. S700SC3. 中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準T2商品化試劑盒檢測方菌落總數 方法二Ⅱ4發布 1實施中華人民共和國海關總署 發布T2前 言本文件按照標準化工作導則 第1部分標準化文件的結構和起草規則的規定起草。本文件是商品化試劑盒檢測方法 菌落總數的第2部分T4已經發布了以下部分:—商品化試劑盒檢測方法 菌落總數 方法一;—商品化試劑盒檢測方法 菌落總數 方法二。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由中華人民共和國海關總署提出并歸口。本文件起草單位中華人民共和國福州海關。本文件主要起草人鄭晶林杰郭菁肖穎陳彬董健柯璐徐珊張溫玲戴曉麗。ⅠT2商品化試劑盒檢測方菌落總數 方法二范圍本文件規定了食品中兩種M菌落總數測試片MMe和M-Md的檢測方法。本文件適用于食品中菌落總數的測定。該方法不適于米粉等0倍稀釋后流動性不強的食品不適于0倍稀釋后色度較深的食品。規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中注日期的引用文件僅該日期對應的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件。2食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數測定9實驗室生物安全通用要求5實驗室質量控制規范 食品微生物檢5商品化食品檢測試劑盒評價方法6食品微生物檢驗方法確認技術規范術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。生物安全措施為了保護實驗室人員的安全和防止污染應由具備資格的工作人員檢測菌落總數。所有培養物和廢棄物應按照9和5中的有關規定執行。技術概要菌落總數測試片MM是一種預先制備好的培養基系統其培養基為標準的平板計數瓊脂培養基并且含菌落指示劑菌落在測試片上呈紅色這樣可增強菌落計數效果。菌落總數測試片MMd是一種預先制備好的培養基系統包含營養成分冷水可溶性凝膠及雙聯指示劑技術菌落在測試片上呈紅色和藍色h即可對食品基質進行菌落計數。1T2儀器和設備除微生物實驗室常規滅菌和培養設備外其他設備和材料如下:1恒溫培養箱61℃01℃。2冰箱2℃5℃。3恒溫水浴箱61℃天平感量為。均質器。振蕩器。: (

( ) 。無菌吸管1L具1L刻度0L具L刻度

或微量移液器及吸頭無菌錐形瓶容量為00。無菌培養皿直徑為0。計或比色管或精密試紙。放大鏡或和菌落計數器。壓板。試劑和材料菌落總數測試片本文件使用的測試片MMce和MMde由M有限公司生產參考5和按商品化食品檢測試劑盒評價程序進行評價評價結果參見附錄A和附錄。磷酸鹽緩沖液按附錄C中。無菌生理鹽水按附錄C中。1L氫氧化鈉稱取gH溶于0L蒸餾水中。1L鹽酸移取0L濃鹽酸用蒸餾水稀釋至0。檢測程序菌落總數測試片檢測程序見圖。2T2圖1菌落總數測試片檢測方法程序操作步驟樣品制備和稀釋按照2的方法制備0樣品勻液。無菌操作調節該樣品勻液的H為,酸性樣液用1L氫氧化鈉調節堿性樣液用1L鹽酸調節或根據產品標準規定的酸堿溶液來調節值。按照2方法吸取0樣品勻液接種

制備0倍系列稀釋樣品勻液。根據對樣品污染情況的估計選擇2個個適宜稀釋度樣品勻液進行檢驗根據需要選擇Me測試片或MMde測試片。將菌落總數測試片置于平坦表面處揭開上層膜吸取某一稀釋度的1樣品勻液垂直滴加在測試片的中央處然后將上層膜輕輕放下將壓板放置在上層膜中央處輕輕的壓下使樣液均勻覆蓋于圓形的培養面積上切勿扭轉壓板。拿起壓板靜置至少1n以使培養基凝固。每個稀釋度接種兩張測試片。同時分別吸取1空白稀釋液加入兩張測試片內作空白對照。3T2培養MM培養將測試片的透明面朝上水平置于培養箱內可堆疊至0片。在6℃1℃條件下培養8±h水產品01℃培養。MMd培養在61℃條件下培養如有產品標準等特殊要求則按相應的標準或要求進行。菌落計數MM計數到培養時間應立即計數選取菌落數在00U之間的測試片計數菌落總數記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位表示。計數所有紅色菌落。如果無法確定紅點是菌落還是紅色食品基質可以延長培養h后觀察。如果紅點變大則確定是菌落如果紅點未變大則確定是基質。當細菌濃度很高時整個測試片會變成紅色將結果記錄為多不可計o。MMe有0個等分格當菌落數量過多計數困難時可選擇幾個有代表性菌落的小方格計算平均菌落數再乘以相應倍數即可得到整個測試片上的估算菌落數。一些微生物會液化凝膠造成局部擴散或菌落模糊的現象。如果液化現象干擾計數可以計數未液化的面積來估算菌落濃度。MMd計數到培養時間應立即計數選取菌落數在00U之間的測試片計數菌落總數記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位s表示。計數所有藍色和紅色菌落。如果無法確定紅點是菌落還是紅色食品基質可以延長培養h后觀察。如果紅點變大則確定是菌落如果紅點未變大則確定是基質。當細菌濃度很高時整個測試片會變成紅色或藍色將結果記錄為多不可計s。MMde有0個等分格當菌落數量過多計數困難時可選擇幾個有代表性菌落的小方格計算平均菌落數再乘以相應倍數即可得到整個測試片上的估算菌落數。一些微生物會液化凝膠造成局部擴散或菌落模糊的現象。如果液化現象干擾計數可以計數未液化的面積來估算菌落濃度。結果和報告菌落總數的計算方法和菌落總數報告的規則按照。4T2附 錄A資料性)菌落總數測試片MM評價結果線性和準確度見表1和表。表1測試片方法和參考方法的線性關系食品種類食品基質線性方程相關系數2)T檢驗值肉類凍雞肉847熟雞肉852魚類和海產品丁香魚592旗魚松960凍帶魚354水果和蔬菜制品蘿卜絲901沙拉739青豆892乳制品純牛奶702嬰兒奶粉478全脂奶粉186雜品餡餅192面條523咖喱粉405綠茶42051表25類食品的線性關系食品種類g值范圍線性方程相關系數2)肉類696魚類和海產品582水果和蔬菜制品644乳制品071雜品625所有食品54注y為測試片法菌落數的對數值x為參考法菌落數的對數值。5T2耐變性選用兩個污染水平的奶粉樣品對培養溫度和培養時間兩個變量進行耐變性試驗經驗證培養溫度選擇5℃和7℃培養時間選擇h和對檢測結果的標準偏差與在重復性條件下得到的標準偏差沒有明顯差別表明說明書中對培養溫度為61℃和培養時間為h的耐變性范圍不影響檢測結果。見表。表3耐變性試驗結果實驗條件菌株添加水平測試結果平均值Sr123457℃h高濃度6063039低濃度00000437℃h高濃度9249974低濃度00622255℃h高濃度6564658低濃度04826275℃h高濃度0494654低濃度4446651批間變異取3個不同批號的測試片對兩個污染濃度奶粉樣品進行批間變異實驗3個不同批號測試片測試結果的標準偏差與在重復性條件下得到的標準偏差沒有明顯差別說明不同批號產品無明顯差異。見表。表4批間變異試驗結果菌株濃度批號測定結果nSrRSD12345高濃度U08888810B48260639G64266523總平均值7總Sr2低濃度U18666358B28925931G35594953總平均值1總Sr46實驗室間驗證試驗

T28家實驗室對高中低3個接種水平樣品的5個平行測試結果室間重復性和再現性分析表明方法穩定可靠。見表。表5實驗室間驗證試驗結果添加水平實驗室數參考法測試片法rRrR高85831中82832低830997T2附 錄B資料性)菌落總數測試片MMd評價結果線性和準確度見表1和表。表1測試片方法和參考方法的線性關系食品種類食品基質線性方程相關系數2)T檢驗值肉類糟鴨855凍豬肉080鹵牛肉628魚類和海產品魷魚絲994明蝦084鯧魚611水果和蔬菜制品開心果671葡萄汁796沙拉083乳制品純牛奶761奶粉276圣代261雜品茶葉018五谷粉630雞精95851表25類食品的線性關系食品種類g值范圍線性方程相關系數2)肉制品036魚類和海產品874雜品586乳制品895家禽類984所有樣品74注y為測試片方法菌落數的對數值x為參考方法菌落數的對數值。8耐變性

T2選用兩個污染水平的純牛奶樣品對培養溫度和培養時間兩個變量進行耐變性試驗。經驗證培養溫度選擇5℃和7℃培養時間選擇h和h對檢測結果的標準偏差r與在重復性條件下得到的標準偏差r無顯著差異表明說明書中對培養溫度61℃和培養時間h的耐變性范圍不影響檢測結果。見表。表3耐變性試驗結果實驗條件菌株添加水平測試結果值平均值SrRSD123457℃h高水平27016701低水平908490547℃h高水平12530678低水平319951825℃h高水平96013280低水平435254335℃h高水平29395003低水平39409126批間變異取3個不同批號測試片對兩個污染濃度奶粉樣品進行批間變異實驗3個不同批號測試片測試結果的標準偏差與在重復性條件下得到的標準偏差沒有明顯差別說明不同批號產品無明顯差異。見表。表4批間變異試驗結果菌株濃度批號測定結果值平均值SrRSD12345高水平1A251032086A688693148A43368519總平均值4總Sr8低水平1A501555376A185185108A88158686總平均值5總Sr99T2實驗室間驗證試驗8家實驗室對高中低3個接種水平樣品的5個平行測試結果室間重復性和再現性分析表明方法穩定可靠。見表。表5實驗室間驗證試驗結果添加水平實驗室數rR參考法測試片法參考法測試片法高86161中82424低817170T2附 錄C規范性)培養基和試劑磷酸鹽緩沖液成分磷酸二氫鉀4) g蒸餾水 0LH值 2制法貯存液稱取g的磷酸二氫鉀溶于0L蒸餾水中用大約5L的1L氫氧化鈉溶液調節用蒸餾水稀釋至0L后貯存于冰箱。稀釋液取貯存液5用蒸餾水稀釋至0分裝于適宜容器中于1℃高壓下滅菌5。