hTERC基因與宮頸癌發生、發展相關性牛艷昕;王楠【摘要】目的探討分析人染色體端粒酶基因(hTERC)與宮頸癌發生、發展相關性.方法選取筆者醫院婦科收治的經陰道鏡宮頸活檢結果異常的患者173例，再選擇同期行宮頸檢查無異常的40例作為正常對照，采用熒光原位雜交技術(FISH)檢測受試者宮頸脫落細胞標本hTERC基因的表達情況,并分析HPV感染與hTERC陽性率之間的關系結果正常對照組hTERC陽性率7.50%、CINI患者hTERC陽性率15.79%、CINH患者hTERC陽性率46.15%、CINB患者hTERC陽性率68.63%、宮頸癌患者hTERC陽性率91.11%,隨著宮頸脫落細胞病變的進程hTERC陽性率顯著遞增(P<0.05);高危型HPV感染合并hTERC陽性患者其癌前病變及癌比例為100.00%,顯著高于高危型HPV感染的hTERC陽性患者以及無高危型HPV感染患者(P<0.05).結論hTERC基因擴增參與到了宮頸癌的發生、發展過程當中，隨著宮頸病變分級的增加而呈上升趨勢,hTERC基因陽性表達對宮頸癌的早期診斷具有一定的臨床價值.％ObjectiveToinvestigatethecorrelationbetweenthehumantelomerasegene(hTERC)andthegenerationandprogressionofcervicalcancer.MethodsAtotalof173patientswithabnormalresultsofcervicalbiopsybycolposcopywereselected,meanwhilethe40normalcaseswereselectedascontrolgroup.TheexpressionofhTERCgenewasdetectedbyfluorescenceinsituhybridization(FISH),andtherelationshipbetweentheHPVinfectionandthepositiverateofhTERCwasanalyzed.ResultsThepositiverateofhTERCinthecontrolgroupwas7.50%,whichwasrespectively15.79%,46.15%,68.63%,and91.11%intheCINIgroup,CINIIgroup,CINIEgroup,andcervicalcancergroup.ThepositiverateofthehTERCwassignificantlyincreasedduringtheprogressionofcervicalexfoliativecelllesions(P<0.05).Theprecancerouslesionandcancerrateinpatientswithhigh-riskHPVinfectionandpositivehTERCwas100%,significantlyhigherthanthatofpatientswithhigh-riskHPVinfectionaswellaspositivehTERCandalsononhigh-riskHPVinfectedpatients(P<0.05).ConclusionhTERCgeneamplificationisinvolvedinthedevelopmentofcervicalcancer,andincreasewithcervicallesionsrising,andthepositiveexpressionofhTERCgeneisvaluabletotheearlydiagnosisofcervicalcancer.【期刊名稱】《醫學研究雜志》【年(卷)，期】2018(047)006【總頁數】3頁(P164-166)【關鍵詞】人染色體端粒酶基因;宮頸癌;宮頸病變;相關性【作者】牛艷昕;王楠【作者單位】321000金華市人民醫院婦產科;321000金華市人民醫院婦產科【正文語種】中文【中圖分類】R737AbstractObjectiveToinvestigatethecorrelationbetweenthehumantelomerasegene(hTERC)andthegenerationandprogressionofcervicalcancer.MethodsAtotalof173patientswithabnormalresultsofcervicalbiopsybycolposcopywereselected,meanwhilethe40normalcaseswereselectedascontrolgroup.TheexpressionofhTERCgenewasdetectedbyfluorescenceinsituhybridization(FISH),andtherelationshipbetweentheHPVinfectionandthepositiverateofhTERCwasanalyzed.ResultsThepositiverateofhTERCinthecontrolgroupwas7.50%,whichwasrespectively15.79%,46.15%,68.63%,and91.11%intheCINIgroup,CINIlgroup,CINingroup,andcervicalcancergroup.ThepositiverateofthehTERCwassignificantlyincreasedduringtheprogressionofcervicalexfoliativecelllesions(P<0.05).Theprecancerouslesionandcancerrateinpatientswithhigh-riskHPVinfectionandpositivehTERCwas100%,significantlyhigherthanthatofpatientswithhigh-riskHPVinfectionaswellaspositivehTERCandalsononhigh-riskHPVinfectedpatients(P<0.05).ConclusionhTERCgeneamplificationisinvolvedinthedevelopmentofcervicalcancer,andincreasewithcervicallesionsrising,andthepositiveexpressionofhTERCgeneisvaluabletotheearlydiagnosisofcervicalcancer.KeywordsHumantelomerasegene;Cervicalcancer;Cervicallesions;Correlation宮頸癌是僅次于乳腺癌的第2位致女性死亡的常見惡性腫瘤，近年來報道顯示，我國宮頸癌發生率逐年上升且發病年齡呈年輕化趨勢［1］。為了有效降低宮頸癌的發生率以及患者的病死率，宮頸癌的早期診斷和治療便顯得尤為重要。宮頸上皮內瘤變是目前明確的癌前病變，在向惡性腫瘤的演變過程當中，多種癌基因、侵襲相關基因的表達差異具有顯著差異［2］。人染色體端粒酶RNA(humantelomeraseRNAcomponent,hTERC)位于3號染色體長臂，hTERC基因擴增可阻止細胞的凋亡，hTERC的異常擴增可引發腫瘤［3］。目前研究報道已經證實，hTERC基因在肺鱗癌、骨髓癌、子宮頸腺癌或鱗癌等中均存在異常擴增，認為hTERC異常擴增與腫瘤的發展有關［4,5］。本研究探討分析hTERC與宮頸癌發生、發展相關性。資料與方法臨床資料:選取2013年3月~2016年3月筆者醫院婦科收治的經陰道鏡宮頸活檢結果異常的患者173例，患者年齡23-65歲，平均年齡37.42±6.33歲。173例患者均無妊娠期、無宮頸手術史、初次性陰道鏡檢查、無子宮切除史、無宮頸CIN病史。將上述173例患者作為研究組，經陰道鏡宮頸活檢病理確診，宮頸上皮內瘤變患者135例，包括CINI患者39例、CINH患者51例、CINB患者45例，浸潤性宮頸癌患者38例。此外再選擇同期行宮頸檢查無異常的40例作為正常對照組，正常對照組非妊娠期、無子宮切除史、無宮頸CIN病史、無宮頸手術史，年齡25-63歲，平均年齡36.28±8.32歲。正常對照組宮頸脫落細胞均由液基細胞學制片，并由筆者醫院兩位病理科醫師分別閱片，均一致認為無異常。細胞標本采集：使用引導窺器撐開患者陰道，將宮頸暴露出來，輕輕擦拭宮頸表面黏液以及血性分泌物后，將薄層液基細胞宮頸刷插入受試者宮頸口，均勻旋轉宮頸刷5-8周后取出，放于TCT保存液瓶中備用。TCT低滲制片及FISH檢測將TCT保存液離心10min(300r/min)，加入5ml膠原酶，然后放置于37°C水浴，離心后加入去離子水低滲40min，再次離心去上清后加入5ml固定液，固定10min后重復離心再固定，兩次固定完成后根據細胞數量加入適量固定液，將細胞吹打懸浮，滴片，自然干燥，置于56C下烤片2h。涂片預處理以及FISH操作步驟嚴格按照試劑盒使用說明書進行。FISH信號判斷及閾值建立使用Olympic熒光顯微鏡觀察細胞的熒光夾雜信號，對圖片CSP3以及hTERC基因雙色探針的雜交情況進行分析，采用FISH分析軟件進行圖像分析。結果判定：紅色信號以及綠色信號分別為2個判斷為正常細胞;紅色信號>2個、綠色信號22個判定為hTERC基因擴增。閾值建立：通過對40例正常標本進行檢測分析，每例標本計數100個細胞，計算出現2個以上hTERC信號細胞的百分比，并計算閾值，閾值=均數+3x標準差。將其余樣本計數分別于閾值相比較，若〉閾值則判斷為陽性，若<閾值則判定為陰性。5.統計學方法：采用統計學軟件包SPSS22.0統計學軟件進行數據統計分析，兩組計數資料比較采用X2檢驗，3組及以上計數資料比較采用秩和檢驗，以P<0.05為差異具有統計學意義。結果不同病理分級患者hTERC基因陽性表達比較:正常對照組hTERC陽性率7.50%、CINI患者hTERC陽性率15.79%、CINH患者hTERC陽性率46.15%、CINB患者hTERC陽性率68.63%、宮頸癌患者hTERC陽性率91.11%，隨著宮頸脫落細胞病變的進程，hTERC陽性率顯著遞增(P<0.05),CINH、CINB以及宮頸癌患者hTERC陽性率均顯著高于正常對照組(P<0.05)，見表1。表1不同病理分級患者hTERC基因陽性表達比較組別nhTERC陽性例數hTERC陽性率(%)x2P正常對照組4037.50CINI38615.79CINH391846.15*83.886<0.05CINB513568.63*宮頸癌454191.11*合計21310348.36與正常對照組比較，*P<0.05不同病理分級患者高危型HPV感染及hTERC基因表達情況分析:對213例受試者進行HPV感染檢測，其中高危型HPV感染75例，分析高危型HPV感染與hTERC基因擴增相比較，高危型HPV感染合并hTERC陽性患者其癌前病變及癌比例為100.00%，顯著高于高危型HPV感染的hTERC陽性患者以及無高危型HPV感染患者(P<0.05)，見表2。表2不同病理分級患者高危型HPV感染與hTERC基因表達情況分析組別n正常對照例數(n)癌前病變及癌例數(n)癌前病變及癌比例(％)x2PhTERC(-)HPV(-)35191645.71hTERC(-)HPV(+)62184470.9746.815<0.05hTERC(+)HPV(-)1331076.92hTERC(+)HPV(+)1030103100.00合計2134017381.22討論近些年來，隨著現代醫療技術的發展，宮頸細胞學篩查以及HPV檢查在臨床中普及，目前宮頸癌的檢出率大大提高，從而有效降低了宮頸癌患者的病死率。但是由于細胞學篩查檢測重復性較差，并且受到檢測者主觀性影響較強，雖然目前已經開始運用HPV-DNA檢測方法，但是由于大部分女性HPV感染并不是永久性的，因此采取該種手段檢測仍不能較好對預測疾?。?］。端粒作為真核細胞染色體末端的重復片段，其作用在于維持染色體的完整性及其穩定性，端粒酶作為一種反轉錄酶，能夠以自身的RNA作為模板合成端粒DNA［7］。學者研究顯示，宮頸細胞由非典型性發育異常向宮頸癌轉變的過程中，幾乎均伴有hTERC基因的擴增［8］。熒光原位雜交(FISH)技術利用堿基的互補性，使用標記有熒光素的探針與DNA樣本進行雜交，通過熒光顯微鏡觀察熒光信號從而發現DNA樣本是否存在異常［9］。FISH技術具有著操作簡單、重復性好，受環境條件影響較小等臨床有點，目前已經將其廣泛運用于多種基因相關疾病的診斷當中［10，11］。本研究采用FISH技術檢測各組受試者hTERC基因擴增情況，結果顯示，正常對照組hTERC陽性率7.50%、CINI患者hTERC陽性率15.79%、CINH患者hTERC陽性率46.15%、CINB患者hTERC陽性率68.63%、宮頸癌患者hTERC陽性率91.11%，隨著宮頸脫落細胞病變的進程，hTERC陽性率顯著遞增(P<0.05)。這與國內夕卜相關研究報道結果相似，表明hTERC基因在宮頸癌以及CINH、CINB中異常表達，且隨著宮頸組織學病變程度的增加，hTERC基因的陽性表達率也不斷增加［12,13］。而對于CINI患者，其hTERC陽性表達率與正常對照組比較差異無統計學意義，提示可能CINI還并不屬于宮頸癌變的階段，而僅為鱗狀上皮細胞代謝的一種暫時性的異型改變，因此臨床上CINI患者其自然緩解率較高。有研究者對宮頸癌的病因機制進行研究認為，HPV感染較端粒酶基因水平上調更早，HPV感染是端粒酶發生活化的原因，并推測端粒酶基因激活可能是HPV致癌機制中的一個重要環節[14,15]。本研究結果顯示，高危型HPV感染合并hTERC陽性患者其癌前病變及癌比例為100%，顯著高于高危型HPV感染的hTERC陽性患者以及無高危型HPV感染患者(P<0.05)。表明高危型HPV感染以及hTERC基因擴增與宮頸癌的發生、發展均有著一定的聯系，提示hTERC基因陽性表達對宮頸癌的早期診斷具有一定的臨床意義。綜上所述，hTERC基因擴增參與到了宮頸癌的發生、發展過程當中，隨著宮頸病變分級的增加而呈上升趨勢，hTERC基因陽性表達對宮頸癌的早期診斷具有一定的臨床意義。參考文獻【相關文獻】1趙惠明.hTERC基因在不同類型宮頸脫落細胞中的表達及臨床意義[J].中國老年學雜志,2014,11(19):5396-53972鄭良楷，孔令員,周裕林，等.hTERC基因與LCT、HPV檢測在宮頸高級別病變篩查中的價值[J].醫學研究雜志,2014,43(11):88-92,1183徐靜，李磊漲麗，等.不同CIN分級宮頸病變組織中hTERC基因表達及意義凹.山東醫藥,2014,7(14):43-454LiT,TangL,BianD,etal.DetectionofhTERCandc-MYCgenesincervicalepithelialexfoliatedcellsforcervicalcancerscreening[J].IntJMolMed,2014,33(5):1289-12975李帆，王治潔,帥翰林，等.hTERC基因與高危型人乳頭瘤病毒分型的相關性研究[J].醫學分子生物學雜志,2015,7(1):17-206麗紅,賀昕紅，龍燕，等.HTERC基因在宮頸上皮內瘤樣病變治療后監測的相關性研究[J].首都醫科大學學報,2015,12(6):946-9527楊瑩瑩，潘景，孫春意，等.hTERC基因表達及其和HPV感染在宮頸病變中的關系[J].中國婦幼保健,2015,30(16):2654-26568易利紅.hTERC基因與宮頸癌前病變及宮頸癌發生發展關系的探究[J].海南醫學院學報,2016,22(11):1141-11449ZhengX,LiangP,ZhengY,etal.ClinicalsignificanceofhTERC