微藻的實驗室培養微藻的實驗室培養1藻類的概述培養的方式實驗室培養藻類的概述2綠藻裸藻黃藻藍藻門綠藻裸藻黃藻藍藻門3一、藻類的概述微藻（Microalgae），是原生生物界一類真核生物。藻類植物共約為2100屬,27000種。根據所含色素、細胞構造、生殖方法和生殖器官構造的不同，分為綠藻門、裸藻門、輪藻門、金藻門、黃藻門、硅藻門、甲藻門、藍藻門、褐藻門和紅藻門。色素的顏色劃分，藻可分為3類：綠藻、褐藻和紅藻單胞藻具有利用太陽光能效率高、營養豐富、生長繁殖迅速、對環境的適應性強和容易培養等重要特性，因而受到重視。一、藻類的概述微藻（Microalgae），是原生生物界一類4二、微藻的營養模式和生長模式二、微藻的營養模式和生長模式5（二）、微藻的生長模式

藻類在培養過程中，生長繁殖的速度，出現一定的起伏，這種生長模式可劃分為五個時期（延緩期、指數生長期、相對生長下降期、靜止期、死亡期）（二）、微藻的生長模式藻類在培養過程中，生長繁殖的速度，6三、培養方式按培養的場所分室內培養和室外培養按培養基的形態分固體培養和液體培養按培養的純度分

純種培養

和

單種培養按藻液的流動情況分靜止培養和循環流動水培養按氣體交換情況分充氣培養和不充氣培養按藻液與外界接觸程度分封閉式培養和開放式培養按培養規模和目的分小型培養、中繼培養和大量培養三、培養方式按培養的場所分室內培養和室外培養7（1）純培養和單種培養純培養（axenicculture）：是無菌培養，指排除了包括細菌在內的一切生物的條件下進行的培養。純培養操作要求十分嚴格，要求有無菌室、超凈臺等設備，容器、工具、培養液等均須徹底滅菌。培養成功率很高，是進行科學研究不可缺少的技術。單種培養（single-speciesculture）：指區別于純培養的不排除細菌存在的培養（可以是生產性的，也可以是非生產性的）（1）純培養和單種培養純培養（axenicculture）8（2）封閉式培養和開放式培養封閉式培養（closedculture）：指把培養液密封在透明的容器中，與外界空氣隔離，暴露在陽光中，CO2完全采用人工供給的方法。各種反應器等開放式培養：指把藻類培養在開敞容器中，如廣口玻璃瓶、水族箱、玻璃鋼水槽、水泥池等。封閉式薄膜裝置（2）封閉式培養和開放式培養封閉式培養（closedcul9單胞藻類的實驗室培養課件10封閉式塑料薄膜袋培養，方法簡單，成本低、培養的藻細胞密度大，不易污染且生產周期短，效果很好單胞藻類的實驗室培養課件11（3）小型培養、中繼培養和大量培養小型培養：一級培養，目的是培養和供應藻種，用于科研等。一般采用封閉式不充氣一次性培養方式，培養容器一般采用100～3000ml的三角燒瓶。中繼培養：又稱二級培養，目的是藻種擴大培養，供應生產性大量培養的藻種。一般在室內大的玻璃容器或塑料大袋中進行。（3）小型培養、中繼培養和大量培養小型培養：一級培養，目的是12大量培養：也叫三級培養，目的是為培養動物提供大量單胞藻餌料。有室內和室外兩種。目前主要采取室內、開放式、通氣、一次性或半連續培養法，培養容器有大型玻璃鋼水槽、大型水泥池或塑料薄膜袋等（也有用土池）。大量培養：也叫三級培養，目的是為培養動物提供大量單胞藻餌料。13單胞藻生產性擴大培養常用流程500mL藻種5000mL三角燒瓶細口玻璃瓶塑料桶封閉式塑料薄膜水泥池一級培養二級培養三級培養單胞藻生產性擴大培養常用流程500mL藻種5000mL三角燒14實驗室培養過程消毒配制培養液接種培養管理收獲實驗室培養過程消毒151容器、工具和水消毒方法總結一級培養（實驗室的培養）：金屬器具和試管口、瓶口：直接灼燒玻璃器皿：洗液+烘箱紙、棉花、紗布：烘箱培養用水：砂濾水→脫脂棉→煮沸→冷卻洗液：15g重鉻酸鉀+200mg濃硫酸混勻1容器、工具和水消毒方法總結一級培養（實驗室的培養）：16

粒徑厚度細砂0.1mm60～80cm

2～3層網目<0.1mm的篩絹網布粗砂3～4mm8～10cm

1層網目1mm的膠絲網布碎石2.5～3.5cm5～8cm

1層網目1～2mm膠絲網布篩板篩孔2cm5cm粒徑厚17培養用水海水沉淀砂濾脫脂棉燒開冷卻過濾器水消毒池一級培養二、三級培養培養用水海水沉淀砂濾脫脂棉燒開冷卻過濾器水消毒池一級培養二、18培養液的配制

配方極多，每種配方主要適用于一定藻種，這里介紹比較常用的幾種：水生4號和克諾普（Knop）培養液，一般用于綠藻；藍藻可用朱氏10號或水生105號無氮培養基（后者適于固氮藍藻）；硅藻可用朱氏10號和水生硅1號培養基；另外還有海產綠藻、硅藻的培養基。常用培養基配方見下表。培養液的配制配方極多，每種配方主要適用于一定藻種，這19以上用水量都是加至1000mL，海藻培養液用海水，如無海水可用淡水1000mL加30克食鹽代替。如配制固體培養基，可在培養液內加入1.5％的瓊脂。以上用水量都是加至1000mL，海藻培養液用海水，如無海水可20藻種的獲得1購買2自行分離藻種的獲得21分離主要有以下幾種方法離心法微吸管（毛細管）分離：將稀釋適度藻液水樣，置淺凹載玻片上，鏡檢。用微吸管挑選要分離的藻體，認真仔細地吸出，放入另一淺凹載片上，鏡檢這一滴水中是否達到純分離的目的稀釋分離法：把含有需要分離的藻類而又混雜有其他生物的水樣，取其一定量，用培養液稀釋。通過稀釋到適宜程度的方法，達到把原混雜生物單個分離培養的目的。平板分離法：這個方法的培養基制備和分離方法，與菌類的平板分離法基本相同，只是培養基配方不同。分離主要有以下幾種方法離心法22稀釋分離法平板分離法稀釋分離法平板分離法231．藻種的選擇：特征：⑴生長迅速；⑵對極端的溫度和輻射條件的耐性范圍大；⑶蛋白質，脂類和糖類含量高，或有選擇地積累一種特殊的代謝產物（如甘油）；⑷無毒性，且易于收獲。根據系統的要求和特殊的方法，還可有其他要求。1．藻種的選擇：242．接種：在分離到單純藻群后，就可接種到培養液中進行培養，進而移養擴大培養。

液體接種：是將藻液直接加入培養液中進行攪拌，水溫較低（10℃以內）時，多加；約占培養液總量的30～40％左右，水溫適宜時（25～30℃左右），可加5～8％左右。2．接種：25按種后瓶口用滅菌紙包扎，放在適宜光、溫條件下培養，每天輕輕搖動二次。大約二周后進行一次移植。藻種在培養過程中必須定期用顯微鏡檢查，保持不受其他生物污染。按種后瓶口用滅菌紙包扎，放在適宜光、溫條件下培養，每天輕輕搖263．藻種的保存：

一旦藻種分離得到，就要保存好以便在一定的時間內供接種用。為此，要將藻種消毒，避免其他來源的污染。給以適當的光照和溫度。在液體培養中，為了快速增殖，可用5400lx。再得到良好生長后（1～2周），培養液移到更低的光照條件（540～1100lx），以求緩慢生長及儲藏。3．藻種的保存：274.培養管理：主要是使已接種培養物在相對穩定適宜環境中大量繁殖生長。要注意以下因素：1）二氧化碳濃度在開放式不通氣方法培養中，攪拌是十分必要的，可以增加水和空氣的接觸面，使空氣中二氧化碳溶解到培養液中，而且幫助沉淀藻類細胞上浮獲得光照。在通氣培養中，培養液內應維持二氧化碳濃度在0.1～5％之間。

4.培養管理：主要是使已接種培養物在相對穩定適宜環境中大量繁282）光照強度利用太陽光源培養時，一般在室內培養可放在近窗口地方，防止強直射光照射。或利用人工光源（60～100瓦電燈或日光燈），需1500～3000勒克斯/厘米2。3）溫度適溫一般在10～30℃之間，最適溫常為20～25℃。若在室外培養，夏季中午高溫，冬季早晚低溫，常造成不利影響，需設法調節。2）光照強度利用太陽光源培養時，一般在室內培養可放在近窗口294）無機營養應不斷添加新鮮培養液，及時補充被藻吸收后減少了的某些元素。5）注意pH變化如變動過大，可用酸、堿調節。6）適當控制培養物中藻細胞濃度過高會引起光照和無機營養不足，并導致pH上升。一般控制在0.3g（干重）/L范圍內。4）無機營養應不斷添加新鮮培養液，及時補充被藻吸收后減少了30收獲根據水色的由淺變深綠藻類：由嫩綠色變為深綠色硅藻類：由淺褐色變為深褐色金藻類：金黃色靜止期后的老化藻對擴大培養或投喂都不利收獲根據水色的由淺變深31thankyou！thankyou！32微藻的實驗室培養微藻的實驗室培養33藻類的概述培養的方式實驗室培養藻類的概述34綠藻裸藻黃藻藍藻門綠藻裸藻黃藻藍藻門35一、藻類的概述微藻（Microalgae），是原生生物界一類真核生物。藻類植物共約為2100屬,27000種。根據所含色素、細胞構造、生殖方法和生殖器官構造的不同，分為綠藻門、裸藻門、輪藻門、金藻門、黃藻門、硅藻門、甲藻門、藍藻門、褐藻門和紅藻門。色素的顏色劃分，藻可分為3類：綠藻、褐藻和紅藻單胞藻具有利用太陽光能效率高、營養豐富、生長繁殖迅速、對環境的適應性強和容易培養等重要特性，因而受到重視。一、藻類的概述微藻（Microalgae），是原生生物界一類36二、微藻的營養模式和生長模式二、微藻的營養模式和生長模式37（二）、微藻的生長模式

藻類在培養過程中，生長繁殖的速度，出現一定的起伏，這種生長模式可劃分為五個時期（延緩期、指數生長期、相對生長下降期、靜止期、死亡期）（二）、微藻的生長模式藻類在培養過程中，生長繁殖的速度，38三、培養方式按培養的場所分室內培養和室外培養按培養基的形態分固體培養和液體培養按培養的純度分

純種培養

和

單種培養按藻液的流動情況分靜止培養和循環流動水培養按氣體交換情況分充氣培養和不充氣培養按藻液與外界接觸程度分封閉式培養和開放式培養按培養規模和目的分小型培養、中繼培養和大量培養三、培養方式按培養的場所分室內培養和室外培養39（1）純培養和單種培養純培養（axenicculture）：是無菌培養，指排除了包括細菌在內的一切生物的條件下進行的培養。純培養操作要求十分嚴格，要求有無菌室、超凈臺等設備，容器、工具、培養液等均須徹底滅菌。培養成功率很高，是進行科學研究不可缺少的技術。單種培養（single-speciesculture）：指區別于純培養的不排除細菌存在的培養（可以是生產性的，也可以是非生產性的）（1）純培養和單種培養純培養（axenicculture）40（2）封閉式培養和開放式培養封閉式培養（closedculture）：指把培養液密封在透明的容器中，與外界空氣隔離，暴露在陽光中，CO2完全采用人工供給的方法。各種反應器等開放式培養：指把藻類培養在開敞容器中，如廣口玻璃瓶、水族箱、玻璃鋼水槽、水泥池等。封閉式薄膜裝置（2）封閉式培養和開放式培養封閉式培養（closedcul41單胞藻類的實驗室培養課件42封閉式塑料薄膜袋培養，方法簡單，成本低、培養的藻細胞密度大，不易污染且生產周期短，效果很好單胞藻類的實驗室培養課件43（3）小型培養、中繼培養和大量培養小型培養：一級培養，目的是培養和供應藻種，用于科研等。一般采用封閉式不充氣一次性培養方式，培養容器一般采用100～3000ml的三角燒瓶。中繼培養：又稱二級培養，目的是藻種擴大培養，供應生產性大量培養的藻種。一般在室內大的玻璃容器或塑料大袋中進行。（3）小型培養、中繼培養和大量培養小型培養：一級培養，目的是44大量培養：也叫三級培養，目的是為培養動物提供大量單胞藻餌料。有室內和室外兩種。目前主要采取室內、開放式、通氣、一次性或半連續培養法，培養容器有大型玻璃鋼水槽、大型水泥池或塑料薄膜袋等（也有用土池）。大量培養：也叫三級培養，目的是為培養動物提供大量單胞藻餌料。45單胞藻生產性擴大培養常用流程500mL藻種5000mL三角燒瓶細口玻璃瓶塑料桶封閉式塑料薄膜水泥池一級培養二級培養三級培養單胞藻生產性擴大培養常用流程500mL藻種5000mL三角燒46實驗室培養過程消毒配制培養液接種培養管理收獲實驗室培養過程消毒471容器、工具和水消毒方法總結一級培養（實驗室的培養）：金屬器具和試管口、瓶口：直接灼燒玻璃器皿：洗液+烘箱紙、棉花、紗布：烘箱培養用水：砂濾水→脫脂棉→煮沸→冷卻洗液：15g重鉻酸鉀+200mg濃硫酸混勻1容器、工具和水消毒方法總結一級培養（實驗室的培養）：48

粒徑厚度細砂0.1mm60～80cm

2～3層網目<0.1mm的篩絹網布粗砂3～4mm8～10cm

1層網目1mm的膠絲網布碎石2.5～3.5cm5～8cm

1層網目1～2mm膠絲網布篩板篩孔2cm5cm粒徑厚49培養用水海水沉淀砂濾脫脂棉燒開冷卻過濾器水消毒池一級培養二、三級培養培養用水海水沉淀砂濾脫脂棉燒開冷卻過濾器水消毒池一級培養二、50培養液的配制

配方極多，每種配方主要適用于一定藻種，這里介紹比較常用的幾種：水生4號和克諾普（Knop）培養液，一般用于綠藻；藍藻可用朱氏10號或水生105號無氮培養基（后者適于固氮藍藻）；硅藻可用朱氏10號和水生硅1號培養基；另外還有海產綠藻、硅藻的培養基。常用培養基配方見下表。培養液的配制配方極多，每種配方主要適用于一定藻種，這51以上用水量都是加至1000mL，海藻培養液用海水，如無海水可用淡水1000mL加30克食鹽代替。如配制固體培養基，可在培養液內加入1.5％的瓊脂。以上用水量都是加至1000mL，海藻培養液用海水，如無海水可52藻種的獲得1購買2自行分離藻種的獲得53分離主要有以下幾種方法離心法微吸管（毛細管）分離：將稀釋適度藻液水樣，置淺凹載玻片上，鏡檢。用微吸管挑選要分離的藻體，認真仔細地吸出，放入另一淺凹載片上，鏡檢這一滴水中是否達到純分離的目的稀釋分離法：把含有需要分離的藻類而又混雜有其他生物的水樣，取其一定量，用培養液稀釋。通過稀釋到適宜程度的方法，達到把原混雜生物單個分離培養的目的。平板分離法：這個方法的培養基制備和分離方法，與菌類的平板分離法基本相同，只是培養基配方不同。分離主要有以下幾種方法離心法54稀釋分離法平板分離法稀釋分離法平板分離法551．藻種的選擇：特征：⑴生長迅速；⑵對極端的溫度和輻射條件的耐性范圍大；⑶蛋白質，脂類和糖類含量高，或有選擇地積累一種特殊的代謝產物（如甘油）；⑷無毒性，且易于收獲。根據系統的要求和特殊的方法，還可有其他要求。1．藻種的選擇：562．接種：在分離到單純藻群后，就可接種到培養液中進行培養，進而移養擴大培養。

液體接種：是將藻液直接加入培養液中進行攪拌，水溫較低（10℃以內）時，多加；約占培養液總量的30～40％左右，水溫適宜時（25～30℃左右），可加5～8％左右。2．接種：57按種后瓶口用滅菌紙包扎，放在適宜光、溫條件下培養，每天輕輕搖動二次。大約二周后進行一次移植。藻種在培養過程中必須定期用顯微鏡檢查，保持不受其他生物污染。按種后瓶口用滅菌紙包扎，放在適宜光、溫條件下培養，每天輕輕搖583．藻種的保存：

一旦藻