原和待測抗原之間免疫竟爭反應以及酶的催化顯色反應相結合來檢測樣品中AFB，的含量。國外已研制成專門的測試盒供檢測部門使用，如美國Agri-Screen等公司就有這種產(chǎn)品。本標準等效采用AOAC(美國公職分析化學家協(xié)會)中關于棉籽制品和混合飼料中AFB,酶聯(lián)免疫吸附篩選法，該法1989年首次在AOAC上獲得通過，本標準為飼料中AFB限量和定量測定法，可與原GB8381—87標準并列使用，而以原標準為仲裁法本標準由全國飼料工業(yè)標準化技術委員會提出本標準由全國飼料工業(yè)標準化技術委員會歸口本標準由江蘇省微生物研究所、上海市飼料質量監(jiān)督檢驗站、國家飼料質量監(jiān)督檢驗中心(北京）上海市嘉定纖檢儀器廠共同組成的起草工作組負責起草。本標準主要起草人：成恒嵩、潘中華、張瑜、陳必芳、岔曉黎、趙曉聯(lián)、袁建興、楊歡、徐燕芳、葛其德.

中華人民共和國國家標準飼料中黃曲霉毒素B的測定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T17480-1998DeterminationofaflatoxinBinfeeds-Enzyme-linkedimmunosorbentassay范圍本標準規(guī)定了飼料中黃曲霉毒素B,<AFB,)的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)方法。本標準適用于各種飼料原料、配(混）合飼料中AFB的測定。2引用標準GB8381-87飼料中黃曲餐毒素B的測定方法3原理利用固相酶聯(lián)免疫吸附原理，將AFB，特異性抗體包被于聚苯乙烯微量反應板的孔穴中，再加入樣品提取液(未知抗原)及酶標AFB,抗原(已知抗原)使兩者與抗體之間進行免疫竟爭反應,然后加酶底物顯色，顏色的深淺取決于抗體和酶標AFB,抗原結合的量，即樣品中AFB,多,則被抗體結合酶標AFB,抗原少，顏色淺，反之則深。用目測法或儀器法與AFB,標樣比較來判斷樣品中AFB,的含量。試劑和材料4.1AFB，酶聯(lián)免疫測試盒組成4.1.1包被抗體的聚苯乙烯微量反應板：24孔或48孔。4.1.2A試劑：稀釋液，甲醇：蒸水為7：93(V/V)。4.1.3）B試劑：AFB,標準物質(Sima公司，純度100%）溶液,1.00g/L.4.1.4C試劑:酶標AFB抗原(AFB，辣根過氧化物酶交聯(lián)物,AFB-HRP),AFB,HRP(摩爾比)<2：1。4.1.5D試劑：酶標AFB抗原稀釋液，含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的pH7.5磷酸鹽緩沖液(PBS)。pH7.5磷酸鹽緩沖液的配制：稱取3.01g磷酸氫二鈉(NazHPO,·12H.O),0.25g磷酸二氫鈉(NaH.PO,·2H.O).8.76g氯化鈉(NaCl)加水溶解至1L、4.1.6E試劑：洗滌母液，含0.05%吐溫-20的PBS溶液.4.1.7F試劑：底物液a，四甲基聯(lián)苯胺(TMB）用pH5.0乙酸鈉-檸檬酸緩沖液配成濃度為0.2g/L.pH5.0乙酸鈉-檸樓酸緩沖液配制：稱取15.09g乙酸鈉(CH,COONa·3H.O),1.56g檸檬酸(C.H.O,·H.O)加水溶解至1L。4.1.8G試劑：底物液b.1mlpH5.0乙酸