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第五章中藥制劑中各類化學成分分析

樓一層

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第五章中藥制劑中各類化學成分分析

樓一層1

§1生物堿類成分分析概述:--什么是生物堿理化性質物理性狀（存在的形態，升華性，揮發性，光學活性）堿性溶解性沉淀反應沉淀劑：碘化物復鹽、重金屬鹽、大分子酸顯色反應+酸性染料（磺酸肽類）→有色配合物紫外光譜特征游離—易溶于CHCl3，Et2O，EtOH等有機溶劑生物堿鹽—水溶性增強§1生物堿類成分分析概述:--什么是生物堿游離—易溶于C2

§1生物堿類成分分析生物堿類成分的分離溶劑萃取柱層析（氧化鋁、硅藻土、離子交換柱）定性鑒別沉淀反應、顯色反應多肽、蛋白質、鞣質等→假陽性反應麻黃堿、秋水仙堿等→假陰性反應馬錢子散中生物堿成分的鑒別取馬錢子散1g，加濃氨試液數滴及氯仿10ml，浸泡數小時，濾過，取濾液1ml蒸干，殘渣加稀鹽酸1ml使溶解，加碘化鉍鉀試液1~2滴，即生成黃棕色沉淀。

§1生物堿類成分分析生物堿類成分的分離馬錢子散中生物堿成3

§1生物堿類成分分析薄層色譜鑒別吸附劑：氧化鋁、硅膠展開劑：氯仿、苯等顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑，碘蒸氣等氣相色譜麻黃堿、苦參堿、顛茄類生物堿的含量測定液相色譜§1生物堿類成分分析4

§1生物堿類成分分析含量測定總生物堿含量測定

化學分析法

分光光度法

直接測定

離子對萃取比色法酸性染料比色法

BH十十In－→（BH十In－）→BH十·In－

苦味酸鹽比色法

雷氏鹽比色法

異羥肟酸鐵比色法（含有酯鍵結構的生物堿）§1生物堿類成分分析含量測定5

§1生物堿類成分分析含量測定單體生物堿含量測定

薄層色譜法

高效液相色譜法

液—液分配色譜法（以反相為主，如ODS或C18）改進流動相（硅醇基抑制劑、低濃度的離子對試劑、季銨鹽試劑、電解質緩沖液）固定相改進（封尾技術）液—固吸附色譜法離子交換色譜法（陽離子交換樹脂）檢測器氣相色譜法§1生物堿類成分分析含量測定6

§2黃酮類成分分析概述2-苯基色原酮理化性質物理性狀（存在的形態，顏色，揮發性，光學活性）溶解性酸堿性酸性：與酚羥基的數目和位置有關7,4‘-二羥基>7-或4‘-羥基>一般酚>5-羥基堿性游離甙元—易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等黃酮甙—易溶于水、甲醇、乙醇§2黃酮類成分分析概述2-苯基色原酮游離甙元—易溶于7

§2黃酮類成分分析理化性質顯色反應還原反應（鹽酸鎂粉反應）金屬鹽類試劑的配合反應（鋁、鉛、鋯、鎂鹽）紫外光譜特征I帶(300-400nm)→B環桂皮?；鵌I帶(240-285nm)→A環苯甲?；?黃酮類成分分析理化性質8

§2黃酮類成分分析黃酮類成分的分離溶劑萃取柱層析（聚酰胺柱）沉淀法定性鑒別顯色反應鹽酸-鎂粉反應金屬鹽類配合反應§2黃酮類成分分析黃酮類成分的分離9

§2黃酮類成分分析定性鑒別薄層色譜鑒別硅膠--分離弱極性黃酮

展開系統：甲苯-甲酸乙酯-甲酸，氯仿-甲醇

聚酰胺--分離含游離酚羥基的黃酮及其苷展開系統：醋酸，醋酸乙酯-甲酸-水等纖維素--分離多糖苷混合物展開系統：正丁醇-乙酸-水，甲酸，乙酸§2黃酮類成分分析定性鑒別10

§2黃酮類成分分析含量測定總黃酮含量測定

紫外分光光度法比色法高效液相色譜法正相色譜硅膠固定相—沒有羥基或乙酰化黃酮類成分反相色譜（C18或C8）流動相：甲醇-水-乙酸（磷酸緩沖液），乙腈-水檢測器萜類內酯（蒸發光散射）§2黃酮類成分分析含量測定11

§2黃酮類成分分析銀杏葉提取物總黃酮醇苷含量測定[含量測定]色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）為流動相；檢測波長為360nm。理論板數按槲皮素峰計算應不低于2500，山柰素酚峰與異鼠李素峰的分離度應大于1.5。

對照品溶液的制備（略）

供試品溶液的制備

取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細，取約相當于總黃酮醇苷19.2mg的粉末，精密稱定，精密加入甲醇20ml，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10ml，置100ml錐形瓶中，加甲醇10ml、25%鹽酸溶液5ml，搖勻，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻至室溫，轉移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取濾液，即得。

測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，分別計算槲皮素、山奈素和異鼠李素的含量，按下式換算成總黃酮苷的含量?？傸S酮醇苷含量=（槲皮素含量+山奈素含量+異鼠李素含量）×2.51

§2黃酮類成分分析銀杏葉提取物總黃酮醇苷含量測定12

§3三萜皂甙類成分分析概述---30個C理化性質物理性狀（存在的形態，表面活性，吸濕性）溶解性紫外光譜特征大多無明顯的紫外吸收或僅在200nm附近有末端吸收

皂甙元—能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等皂甙—可溶于水，易溶于熱水、含水稀醇等甘草酸人參皂甙(A型)§3三萜皂甙類成分分析概述---30個C皂甙元—能溶于石13

§3三萜皂甙類成分分析理化性質顯色反應醋酐-濃硫酸反應五氯化銻反應三鋁醋酸反應冰醋酸-乙酰氯反應氯仿-硫酸反應金屬鹽類反應+鉛、鋇、銅鹽→沉淀酸性皂甙+硫酸銨/醋酸鉛/中性鹽→沉淀中性皂甙+堿式醋酸鉛/氫氧化鋇/堿性鹽→沉淀§3三萜皂甙類成分分析理化性質14

§3三萜皂甙類成分分析三萜皂甙類成分的分離溶劑萃取柱層析（大孔樹脂柱）沉淀法定性鑒別泡沫反應顯色反應§3三萜皂甙類成分分析三萜皂甙類成分的分離15

§3三萜皂甙類成分分析定性鑒別薄層色譜鑒別吸附劑：硅膠、氧化鋁、硅藻土展開劑：三萜皂甙—氯仿-甲醇-水、正丁醇-醋酸乙酯-水等極性較大的體系三萜皂甙元--以苯、氯仿、己烷等為主要組分顯色劑三氯醋酸、50%及10%硫酸乙醇液、磷鉬酸、濃硫酸-醋酸酐、碘蒸氣等§3三萜皂甙類成分分析定性鑒別16

§3三萜皂甙類成分分析含量測定總皂甙含量測定

重量法比色法顯色劑：香草醛-硫酸，香草醛-高氯酸，酸酐-硫酸等等三萜皂甙類單體成分含量測定薄層色譜法高效液相色譜甘草酸、遠志皂甙→紫外檢測器其他→蒸發光散射檢測器（ELSD）§3三萜皂甙類成分分析含量測定17概述苯醌(對苯醌和鄰-)、菲醌、萘醌和蒽醌理化性質物理性狀（存在的形態，升華性，光不穩定性）溶解性酸堿性酚羥基→酸性游離—溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等醌甙—可溶于熱水，易溶于甲醇、乙醇大黃素丹參醌IIA§4醌類成分分析概述游離—溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等大黃素丹參醌IIA§418

§4醌類成分分析理化性質顯色反應羥基蒽醌+堿→橙，紅，紫紅，藍+Pb2+/Mg2+→配合物+對亞硝基二甲基苯胺→紫，綠，藍，灰§4醌類成分分析理化性質19

§4醌類成分分析定性鑒別顯色反應升華法薄層鑒別吸附劑：硅膠展開劑：多含甲醇或水的混合溶劑系統→分離甙和甙元不含甲醇或水的混合溶劑系統→分離甙元顯色：堿性試劑，醋酸鎂甲醇液、氨熏§4醌類成分分析定性鑒別20

§4醌類成分分析含量測定游離蒽醌的測定弱極性溶劑提取后，加堿比色結合蒽醌的測定極性溶劑提取，水解測甙元先酸水解后，非極性溶劑提取甙元后測定醌類單體成分含量測定薄層色譜法高效液相色譜§4醌類成分分析含量測定21

§4醌類成分分析牛黃解毒片中游離蒽醌和總蒽醌的測定—混合堿液比色法對照品溶液測定：以1，8-二羥基蒽醌為對照品，精密稱取10mg于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度（100μg/mL）。取1mL對照品液于10mL量瓶中，在水浴上蒸干，加5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿溶解并稀釋至刻度，放置1小時，以5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液為空白，在510nm波長處測定。樣品測定：⑴游離蒽醌的測定：取牛黃解毒片10片，刮去糖衣，精密稱定重量，研細。稱取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入氯仿100mL，稱重，水浴上回流4小時，取下，加塞，放冷，稱重，用氯仿補充至原重量，濾過，吸取濾液50mL于分液漏斗中，用蒸餾水20mL洗滌數次，至水層無色，棄去水液。氯仿層用5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液振搖萃取數次，直至混合堿液無色，合并堿液，用20mL氯仿洗滌數次，至氯仿層無色，棄去氯仿層。將混合堿液在水浴上加熱數分鐘至氯仿揮盡，冷卻，移入100mL量瓶中，并稀釋至刻度，放置1小時，以5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液為空白，在510nm處測定，計算游離蒽醌的含量（相當于1，8-二羥基蒽醌含量）?！?醌類成分分析牛黃解毒片中游離蒽醌和總蒽醌的測定—混合22

§4醌類成分分析牛黃解毒片中游離蒽醌和總蒽醌的測定—混合堿液比色法⑵總蒽醌的測定：精密稱取游離蒽醌項下的牛黃解毒片粉一片置于150mL燒瓶中，加2.5mol/L硫酸30mL直火回流4小時，放冷，加入氯仿20mL，水浴回流0.5小時，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，反復操作至氯仿無色為止。合并氯仿層液，用蒸餾水洗滌數次，至水層無色，棄去水液。氯仿液用5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液振搖萃取數次，至堿液無色，合并，用20mL氯仿洗滌數次，至氯仿層無色，棄去氯仿液。將堿液置水浴上加熱至氯仿揮盡，冷卻，移入50mL量瓶中，用混合堿液稀釋至刻度，放置1小時，以5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨液為空白，在510nm處測定，計算游離蒽醌的含量（相當于1，8-二羥基蒽醌含量）。

⑶結合蒽醌的計算：每片含結合蒽醌量=每片含總蒽醌量—每片含游離蒽醌量。

§4醌類成分分析牛黃解毒片中游離蒽醌和總蒽醌的測定—混合23

§4醌類成分分析復方丹參片中丹參酮ⅡA含量測定—高效液相色譜法色譜條件與系統適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水（73：27）為流動相；檢測波長為270nm。對照品溶液的制備：精密稱取丹參酮ⅡA對照品10mg，置50mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1mL中含丹參酮ⅡA40μg）供試品溶液的制備：取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密稱定，研細，取1g，精密稱定，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理15分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。§4醌類成分分析復方丹參片中丹參酮ⅡA含量測定—高效液相24

§5揮發性成分分析概述理化性質物理性狀（氣味，比重，折光性）溶解性：易溶于有機溶劑顯色反應酚類+三氯化鐵→藍，藍紫，綠羰基+苯肼、羥胺→結晶體醛類+硝酸銀胺→銀鏡內酯類+亞硝酰鐵氰化鈉+NaOH→紅色并逐漸消失奧類+濃硫酸→藍，紫檸檬烯薄荷醇桂皮醛§5揮發性成分分析概述檸檬烯薄荷醇桂皮醛25

§5揮發性成分分析定性鑒別化學反應氧化反應(高錳酸鉀，鉻酸）香草醛硫酸反應薄層色譜吸附劑：硅膠、氧化鋁展開劑：石油醚，正己烷，（加少量的乙酸乙脂或苯）顯色劑氣相色譜法GC-MS或GC-FTIR§5揮發性成分分析定性鑒別26§5揮發性成分分析含量測定總揮發油含量測定

揮發油測定器蒸餾法單一成分含量測定氣相色譜薄層色譜法高效液相色譜GC-MS或GC-FTIR(氣相色譜／傅里葉變換紅外光譜)聯用技術§5揮發性成分分析含量測定27§6木脂素類成分分析概述兩個苯丙素衍生聚合物理化性質物理性狀（存在的形態，光學活性）溶解性紫外光譜特征：250-350nm顯色反應通用型顯色劑：磷鉬酸乙醇、硫酸乙醇Labat反應：+硫酸+沒食子酸→藍綠Ecgrine反應：+硫酸+變色酸→藍紫游離—易溶于苯、乙醚、氯仿、丙酮、乙醇等成甙時—可溶于甲醇、乙醇等CH3CH3OCH3OCH3H3COH3COH3COH3CO牛蒡子甙(元)五味子甲素§6木脂素類成分分析概述游離—易溶于苯、乙醚、氯仿、丙酮、28

§6木脂素類成分分析定性鑒別顯色反應功能基的顏色反應薄層鑒別吸附劑：硅膠展開劑：親脂性溶劑（苯、氯仿，加甲醇等）顯色：香草醛試液，濃硫酸試液，磷鉬酸乙醇溶液、碘熏§6木脂素類成分分析定性鑒別29

§6木脂素類成分分析含量測定總木脂素成分含量測定變色酸比色法單體成分含量測定薄層色譜法吸附劑：硅膠展開劑：低極性的有機溶劑高效液相色譜固定相：C18流動相：乙腈-水，甲醇-水檢測器§6木脂素類成分分析含量測定30

§7其他類型成分分析有機酸概述:脂肪族類、芳香族類和萜類….-COOH(羧基)理化性質 物理性狀（存在的形態，溶解性，揮發性）提取分離有機溶劑提取法離子交換法水蒸氣蒸餾法

§7其他類型成分分析有機酸31

§7其他類型成分分析有機酸定性鑒別吸附色譜分配色譜含量測定酸堿滴定法→總有機酸分光光度法高效液相色譜法薄層色譜法其他方法§7其他類型成分分析有機酸32

§7其他類型成分分析環烯醚萜類概述—特殊的單萜（具有烯鍵和醚鍵）理化性質物理性狀（存在的形態，多苦味，穩定性）溶解性：易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇薄層定性鑒別吸附劑：硅膠、聚酰胺顯色劑：硫酸乙醇，茴香醛試液，香草醛硫酸試液，對二甲氨基苯甲醛硫酸試液龍膽苦甙§7其他類型成分分析環烯醚萜類龍膽苦甙33

§7其他類型成分分析環烯醚萜類含量測定高效液相色譜法薄層掃描法熒光分光光度法分光光度法復方梔子沖劑中梔子甙的含量測定精密稱取本品3g，置索氏提取器內，加甲醇回流提取6小時，回收甲醇至干，加水10ml溶解，用水飽和正丁醇提取，提取液蒸干，以甲醇溶解，通過已處理好的活性炭-中性氧化鋁柱，用甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用2ml甲醇溶解，作為供試品溶液。薄層條件：硅膠GF254薄層板，展開劑氯仿—甲醇—25%氨水（4:1:0.1），檢測波長247nm，參比波長370nm。§7其他類型成分分析環烯醚萜類復方梔子沖劑中梔子甙的含量34

§7其他類型成分分析香豆素類概述理化性質物理性狀（存在的形態，氣味，揮發性）溶解性紫外光譜特征：300nm（ε~10000）分子熒光補骨脂素茵陳內酯游離—易溶于甲醇、乙醇、乙醚、氯仿等香豆素甙—能溶于水、甲醇、乙醇等§7其他類型成分分析香豆素類補骨脂素茵陳內酯游離—易溶于35

§7其他類型成分分析香豆素類顯色反應異羥肟酸鐵反應與酚羥基反應FeCl3Gibbs試劑（2,6-二氯苯醌氯亞胺）反應→藍色重氮試劑化反應§7其他類型成分分析香豆素類36

§7其他類型成分分析香豆素類定性鑒別化學反應法熒光法薄層色譜法七寶美髯顆粒中補骨脂素、異補骨脂素的鑒別取本品10g，研細，加醋酸乙酯20ml、鹽酸0.5ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作為供試品溶液。薄層條件：硅膠G薄層板，展開劑正已烷—醋酸乙酯（4:1），顯色劑為10%氫氧化鉀甲醇溶液，紫外光燈365nm下檢視?！?其他類型成分分析香豆素類七寶美髯顆粒中補骨脂素、異補37

§7其他類型成分分析香豆素類含量測定分光光度法熒光光度法薄層色譜法高效液相色譜法氣相色譜法§7其他類型成分分析香豆素類38

§7其他類型成分分析烏蛇止癢丸中蛇床子素的含量測定色譜條件固定相：OV-1，2m×3mmID玻璃柱；氣體流速：N230ml/min，H250ml/min，Air500ml/min；柱溫：200℃；進樣器和檢測器溫度：260℃。供試品溶液和對照品溶液的制備精密稱取內標物正廿三烷適量，加氯仿溶解，制成每1ml約含6mg的溶液，作為內標溶液。取烏蛇止癢丸適量，研成細粉，精密稱取約5g，置索氏提取器中，精密加入內標溶液5.0ml，加氯仿80ml，回流至近無色。將提取液濃縮至數毫升，通過3g小型硅膠柱，用氯仿洗脫至10ml量瓶中，加氯仿至刻度，搖勻，作為供試品溶液。稱取蛇床子素約25mg，加入內標溶液5.0ml，振搖使溶解，搖勻，作為對照品溶液。校正因子的測定精密吸取對照品溶液，連續進樣3～5次，每次2μl，按峰面積計算校正因子。樣品測定精密吸取供試品溶液，連續進樣3～5次，每次2μl，用校正因子計算樣品含量。§7其他類型成分分析烏蛇止癢丸中蛇床子素的含量測定39

§7其他類型成分分析單萜及二萜類單萜倍半萜多是揮發油；二萜是樹脂的主要成分含芍藥甙中藥制劑的分析薄層色譜高效液相色譜含穿心蓮內酯中藥制劑的分析薄層色譜回滴法比色法—總內酯薄層掃描或高效液相色譜法—單體成分穿心蓮內酯§7其他類型成分分析單萜及二萜類穿心蓮內酯40

§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides）概述理化性質物理性狀（存在形式，還原性）溶解性：溶于水，低濃度的酸堿，鹽溶液，不溶于醇、醚、丙酮提取分離水提醇沉※防止水解，注意消除酶、酸、堿等的影響§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides41

§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides）提取分離金屬鹽沉淀法季胺氫氧化物沉淀柱色譜法（活性炭+等量的硅藻土）凝膠色譜法（葡聚糖凝膠sephadex，瓊脂糖凝膠sepharose，聚丙烯酰胺凝膠Bio-gelP）制備型區域電泳§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides42§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides）定性鑒別薄層色譜（硅膠、纖維素、硅藻土）紙色譜

展開劑：正丁醇、水混合體系 顯色劑：苯胺-鄰苯二甲酸的正丁醇飽和水溶液等電泳法濾紙電泳、玻璃纖維紙電泳、醋酸纖維薄膜電泳、凝膠電泳高效液相色譜法氣質聯用酸水解→中和→柱前衍生→GC-MS§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides）43§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides）含量測定總多糖的測定3,5-二硝基水楊酸比色法→棕紅色（550nm）

※半微量定量法苯酚-硫酸法→藍綠色（480-490nm）蒽酮-硫酸法→黃綠色(620nm)單體多糖的含量測定高效凝膠液相色譜法→確定分子量高效液相色譜法→確定組成 色譜柱：氨基鍵合相硅膠柱，或普通硅膠柱 檢測器：示差折光檢測器§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides）44

§7其他類型成分分析多糖靈芝多糖的測定[含量測定]

對照品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖對照品適量……

標準曲線的制備(硫酸蒽酮法，λ=625nm)供試品溶液的制備取本品粉末約2g，精密稱定，置索氏提取器中，加水90ml，電加熱器加熱回流提取至提取液無色，提取液轉移至100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，加入乙醇150ml，搖勻，4℃放置12小時，取出，離心，傾去上清液，沉淀加水溶解并轉移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法（略）本品按干燥品計算，含靈芝多糖以無水葡萄糖(C6H12O6)計，不得少于0.50%§7其他類型成分分析多糖45樹立質量法制觀念、提高全員質量意識。12月-2212月-22Saturday,December10,2022人生得意須盡歡，莫使金樽空對月。01:10:0701:10:0701:1012/10/20221:10:07AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦繃。12月-2201:10:0701:10Dec-2210-Dec-22加強交通建設管理，確保工程建設質量。01:10:0701:10:0701:10Saturday,December10,2022安全在于心細，事故出在麻痹。12月-2212月-2201:10:0701:10:07December10,2022踏實肯干，努力奮斗。2022年12月10日1:10上午12月-2212月-22追求至善憑技術開拓市場，憑管理增創效益，憑服務樹立形象。10十二月20221:10:07上午01:10:0712月-22嚴格把控質量關，讓生產更加有保障。十二月221:10上午12月-2201:10December10,2022作業標準記得牢，駕輕就熟除煩惱。2022/12/101:10:0701:10:0710December2022好的事情馬上就會到來，一切都是最好的安排。1:10:07上午1:10上午01:10:0712月-22專注今天，好好努力，剩下的交給時間。12月-2212月-2201:1001:10:0701:10:07Dec-22牢記安全之責，善謀安全之策，力務安全之實。2022/12/101:10:07Saturday,December10,2022相信相信得力量。12月-222022/12/101:10:0712月-22謝謝大家！樹立質量法制觀念、提高全員質量意識。12月-2212月-2246踏實，奮斗，堅持，專業，努力成就未來。12月-2212月-22Saturday,December10,2022弄虛作假要不得，踏實肯干第一名。01:10:0701:10:0701:1012/10/20221:10:07AM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦繃。12月-2201:10:0701:10Dec-2210-Dec-22重于泰山，輕于鴻毛。01:10:0701:10:0701:10Saturday,December10,2022不可麻痹大意，要防微杜漸。12月-2212月-2201:10:0701:10:07December10,2022加強自身建設，增強個人的休養。2022年12月10日1:10上午12月-2212月-22追求卓越，讓自己更好，向上而生。10十二月20221:10:07上午01:10:0712月-22嚴格把控質量關，讓生產更加有保障。十二月221:10上午12月-2201:10December10,2022重規矩，嚴要求，少危險。2022/12/101:10:0701:10:0710December2022好的事情馬上就會到來，一切都是最好的安排。1:10:07上午1:10上午01:10:0712月-22每天都是美好的一天，新的一天開啟。12月-2212月-2201:1001:10:0701:10:07Dec-22務實，奮斗，成就，成功。2022/12/101:10:07Saturday,December10,2022抓住每一次機會不能輕易流失，這樣我們才能真正強大。12月-222022/12/101:10:0712月-22謝謝大家！踏實，奮斗，堅持，專業，努力成就未來。12月-2212月-247

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第五章中藥制劑中各類化學成分分析

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第五章中藥制劑中各類化學成分分析

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§1生物堿類成分分析概述:--什么是生物堿理化性質物理性狀（存在的形態，升華性，揮發性，光學活性）堿性溶解性沉淀反應沉淀劑：碘化物復鹽、重金屬鹽、大分子酸顯色反應+酸性染料（磺酸肽類）→有色配合物紫外光譜特征游離—易溶于CHCl3，Et2O，EtOH等有機溶劑生物堿鹽—水溶性增強§1生物堿類成分分析概述:--什么是生物堿游離—易溶于C49

§1生物堿類成分分析生物堿類成分的分離溶劑萃取柱層析（氧化鋁、硅藻土、離子交換柱）定性鑒別沉淀反應、顯色反應多肽、蛋白質、鞣質等→假陽性反應麻黃堿、秋水仙堿等→假陰性反應馬錢子散中生物堿成分的鑒別取馬錢子散1g，加濃氨試液數滴及氯仿10ml，浸泡數小時，濾過，取濾液1ml蒸干，殘渣加稀鹽酸1ml使溶解，加碘化鉍鉀試液1~2滴，即生成黃棕色沉淀。

§1生物堿類成分分析生物堿類成分的分離馬錢子散中生物堿成50

§1生物堿類成分分析薄層色譜鑒別吸附劑：氧化鋁、硅膠展開劑：氯仿、苯等顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑，碘蒸氣等氣相色譜麻黃堿、苦參堿、顛茄類生物堿的含量測定液相色譜§1生物堿類成分分析51

§1生物堿類成分分析含量測定總生物堿含量測定

化學分析法

分光光度法

直接測定

離子對萃取比色法酸性染料比色法

BH十十In－→（BH十In－）→BH十·In－

苦味酸鹽比色法

雷氏鹽比色法

異羥肟酸鐵比色法（含有酯鍵結構的生物堿）§1生物堿類成分分析含量測定52

§1生物堿類成分分析含量測定單體生物堿含量測定

薄層色譜法

高效液相色譜法

液—液分配色譜法（以反相為主，如ODS或C18）改進流動相（硅醇基抑制劑、低濃度的離子對試劑、季銨鹽試劑、電解質緩沖液）固定相改進（封尾技術）液—固吸附色譜法離子交換色譜法（陽離子交換樹脂）檢測器氣相色譜法§1生物堿類成分分析含量測定53

§2黃酮類成分分析概述2-苯基色原酮理化性質物理性狀（存在的形態，顏色，揮發性，光學活性）溶解性酸堿性酸性：與酚羥基的數目和位置有關7,4‘-二羥基>7-或4‘-羥基>一般酚>5-羥基堿性游離甙元—易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等黃酮甙—易溶于水、甲醇、乙醇§2黃酮類成分分析概述2-苯基色原酮游離甙元—易溶于54

§2黃酮類成分分析理化性質顯色反應還原反應（鹽酸鎂粉反應）金屬鹽類試劑的配合反應（鋁、鉛、鋯、鎂鹽）紫外光譜特征I帶(300-400nm)→B環桂皮酰基II帶(240-285nm)→A環苯甲?；?黃酮類成分分析理化性質55

§2黃酮類成分分析黃酮類成分的分離溶劑萃取柱層析（聚酰胺柱）沉淀法定性鑒別顯色反應鹽酸-鎂粉反應金屬鹽類配合反應§2黃酮類成分分析黃酮類成分的分離56

§2黃酮類成分分析定性鑒別薄層色譜鑒別硅膠--分離弱極性黃酮

展開系統：甲苯-甲酸乙酯-甲酸，氯仿-甲醇

聚酰胺--分離含游離酚羥基的黃酮及其苷展開系統：醋酸，醋酸乙酯-甲酸-水等纖維素--分離多糖苷混合物展開系統：正丁醇-乙酸-水，甲酸，乙酸§2黃酮類成分分析定性鑒別57

§2黃酮類成分分析含量測定總黃酮含量測定

紫外分光光度法比色法高效液相色譜法正相色譜硅膠固定相—沒有羥基或乙?；S酮類成分反相色譜（C18或C8）流動相：甲醇-水-乙酸（磷酸緩沖液），乙腈-水檢測器萜類內酯（蒸發光散射）§2黃酮類成分分析含量測定58

§2黃酮類成分分析銀杏葉提取物總黃酮醇苷含量測定[含量測定]色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）為流動相；檢測波長為360nm。理論板數按槲皮素峰計算應不低于2500，山柰素酚峰與異鼠李素峰的分離度應大于1.5。

對照品溶液的制備（略）

供試品溶液的制備

取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細，取約相當于總黃酮醇苷19.2mg的粉末，精密稱定，精密加入甲醇20ml，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10ml，置100ml錐形瓶中，加甲醇10ml、25%鹽酸溶液5ml，搖勻，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻至室溫，轉移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取濾液，即得。

測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，分別計算槲皮素、山奈素和異鼠李素的含量，按下式換算成總黃酮苷的含量。總黃酮醇苷含量=（槲皮素含量+山奈素含量+異鼠李素含量）×2.51

§2黃酮類成分分析銀杏葉提取物總黃酮醇苷含量測定59

§3三萜皂甙類成分分析概述---30個C理化性質物理性狀（存在的形態，表面活性，吸濕性）溶解性紫外光譜特征大多無明顯的紫外吸收或僅在200nm附近有末端吸收

皂甙元—能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等皂甙—可溶于水，易溶于熱水、含水稀醇等甘草酸人參皂甙(A型)§3三萜皂甙類成分分析概述---30個C皂甙元—能溶于石60

§3三萜皂甙類成分分析理化性質顯色反應醋酐-濃硫酸反應五氯化銻反應三鋁醋酸反應冰醋酸-乙酰氯反應氯仿-硫酸反應金屬鹽類反應+鉛、鋇、銅鹽→沉淀酸性皂甙+硫酸銨/醋酸鉛/中性鹽→沉淀中性皂甙+堿式醋酸鉛/氫氧化鋇/堿性鹽→沉淀§3三萜皂甙類成分分析理化性質61

§3三萜皂甙類成分分析三萜皂甙類成分的分離溶劑萃取柱層析（大孔樹脂柱）沉淀法定性鑒別泡沫反應顯色反應§3三萜皂甙類成分分析三萜皂甙類成分的分離62

§3三萜皂甙類成分分析定性鑒別薄層色譜鑒別吸附劑：硅膠、氧化鋁、硅藻土展開劑：三萜皂甙—氯仿-甲醇-水、正丁醇-醋酸乙酯-水等極性較大的體系三萜皂甙元--以苯、氯仿、己烷等為主要組分顯色劑三氯醋酸、50%及10%硫酸乙醇液、磷鉬酸、濃硫酸-醋酸酐、碘蒸氣等§3三萜皂甙類成分分析定性鑒別63

§3三萜皂甙類成分分析含量測定總皂甙含量測定

重量法比色法顯色劑：香草醛-硫酸，香草醛-高氯酸，酸酐-硫酸等等三萜皂甙類單體成分含量測定薄層色譜法高效液相色譜甘草酸、遠志皂甙→紫外檢測器其他→蒸發光散射檢測器（ELSD）§3三萜皂甙類成分分析含量測定64概述苯醌(對苯醌和鄰-)、菲醌、萘醌和蒽醌理化性質物理性狀（存在的形態，升華性，光不穩定性）溶解性酸堿性酚羥基→酸性游離—溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等醌甙—可溶于熱水，易溶于甲醇、乙醇大黃素丹參醌IIA§4醌類成分分析概述游離—溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等大黃素丹參醌IIA§465

§4醌類成分分析理化性質顯色反應羥基蒽醌+堿→橙，紅，紫紅，藍+Pb2+/Mg2+→配合物+對亞硝基二甲基苯胺→紫，綠，藍，灰§4醌類成分分析理化性質66

§4醌類成分分析定性鑒別顯色反應升華法薄層鑒別吸附劑：硅膠展開劑：多含甲醇或水的混合溶劑系統→分離甙和甙元不含甲醇或水的混合溶劑系統→分離甙元顯色：堿性試劑，醋酸鎂甲醇液、氨熏§4醌類成分分析定性鑒別67

§4醌類成分分析含量測定游離蒽醌的測定弱極性溶劑提取后，加堿比色結合蒽醌的測定極性溶劑提取，水解測甙元先酸水解后，非極性溶劑提取甙元后測定醌類單體成分含量測定薄層色譜法高效液相色譜§4醌類成分分析含量測定68

§4醌類成分分析牛黃解毒片中游離蒽醌和總蒽醌的測定—混合堿液比色法對照品溶液測定：以1，8-二羥基蒽醌為對照品，精密稱取10mg于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度（100μg/mL）。取1mL對照品液于10mL量瓶中，在水浴上蒸干，加5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿溶解并稀釋至刻度，放置1小時，以5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液為空白，在510nm波長處測定。樣品測定：⑴游離蒽醌的測定：取牛黃解毒片10片，刮去糖衣，精密稱定重量，研細。稱取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入氯仿100mL，稱重，水浴上回流4小時，取下，加塞，放冷，稱重，用氯仿補充至原重量，濾過，吸取濾液50mL于分液漏斗中，用蒸餾水20mL洗滌數次，至水層無色，棄去水液。氯仿層用5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液振搖萃取數次，直至混合堿液無色，合并堿液，用20mL氯仿洗滌數次，至氯仿層無色，棄去氯仿層。將混合堿液在水浴上加熱數分鐘至氯仿揮盡，冷卻，移入100mL量瓶中，并稀釋至刻度，放置1小時，以5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液為空白，在510nm處測定，計算游離蒽醌的含量（相當于1，8-二羥基蒽醌含量）。§4醌類成分分析牛黃解毒片中游離蒽醌和總蒽醌的測定—混合69

§4醌類成分分析牛黃解毒片中游離蒽醌和總蒽醌的測定—混合堿液比色法⑵總蒽醌的測定：精密稱取游離蒽醌項下的牛黃解毒片粉一片置于150mL燒瓶中，加2.5mol/L硫酸30mL直火回流4小時，放冷，加入氯仿20mL，水浴回流0.5小時，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，反復操作至氯仿無色為止。合并氯仿層液，用蒸餾水洗滌數次，至水層無色，棄去水液。氯仿液用5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液振搖萃取數次，至堿液無色，合并，用20mL氯仿洗滌數次，至氯仿層無色，棄去氯仿液。將堿液置水浴上加熱至氯仿揮盡，冷卻，移入50mL量瓶中，用混合堿液稀釋至刻度，放置1小時，以5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨液為空白，在510nm處測定，計算游離蒽醌的含量（相當于1，8-二羥基蒽醌含量）。

⑶結合蒽醌的計算：每片含結合蒽醌量=每片含總蒽醌量—每片含游離蒽醌量。

§4醌類成分分析牛黃解毒片中游離蒽醌和總蒽醌的測定—混合70

§4醌類成分分析復方丹參片中丹參酮ⅡA含量測定—高效液相色譜法色譜條件與系統適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水（73：27）為流動相；檢測波長為270nm。對照品溶液的制備：精密稱取丹參酮ⅡA對照品10mg，置50mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1mL中含丹參酮ⅡA40μg）供試品溶液的制備：取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密稱定，研細，取1g，精密稱定，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理15分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。§4醌類成分分析復方丹參片中丹參酮ⅡA含量測定—高效液相71

§5揮發性成分分析概述理化性質物理性狀（氣味，比重，折光性）溶解性：易溶于有機溶劑顯色反應酚類+三氯化鐵→藍，藍紫，綠羰基+苯肼、羥胺→結晶體醛類+硝酸銀胺→銀鏡內酯類+亞硝酰鐵氰化鈉+NaOH→紅色并逐漸消失奧類+濃硫酸→藍，紫檸檬烯薄荷醇桂皮醛§5揮發性成分分析概述檸檬烯薄荷醇桂皮醛72

§5揮發性成分分析定性鑒別化學反應氧化反應(高錳酸鉀，鉻酸）香草醛硫酸反應薄層色譜吸附劑：硅膠、氧化鋁展開劑：石油醚，正己烷，（加少量的乙酸乙脂或苯）顯色劑氣相色譜法GC-MS或GC-FTIR§5揮發性成分分析定性鑒別73§5揮發性成分分析含量測定總揮發油含量測定

揮發油測定器蒸餾法單一成分含量測定氣相色譜薄層色譜法高效液相色譜GC-MS或GC-FTIR(氣相色譜／傅里葉變換紅外光譜)聯用技術§5揮發性成分分析含量測定74§6木脂素類成分分析概述兩個苯丙素衍生聚合物理化性質物理性狀（存在的形態，光學活性）溶解性紫外光譜特征：250-350nm顯色反應通用型顯色劑：磷鉬酸乙醇、硫酸乙醇Labat反應：+硫酸+沒食子酸→藍綠Ecgrine反應：+硫酸+變色酸→藍紫游離—易溶于苯、乙醚、氯仿、丙酮、乙醇等成甙時—可溶于甲醇、乙醇等CH3CH3OCH3OCH3H3COH3COH3COH3CO牛蒡子甙(元)五味子甲素§6木脂素類成分分析概述游離—易溶于苯、乙醚、氯仿、丙酮、75

§6木脂素類成分分析定性鑒別顯色反應功能基的顏色反應薄層鑒別吸附劑：硅膠展開劑：親脂性溶劑（苯、氯仿，加甲醇等）顯色：香草醛試液，濃硫酸試液，磷鉬酸乙醇溶液、碘熏§6木脂素類成分分析定性鑒別76

§6木脂素類成分分析含量測定總木脂素成分含量測定變色酸比色法單體成分含量測定薄層色譜法吸附劑：硅膠展開劑：低極性的有機溶劑高效液相色譜固定相：C18流動相：乙腈-水，甲醇-水檢測器§6木脂素類成分分析含量測定77

§7其他類型成分分析有機酸概述:脂肪族類、芳香族類和萜類….-COOH(羧基)理化性質 物理性狀（存在的形態，溶解性，揮發性）提取分離有機溶劑提取法離子交換法水蒸氣蒸餾法

§7其他類型成分分析有機酸78

§7其他類型成分分析有機酸定性鑒別吸附色譜分配色譜含量測定酸堿滴定法→總有機酸分光光度法高效液相色譜法薄層色譜法其他方法§7其他類型成分分析有機酸79

§7其他類型成分分析環烯醚萜類概述—特殊的單萜（具有烯鍵和醚鍵）理化性質物理性狀（存在的形態，多苦味，穩定性）溶解性：易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇薄層定性鑒別吸附劑：硅膠、聚酰胺顯色劑：硫酸乙醇，茴香醛試液，香草醛硫酸試液，對二甲氨基苯甲醛硫酸試液龍膽苦甙§7其他類型成分分析環烯醚萜類龍膽苦甙80

§7其他類型成分分析環烯醚萜類含量測定高效液相色譜法薄層掃描法熒光分光光度法分光光度法復方梔子沖劑中梔子甙的含量測定精密稱取本品3g，置索氏提取器內，加甲醇回流提取6小時，回收甲醇至干，加水10ml溶解，用水飽和正丁醇提取，提取液蒸干，以甲醇溶解，通過已處理好的活性炭-中性氧化鋁柱，用甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用2ml甲醇溶解，作為供試品溶液。薄層條件：硅膠GF254薄層板，展開劑氯仿—甲醇—25%氨水（4:1:0.1），檢測波長247nm，參比波長370nm。§7其他類型成分分析環烯醚萜類復方梔子沖劑中梔子甙的含量81

§7其他類型成分分析香豆素類概述理化性質物理性狀（存在的形態，氣味，揮發性）溶解性紫外光譜特征：300nm（ε~10000）分子熒光補骨脂素茵陳內酯游離—易溶于甲醇、乙醇、乙醚、氯仿等香豆素甙—能溶于水、甲醇、乙醇等§7其他類型成分分析香豆素類補骨脂素茵陳內酯游離—易溶于82

§7其他類型成分分析香豆素類顯色反應異羥肟酸鐵反應與酚羥基反應FeCl3Gibbs試劑（2,6-二氯苯醌氯亞胺）反應→藍色重氮試劑化反應§7其他類型成分分析香豆素類83

§7其他類型成分分析香豆素類定性鑒別化學反應法熒光法薄層色譜法七寶美髯顆粒中補骨脂素、異補骨脂素的鑒別取本品10g，研細，加醋酸乙酯20ml、鹽酸0.5ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作為供試品溶液。薄層條件：硅膠G薄層板，展開劑正已烷—醋酸乙酯（4:1），顯色劑為10%氫氧化鉀甲醇溶液，紫外光燈365nm下檢視。§7其他類型成分分析香豆素類七寶美髯顆粒中補骨脂素、異補84

§7其他類型成分分析香豆素類含量測定分光光度法熒光光度法薄層色譜法高效液相色譜法氣相色譜法§7其他類型成分分析香豆素類85

§7其他類型成分分析烏蛇止癢丸中蛇床子素的含量測定色譜條件固定相：OV-1，2m×3mmID玻璃柱；氣體流速：N230ml/min，H250ml/min，Air500ml/min；柱溫：200℃；進樣器和檢測器溫度：260℃。供試品溶液和對照品溶液的制備精密稱取內標物正廿三烷適量，加氯仿溶解，制成每1ml約含6mg的溶液，作為內標溶液。取烏蛇止癢丸適量，研成細粉，精密稱取約5g，置索氏提取器中，精密加入內標溶液5.0ml，加氯仿80ml，回流至近無色。將提取液濃縮至數毫升，通過3g小型硅膠柱，用氯仿洗脫至10ml量瓶中，加氯仿至刻度，搖勻，作為供試品溶液。稱取蛇床子素約25mg，加入內標溶液5.0ml，振搖使溶解，搖勻，作為對照品溶液。校正因子的測定精密吸取對照品溶液，連續進樣3～5次，每次2μl，按峰面積計算校正因子。樣品測定精密吸取供試品溶液，連續進樣3～5次，每次2μl，用校正因子計算樣品含量?！?其他類型成分分析烏蛇止癢丸中蛇床子素的含量測定86

§7其他類型成分分析單萜及二萜類單萜倍半萜多是揮發油；二萜是樹脂的主要成分含芍藥甙中藥制劑的分析薄層色譜高效液相色譜含穿心蓮內酯中藥制劑的分析薄層色譜回滴法比色法—總內酯薄層掃描或高效液相色譜法—單體成分穿心蓮內酯§7其他類型成分分析單萜及二萜類穿心蓮內酯87

§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides）概述理化性質物理性狀（存在形式，還原性）溶解性：溶于水，低濃度的酸堿，鹽溶液，不溶于醇、醚、丙酮提取分離水提醇沉※防止水解，注意消除酶、酸、堿等的影響§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides88

§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides）提取分離金屬鹽沉淀法季胺氫氧化物沉淀柱色譜法（活性炭+等量的硅藻土）凝膠色譜法（葡聚糖凝膠sephadex，瓊脂糖凝膠sepharose，聚丙烯酰胺凝膠Bio-gelP）制備型區域電泳§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides89§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides）定性鑒別薄層色譜（硅膠、纖維素、硅藻土）紙色譜

展開劑：正丁醇、水混合體系 顯色劑：苯胺-鄰苯二甲酸的正丁醇飽和水溶液等電泳法濾紙電泳、玻璃纖維紙電泳、醋酸纖維薄膜電泳、凝膠電泳高效液相色譜法氣質聯用酸水解→中和→柱前衍生→GC-MS§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides）90§7其他類型成分分析多糖（polysaccharides）含量測定總多糖的測定3,5-二硝基水楊酸比色法→棕紅色（550nm）

※半微量定量法苯酚-硫酸法→藍綠色（480-490nm）蒽酮-硫酸法→黃綠色(620nm)單體多糖