人類細胞質RNA提取人類細胞質RNA提取1提取總RNA電泳合成cDNA第鏈PCR提取總RNA2真核細胞RNA的種類真核細胞總RNA主要由rRNA(80-85%)tRNA和核內小分子RNA(10-15%)、mRNA(15%)組成,其中rRNA、tRNA和mRNA位于細胞質中。大多數真核細胞mRNA在其3端均有一多聚A(PolyA)尾巴真核細胞RNA的種類3實驗前的準備RNA實驗失敗的主要原因是RNA酶的污染。由于RNA酶廣泛存在而穩定,可耐受多種處理而不被滅活,如煮沸、高壓滅菌等只要存在少量的RNA酶就會引起RNA的降:,而所制備的RNA的純度和完整性又可直接影響RNA分析的結果,所以建立一個無RNA酶的環境對于制備RNA很重要實驗前的準備4常用的RNA酶抑制劑1、焦磷酸二乙酯(DEPC):與RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環結合,進而使RNA酶失活,有高致癌性。(實驗準備階段使用)2、異硫氰酸胍、氯仿:提取RNA同時也使:RNA酶失活。3、RNA酶的蛋白抑制劑(RNasin):從大鼠:肝或人胎盤中提取得來的酸性糖蛋白。(合成cDNA階段使用常用的RNA酶抑制劑5人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件6人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件7人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件8人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件9人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件10人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件11人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件12人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件13人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件14人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件15人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件16人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件17人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件18人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件19人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件20人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件21人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件22人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件23人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件24人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件25人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件26人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件27人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件28人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件29人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件30人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件31人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件32人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件33人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件34人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件35人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件36人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件37人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件38人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件39人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件40人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件41人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件42人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件43人類細胞質RNA提取人類細胞質RNA提取44提取總RNA電泳合成cDNA第鏈PCR提取總RNA45真核細胞RNA的種類真核細胞總RNA主要由rRNA(80-85%)tRNA和核內小分子RNA(10-15%)、mRNA(15%)組成,其中rRNA、tRNA和mRNA位于細胞質中。大多數真核細胞mRNA在其3端均有一多聚A(PolyA)尾巴真核細胞RNA的種類46實驗前的準備RNA實驗失敗的主要原因是RNA酶的污染。由于RNA酶廣泛存在而穩定,可耐受多種處理而不被滅活,如煮沸、高壓滅菌等只要存在少量的RNA酶就會引起RNA的降:,而所制備的RNA的純度和完整性又可直接影響RNA分析的結果,所以建立一個無RNA酶的環境對于制備RNA很重要實驗前的準備47常用的RNA酶抑制劑1、焦磷酸二乙酯(DEPC):與RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環結合,進而使RNA酶失活,有高致癌性。(實驗準備階段使用)2、異硫氰酸胍、氯仿:提取RNA同時也使:RNA酶失活。3、RNA酶的蛋白抑制劑(RNasin):從大鼠:肝或人胎盤中提取得來的酸性糖蛋白。(合成cDNA階段使用常用的RNA酶抑制劑48人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件49人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件50人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件51人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件52人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件53人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件54人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件55人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件56人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件57人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件58人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件59人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件60人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件61人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件62人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件63人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件64人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件65人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件66人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件67人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件68人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件69人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件70人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件71人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件72人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件73人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件74人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件75人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件76人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件77人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件78人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件79人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課件80人類細胞質RNA提取RTPCR原理方法瓊脂糖凝膠電泳結果分析及其應用課