第十一章動物基因工程基因工程的概念：利用DNA體外重組或PCR擴增技術從某種生物基因組中分離感興趣的基因，或是用人工合成的方法獲取基因，然后經過一系列切割，加工修飾，連接反應形成重組DNA分子，再將其轉入適當的受體細胞，以期獲得基因表達的過程.第十一章動物基因工程基因工程的概念：1基因工程(geneengineering)常和以下名稱混用遺傳工程(geneticengineering);基因克隆(genecloning);分子克隆(molecularcloning);基因操作(genemanipulation);重組DNA技術(recombinationDNAtechnique)克隆(clone):作名詞時指含有某目的DNA片段的重組DNA分子或含有該重組分子的無性繁殖系.作動詞時是指基因的分離與重組過程。基因工程(geneengineering)常和以下名稱混用2第一節基因工程的發展歷程1973Cohen第一例成功的克隆實驗1978Genentech公司人胰島素世界上第一種基因工程蛋白藥物

1982第一個基因工程藥物--重組人胰島素在英、美獲準使用

1985第一批轉基因家畜（兔、豬和羊），中國轉基因魚

第一節基因工程的發展歷程1973Cohen第一例成功的克31993

基因工程西紅柿在美國上市1997

英國羅斯林研究所多莉羊1993基因工程西紅柿在美國上市4耐農藥/抗蟲能力

(第一代)Bt抗蟲玉米傳統玉米簡介4

(InputTraits)Source:Monsanto耐農藥/抗蟲能力(第一代)Bt抗蟲玉米傳統玉米簡介45黃金米可以防治維生素A缺乏癥成為健康食品改變營養組成

(第二代)5(OutputTraits)黃金米可以防治維生素A缺乏癥成為健康食品改變營養組成(第二6世界轉基因作物大田釋放情況

(1987.1-1998.4)轉基因作物特性批準項數所占比例抗除草劑129729.6%抗蟲104623.8%提高產品質量88620.2%抗病毒4369.9%改善農學性狀2114.8%抗真菌病2084.7%其他3036.9%總計4387100%世界轉基因作物大田釋放情況

(1987.1-1998.4)轉7轉基因作物種植面積轉基因作物種植面積8[複製人!和我有什麼關係]陳文君著泛亞2001好好吃的樣子我也想吃!生產醫藥及工業用

(第三代)6(OutputTraits)[複製人!和我有什麼關係]陳文君著泛亞2001好好吃9胰島素分子結構胰島素是治療糖尿病的特效藥，長期以來只能依靠從豬、牛等動物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰島素，其產量之低和價格之高可想而知。胰島素分子結構胰島素是治療糖尿病的特效藥，長期以來只能依靠從10將合成的胰島素基因導入大腸桿菌，每2000L培養液就能產生100g胰島素！大規模工業化生產不但解決了這種比黃金還貴的藥品產量問題，還使其價格降低了30%-50%!胰島素生產車間將合成的胰島素基因導入大腸桿菌，每2000L培養液就能產生111帶有人生長激素基因的轉基因小鼠正常小鼠1982年:“超級鼠”帶有人生長激素基因的正常小鼠1982年:“超級鼠”12干擾素治療病毒感染簡直是“萬能靈藥”！過去從人血中提取，300L血才提取1mg！其“珍貴”程度自不用多說。干擾素生產車間干擾素分子結構干擾素治療病毒感染簡直是“萬能靈藥”！過去從人血中提取，3013基因工程人干擾素α-2b（安達芬）是我國第一個全國產化基因工程人干擾素α-2b，具有抗病毒，抑制腫瘤細胞增生，調節人體免疫功能的作用，廣泛用于病毒性疾病治療和多種腫瘤的治療，是當前國際公認的病毒性疾病治療的首選藥物和腫瘤生物治療的主要藥物。基因工程人干擾素α-2b（安達芬）是我國第一個全國產化基因14人造血液、白細胞介素、乙肝疫苗等通過基因工程實現工業化生產，均為解除人類的病苦，提高人類的健康水平發揮了重大的作用。人造血液及其生產人造血液、白細胞介素、乙肝疫苗等通過基因工程實現工業化生產，15轉基因魚生長快、耐不良環境、肉質好的轉基因魚(中國)轉基因魚生長快、耐不良環境、肉質好的轉基因魚(中國)16轉基因牛乳汁中含有人生長激素的轉基因牛(阿根廷)轉基因牛乳汁中含有人生長激素的轉基因牛(阿根廷)17轉黃瓜抗青枯病基因的甜椒轉黃瓜抗青枯病基因的甜椒18轉魚抗寒基因的番茄轉魚抗寒基因的番茄19轉黃瓜抗青枯病基因的馬鈴薯轉黃瓜抗青枯病基因的馬鈴薯20不會引起過敏的轉基因大豆不會引起過敏的轉基因大豆21Fourteenmonth-oldgeneticallyengineered(“biotech”)salmon(left)andnon-engineersalmon(right).Fourteenmonth-oldgenetically22世界上第一個….基因改造蕃茄1994年美國加州FlavrSavrTomato,CalgenePhotobyJackDykinga.SourcesARSPhotoUnit,2001,USDA.3世界上第一個….323SometimesBiotechnologyInvolvestheManipulationofNaturalBiologicalProcessesWithoutModifyingGenesDolly(left)wasaclonecreatedwithouttheneedforanygeneticmodifications.DollyandsurrogateMomSometimesBiotechnologyInvolv24TheBiotechnologyofReproductiveCloningTheBiotechnologyofReproduct25(Science(2002)295:1443)CopyCat–theFirstClonedPet(Science(2002)295:1443)Copy26SoulMates–FiveGeneticallyIdenticalPigletsSoulMates–FiveGenetically27USU’sContribution–AClonedMuleUSU’sContribution–ACloned28基因工程試劑的高回報堿性成纖維細胞生長因子231元/ug紅細胞生成素1072元/ug白細胞介素-2410元/ug巨細胞粒細胞集落刺激因子1960元/ug胰島素10.2元/mg基因工程試劑的高回報堿性成纖維細胞生長因子229第二節基因工程的一般原理第二節基因工程的一般原理30一、常用的工具酶限制性核酸內切酶（Ⅱ類）切割DNADNA連接酶生成3′-5′磷酸二酯鍵DNA聚合酶Ⅰ探針標記、補平3′末端反轉錄酶cDNA合成多聚核苷酸激酶5′磷酸化、探針標記末端轉移酶3′末端多聚尾堿性磷酸酶切除末端磷酸基一、常用的工具酶限制性核酸內切酶（Ⅱ類）切割DNADNA連接31二、基因工程的基本程序一.分—載體和目的基因的分離二.切—限制性內切酶的應用三.接—載體與目的基因連接成重組體四.轉—基因序列轉入細胞五.篩—目的基因序列克隆的篩選和鑒定二、基因工程的基本程序一.分—載體和目的基因的分離32基因克隆示意圖基因克隆示意圖33一.分—載體和目的基因的分離（一）載體1.質粒（plasmid)2.噬菌體（phage)3.動物病毒載體（virus)一.分—載體和目的基因的分離（一）載體34質粒—存在于細菌染色體外的小型環狀雙鏈DNA分子理想的質粒

1.拷貝數多;2.兩三個抗藥性基因terrampr

篩選標志3.合適的限制性內切酶酶切位點（單一）質粒—存在于細菌染色體外的小型環狀雙鏈DNA分子35第十一章動物基因工程課件36第十一章動物基因工程課件37（二）.目的基因的來源和分離

1.PCR

2.基因組文庫

3.cDNA文庫

4.人工化學合成（二）.目的基因的來源和分離1.PCR38二.切—限制性內切酶的應用1.限制性內切酶概念簡稱限制酶，是一類能識別雙鏈DNA分子中特定堿基序列，并由此切割DNA雙鏈結構的核酸內切酶。限制酶從原核生物中提取，現已發現了600多種。二.切—限制性內切酶的應用1.限制性內切酶概念392.命名例：EcoRI，這是從大腸桿菌（Ecoli）R菌珠中分離出的一種限制性內切酶EcoRI序號屬名種名株名2.命名例：EcoRI，這是從大腸桿菌（Ecoli）R403.作用限制性內切酶是分析染色體結構、制作DNA限制圖譜、進行DNA序列測定和基因分離、基因體外重組等研究中不可缺少的工具，是對DNA分子進行操作的手術刀。3.作用限制性內切酶是分析染色體結構、制作DNA限制圖譜、進41Ⅱ型限制性內切酶的基本特征⑴在DNA分子雙鏈的特異性識別序列部位切割，使DNA雙鏈斷裂；⑵識別序列一般為4~7個堿基對，這些堿基順序大都是沿中心軸回轉180°可以重合，也稱回文序列。⑶能產生兩種切割方式：錯位切割產生具有5’-或3’-突出的粘性末端；而沿對稱軸切割雙鏈DNA產生平頭末端，也稱鈍性末端Ⅱ型限制性內切酶的基本特征⑴在DNA分子雙鏈的特異性識別序列42三.接—載體與目的基因連接成重組體1.粘性末端連接2.平端連接三.接—載體與目的基因連接成重組體1.43常用的DNA限制性內切酶的專一性酶辨認的序列和切口說明‥‥AGCT‥‥‥‥TCGA‥‥‥‥GGATCC‥‥‥‥CCTAGG‥‥‥‥AGATCT‥‥‥‥TCTAGA‥‥‥‥GAATTC‥‥‥‥CTTAAG‥‥‥‥AAGCTT‥‥‥‥TTCGAA‥‥‥‥GTCGAC‥‥‥‥CAGCTG‥‥‥‥CCCGGG‥‥‥‥GGGCCC‥‥BamHIAluIBglIEcoRIHindⅢSalISmaI四核苷酸，平端切口六核苷酸，平端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口常用的DNA限制性內切酶的專一性酶辨認的序列和切口說明‥‥44第十一章動物基因工程課件45第十一章動物基因工程課件46第十一章動物基因工程課件47第十一章動物基因工程課件48四.轉—基因序列轉入細胞

1.轉化以質粒作為載體構建的重組DNA分子引入受體細胞的過程

2.轉染以噬菌體或或病毒為載體構建的重組DNA分子引入受體細胞的過程四.轉—基因序列轉入細胞1.轉化49五.篩

—目的基因序列克隆的篩選和鑒定1.按重組載體的標志進行篩選2.核酸雜交法3.DNA限制性內切酶圖譜分析4.PCR5.免疫學方法五.篩

—目的基因序列克隆的篩選和鑒定1.按重組載體的標志501.據重組載體的表型進行篩選可以利用載體質粒對抗生素的抗藥性進行篩選。如質粒pBR332，由4362個核苷酸對構成對四環素及氨芐青霉素均有耐藥性。1.據重組載體的表型進行篩選可以利用載體質粒對抗生素的抗512.DNA限制酶切圖譜分析提取重組DNA經限制性內切酶切割在瓊脂糖凝膠電泳比較重組體與原來載體從DNA片段的大小與有無來區別是否已發生重組。2.DNA限制酶切圖譜分析提取重組DNA523.利用核酸雜交和放射自顯影進行鑒定將菌落DNA轉移到硝酸纖維素濾膜上，另外用放射同位素，標記目的基因，制成溶液，作為“探針”將菌落DNA與“探針”一起溫育，若菌落含有目的基因，就可把“探針”吸附住把已和探針溶液作用過的濾膜沖洗、烘干，與線底片夾在一起放陰暗處數天，經顯影后，有目的基因的所在位置會出現黑點，從黑點位置與菌落DNA比較及鑒定之。3.利用核酸雜交和放射自顯影進行鑒定將菌落DNA轉移到硝53克隆基因的表達1.大腸桿菌表達系統2.真核細胞表達系統克隆基因的表達1.大腸桿菌表達系統54第三節轉基因動物技術

一、轉基因動物的概念

轉基因技術是將外源DNA導入細胞的一種技術。它是在DNA重組技術的基礎上發展起來的。1981年Gordon和Ruddle首次用顯微注射法(Microinjection)把外源基因導入小鼠受精卵的雄核，并將注射后的受精卵植入假孕母鼠子宮，產生了的78只小鼠，其中有2只的所有細胞中(包括生殖細胞)都含有外源基因，但因缺乏啟動子而不能表達，他們把出生后帶外源基因的小鼠叫做轉基因小鼠(TransgenicMice)，自此以后，凡帶有外源基因的動物都叫做轉基因動物(Transgenicanimal)。第三節轉基因動物技術一、轉基因動物的概念55二、轉基因動物技術的一般步驟

(1)選擇能有效表達的蛋白質；(2)克隆與分離編碼這些蛋白質的基因；(3)選擇能與所需組織特異性表達方式相適應的基因調節序列；(4)把調節序列與結構基因重組拼接，并在培養細胞或小鼠中預先檢驗其表達情況；(5)把拼接的基因注射到受精卵的細胞核中；(6)把注射后的受精卵移植到子宮，完成胚胎發(7)檢測幼畜是否整合外源基因、外源基因的表達情況以及外源基因在其后代中的傳遞情況。

二、轉基因動物技術的一般步驟(1)選擇能有效表達的蛋白質；56三、導入基因的方法

導入外源基因的方法有多種，一些方法已在上一節作過敘述，如：①反轉錄病毒轉染法；②磷酸鈣沉淀法；③脂質體介導法；④血影細胞(Bloodshadowcell)介導法。在此再介紹一些方法，1）DNA微注射法；2）精子載體法；3)胚胎干細胞（ES）介導法；4)染色體片段注入法；5)電轉移法等。在轉基因動物中，DNA微注射法比較常用。

三、導入基因的方法導入外源基因的方法有多種，一些57四、基因的選擇與轉基因動物的研究現狀

(一)轉入基因的選擇

(二)轉基因動物的研究意義1．提高動物生長、生產性能的研究

2．改變奶蛋白成分和性質的設想

3．利用家畜產品生產藥物蛋白的研究

四、基因的選擇與轉基因動物的研究現狀(一)轉入基因的選擇58第四節動物克隆技術

一、動物克隆的概念

所謂克隆(Cloning)就是無性繁殖，動物克隆(Animalcloning)就是不經過受精過程而獲得動物新個體的方法。克隆動物(cloninganimal)就是指不經過生殖細胞而直接由體細胞獲得新的動物個體。

第四節動物克隆技術一、動物克隆的概念59二、克隆動物的一般步驟

送入子宮，完成胚胎發育克隆的動物二、克隆動物的一般步驟送入子宮，完成胚胎發育克隆的動物60三、克隆動物的意義與前景

1．可以用于動物資源的種質保存，可盡可能多地保存地球生物圈內的多樣性；2．可以生產移植器官、利用動物作生物反應器生產藥物和提供實驗動物，造福人類。還可以對人類的某些頑癥實施“細胞治療”。3．可以克隆家畜和瀕臨滅絕的動物，如大熊貓等。4．利用哺乳動物體細胞克隆技術，可通過建立轉基因體細胞系的方式，克隆轉基因動物。5．體細胞克隆技術可以直接把優良物種特性傳遞下去，培育優良物種。三、克隆動物的意義與前景1．可以用于動物資源的種質保存，可61第十一章動物基因工程基因工程的概念：利用DNA體外重組或PCR擴增技術從某種生物基因組中分離感興趣的基因，或是用人工合成的方法獲取基因，然后經過一系列切割，加工修飾，連接反應形成重組DNA分子，再將其轉入適當的受體細胞，以期獲得基因表達的過程.第十一章動物基因工程基因工程的概念：62基因工程(geneengineering)常和以下名稱混用遺傳工程(geneticengineering);基因克隆(genecloning);分子克隆(molecularcloning);基因操作(genemanipulation);重組DNA技術(recombinationDNAtechnique)克隆(clone):作名詞時指含有某目的DNA片段的重組DNA分子或含有該重組分子的無性繁殖系.作動詞時是指基因的分離與重組過程。基因工程(geneengineering)常和以下名稱混用63第一節基因工程的發展歷程1973Cohen第一例成功的克隆實驗1978Genentech公司人胰島素世界上第一種基因工程蛋白藥物

1982第一個基因工程藥物--重組人胰島素在英、美獲準使用

1985第一批轉基因家畜（兔、豬和羊），中國轉基因魚

第一節基因工程的發展歷程1973Cohen第一例成功的克641993

基因工程西紅柿在美國上市1997

英國羅斯林研究所多莉羊1993基因工程西紅柿在美國上市65耐農藥/抗蟲能力

(第一代)Bt抗蟲玉米傳統玉米簡介4

(InputTraits)Source:Monsanto耐農藥/抗蟲能力(第一代)Bt抗蟲玉米傳統玉米簡介466黃金米可以防治維生素A缺乏癥成為健康食品改變營養組成

(第二代)5(OutputTraits)黃金米可以防治維生素A缺乏癥成為健康食品改變營養組成(第二67世界轉基因作物大田釋放情況

(1987.1-1998.4)轉基因作物特性批準項數所占比例抗除草劑129729.6%抗蟲104623.8%提高產品質量88620.2%抗病毒4369.9%改善農學性狀2114.8%抗真菌病2084.7%其他3036.9%總計4387100%世界轉基因作物大田釋放情況

(1987.1-1998.4)轉68轉基因作物種植面積轉基因作物種植面積69[複製人!和我有什麼關係]陳文君著泛亞2001好好吃的樣子我也想吃!生產醫藥及工業用

(第三代)6(OutputTraits)[複製人!和我有什麼關係]陳文君著泛亞2001好好吃70胰島素分子結構胰島素是治療糖尿病的特效藥，長期以來只能依靠從豬、牛等動物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰島素，其產量之低和價格之高可想而知。胰島素分子結構胰島素是治療糖尿病的特效藥，長期以來只能依靠從71將合成的胰島素基因導入大腸桿菌，每2000L培養液就能產生100g胰島素！大規模工業化生產不但解決了這種比黃金還貴的藥品產量問題，還使其價格降低了30%-50%!胰島素生產車間將合成的胰島素基因導入大腸桿菌，每2000L培養液就能產生172帶有人生長激素基因的轉基因小鼠正常小鼠1982年:“超級鼠”帶有人生長激素基因的正常小鼠1982年:“超級鼠”73干擾素治療病毒感染簡直是“萬能靈藥”！過去從人血中提取，300L血才提取1mg！其“珍貴”程度自不用多說。干擾素生產車間干擾素分子結構干擾素治療病毒感染簡直是“萬能靈藥”！過去從人血中提取，3074基因工程人干擾素α-2b（安達芬）是我國第一個全國產化基因工程人干擾素α-2b，具有抗病毒，抑制腫瘤細胞增生，調節人體免疫功能的作用，廣泛用于病毒性疾病治療和多種腫瘤的治療，是當前國際公認的病毒性疾病治療的首選藥物和腫瘤生物治療的主要藥物。基因工程人干擾素α-2b（安達芬）是我國第一個全國產化基因75人造血液、白細胞介素、乙肝疫苗等通過基因工程實現工業化生產，均為解除人類的病苦，提高人類的健康水平發揮了重大的作用。人造血液及其生產人造血液、白細胞介素、乙肝疫苗等通過基因工程實現工業化生產，76轉基因魚生長快、耐不良環境、肉質好的轉基因魚(中國)轉基因魚生長快、耐不良環境、肉質好的轉基因魚(中國)77轉基因牛乳汁中含有人生長激素的轉基因牛(阿根廷)轉基因牛乳汁中含有人生長激素的轉基因牛(阿根廷)78轉黃瓜抗青枯病基因的甜椒轉黃瓜抗青枯病基因的甜椒79轉魚抗寒基因的番茄轉魚抗寒基因的番茄80轉黃瓜抗青枯病基因的馬鈴薯轉黃瓜抗青枯病基因的馬鈴薯81不會引起過敏的轉基因大豆不會引起過敏的轉基因大豆82Fourteenmonth-oldgeneticallyengineered(“biotech”)salmon(left)andnon-engineersalmon(right).Fourteenmonth-oldgenetically83世界上第一個….基因改造蕃茄1994年美國加州FlavrSavrTomato,CalgenePhotobyJackDykinga.SourcesARSPhotoUnit,2001,USDA.3世界上第一個….384SometimesBiotechnologyInvolvestheManipulationofNaturalBiologicalProcessesWithoutModifyingGenesDolly(left)wasaclonecreatedwithouttheneedforanygeneticmodifications.DollyandsurrogateMomSometimesBiotechnologyInvolv85TheBiotechnologyofReproductiveCloningTheBiotechnologyofReproduct86(Science(2002)295:1443)CopyCat–theFirstClonedPet(Science(2002)295:1443)Copy87SoulMates–FiveGeneticallyIdenticalPigletsSoulMates–FiveGenetically88USU’sContribution–AClonedMuleUSU’sContribution–ACloned89基因工程試劑的高回報堿性成纖維細胞生長因子231元/ug紅細胞生成素1072元/ug白細胞介素-2410元/ug巨細胞粒細胞集落刺激因子1960元/ug胰島素10.2元/mg基因工程試劑的高回報堿性成纖維細胞生長因子290第二節基因工程的一般原理第二節基因工程的一般原理91一、常用的工具酶限制性核酸內切酶（Ⅱ類）切割DNADNA連接酶生成3′-5′磷酸二酯鍵DNA聚合酶Ⅰ探針標記、補平3′末端反轉錄酶cDNA合成多聚核苷酸激酶5′磷酸化、探針標記末端轉移酶3′末端多聚尾堿性磷酸酶切除末端磷酸基一、常用的工具酶限制性核酸內切酶（Ⅱ類）切割DNADNA連接92二、基因工程的基本程序一.分—載體和目的基因的分離二.切—限制性內切酶的應用三.接—載體與目的基因連接成重組體四.轉—基因序列轉入細胞五.篩—目的基因序列克隆的篩選和鑒定二、基因工程的基本程序一.分—載體和目的基因的分離93基因克隆示意圖基因克隆示意圖94一.分—載體和目的基因的分離（一）載體1.質粒（plasmid)2.噬菌體（phage)3.動物病毒載體（virus)一.分—載體和目的基因的分離（一）載體95質粒—存在于細菌染色體外的小型環狀雙鏈DNA分子理想的質粒

1.拷貝數多;2.兩三個抗藥性基因terrampr

篩選標志3.合適的限制性內切酶酶切位點（單一）質粒—存在于細菌染色體外的小型環狀雙鏈DNA分子96第十一章動物基因工程課件97第十一章動物基因工程課件98（二）.目的基因的來源和分離

1.PCR

2.基因組文庫

3.cDNA文庫

4.人工化學合成（二）.目的基因的來源和分離1.PCR99二.切—限制性內切酶的應用1.限制性內切酶概念簡稱限制酶，是一類能識別雙鏈DNA分子中特定堿基序列，并由此切割DNA雙鏈結構的核酸內切酶。限制酶從原核生物中提取，現已發現了600多種。二.切—限制性內切酶的應用1.限制性內切酶概念1002.命名例：EcoRI，這是從大腸桿菌（Ecoli）R菌珠中分離出的一種限制性內切酶EcoRI序號屬名種名株名2.命名例：EcoRI，這是從大腸桿菌（Ecoli）R1013.作用限制性內切酶是分析染色體結構、制作DNA限制圖譜、進行DNA序列測定和基因分離、基因體外重組等研究中不可缺少的工具，是對DNA分子進行操作的手術刀。3.作用限制性內切酶是分析染色體結構、制作DNA限制圖譜、進102Ⅱ型限制性內切酶的基本特征⑴在DNA分子雙鏈的特異性識別序列部位切割，使DNA雙鏈斷裂；⑵識別序列一般為4~7個堿基對，這些堿基順序大都是沿中心軸回轉180°可以重合，也稱回文序列。⑶能產生兩種切割方式：錯位切割產生具有5’-或3’-突出的粘性末端；而沿對稱軸切割雙鏈DNA產生平頭末端，也稱鈍性末端Ⅱ型限制性內切酶的基本特征⑴在DNA分子雙鏈的特異性識別序列103三.接—載體與目的基因連接成重組體1.粘性末端連接2.平端連接三.接—載體與目的基因連接成重組體1.104常用的DNA限制性內切酶的專一性酶辨認的序列和切口說明‥‥AGCT‥‥‥‥TCGA‥‥‥‥GGATCC‥‥‥‥CCTAGG‥‥‥‥AGATCT‥‥‥‥TCTAGA‥‥‥‥GAATTC‥‥‥‥CTTAAG‥‥‥‥AAGCTT‥‥‥‥TTCGAA‥‥‥‥GTCGAC‥‥‥‥CAGCTG‥‥‥‥CCCGGG‥‥‥‥GGGCCC‥‥BamHIAluIBglIEcoRIHindⅢSalISmaI四核苷酸，平端切口六核苷酸，平端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口六核苷酸，粘端切口常用的DNA限制性內切酶的專一性酶辨認的序列和切口說明‥‥105第十一章動物基因工程課件106第十一章動物基因工程課件107第十一章動物基因工程課件108第十一章動物基因工程課件109四.轉—基因序列轉入細胞

1.轉化以質粒作為載體構建的重組DNA分子引入受體細胞的過程

2.轉染以噬菌體或或病毒為載體構建的重組DNA分子引入受體細胞的過程四.轉—基因序列轉入細胞1.轉化110五.篩

—目的基因序列克隆的篩選和鑒定1.按重組載體的標志進行篩選2.核酸雜交法3.DNA限制性內切酶圖譜分析4.PCR5.免疫學方法五.篩

—目的基因序列克隆的篩選和鑒定1.按重組載體的標志1111.據重組載體的表型進行篩選可以利用載體質粒對抗生素的抗藥性進行篩選。如質粒pBR332，由4362個核苷酸對構成對四環素及氨芐青霉素均有耐藥性。1.據重組載體的表型進行篩選可以利用載體質粒對抗生素的抗1122.DNA限制酶切圖譜分析提取重組DNA經限制性內切酶切割在瓊脂糖凝膠電泳比較重組體與原來載體從DNA片段的大小與有無來區別是否已發生重組。2.DNA限制酶切圖譜分析提取重組DNA1133.利用核酸雜交和放射自顯影進行鑒定將菌落DNA轉移到硝酸纖維素濾膜上，另外用放射同位素，標記目的基因，制成溶液，作為“探針”將菌落DNA與“探針”一起溫育，若菌落含有目的基因，就可把“探針”吸附住把已和探針溶液作用過的濾膜沖洗、烘干，與線底片夾在一起放陰暗處數天，經顯影后，有目的基因的所在位置會出現黑點，從黑點位置與菌落DNA比較及鑒定之。3.利用核酸雜交和放射自顯影進行鑒定將菌落DNA轉移到硝114克隆基因的表達1.大腸桿菌表達系統2.真核細胞表達系統克隆基因的表達1.大腸桿菌表達系統115第三節轉基因動物技術

一、轉基因動物