ICS 65.020B16

DB37山 東 省 地 方 標 準DB37/T3771—2019棗瘋病綜合防控技術規程Technicalregulationforintegratedmanagementofjujubewitches’-broom20192019120520200105山東省市場監督管理局發布前 言本標準按照GB/T1.1—2009給出的規則起草。本標準由山東省農業農村廳提出并組織實施。本標準由山東農業標準化技術委員會歸口。本標準起草單位：山東省果樹研究所、山東省農業科學院植物保護研究所。棗瘋病綜合防控技術規程范圍GB/T8321（所有部分）農藥合理使用準則NY/T393綠色食品農藥使用準則NY/T1276農藥安全使用規范總則下列術語和定義適用于本文件。下列術語和定義適用于本文件。3.1植原體Phytoplasma3.2棗瘋病Jujubewitches’-broom（Jujubewitches’-broomphytoplasma）3.3棗瘋病雙抗夾心酶聯免疫吸附（DAS-ELISA）檢測利用棗瘋病植原體免疫膜蛋白抗體（來源于兔）及堿性磷酸酯酶標記的羊抗兔進行ELISA檢測樣品的吸光值（I）與健康植株（H）的吸光值。根據I/H的比值來判斷棗瘋植原體的存在與否。4發病規律4.1傳播途徑棗瘋病植原體主要通過媒介昆蟲、嫁接和帶病苗木進行傳播。4.2發病特點1～25～6初期表皮呈褐色，萌生的根蘗呈叢枝狀，后期形成點發性潰瘍斑，繼而枯死。倍～6結果少或不結果，果實小、花臉，肉質硬，口感差。結果少或不結果，果實小、花臉，肉質硬，口感差。6普查與鑒定每年8月～10月進行逐株檢查，枝條節間縮短、簇生，葉片黃化變小為病害診斷主要依據，對查出的病株做好明顯標記，統計發病率。（PCR）檢測方法見附錄A。（DAS-ELISA）檢測方法見附錄B。7防治措施新建棗園宜在沒有發生棗瘋病的地塊建園。cm～60cm0.360～70適度修剪，合理整形，提高樹體通透性和光照強度。（7.5防治媒介昆蟲主要傳毒媒介為中華擬菱紋葉蟬（HishimonoideschinensisA.）、凹緣菱紋葉蟬（HishimonusselltusU.）（HishimonuslamellatusC.）（Typhlocybasp.）GB/T8321NY/T393和NY/T1276附錄A（規范性附錄）棗瘋病病原聚合酶鏈式反應（PCR）檢測方法DNA采取癥狀明顯的和健康的棗樹幼嫩枝條、葉片或者花樣本，樣本短時間（1周內）可于4℃冰箱保存，長時間需于-80℃冰箱保存。用商品化植物基因組DNA快速提取試劑盒提取。PCR16SrRNAR16mF2（5'-CATGCAAGTCGAACGGA-3'）/R16mR1（5'-CTTAACCCCAATCATCGAC-3'）進行PCRDNAPCRPCRTaq后9445s，601min，722min，357210minPCR產物于1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測。陽性材料直接PCR擴增片段大小約1.4kb，陰性對照及空白PCR產物于1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測。陽性材料直接PCR擴增片段大小約1.4kb，陰性對照及空白對照均應無擴增片段。A.4序列測定及分析PCRDNA進行Blast檢索，初步確定病原種類。附錄B（規范性附錄）棗瘋病植原體雙抗夾心酶聯免疫吸附（DAS-ELISA）檢測方法將疑似病樣按照1:10或1:100的比例加入抗原包被緩沖液，研磨后取上清備用。取150μL稀釋的檢測樣品液加入96孔酶標板中，以棗瘋植原體陽性標準品為陽性對照，以健康棗樹標準品為陰性對照，在4℃條件下孵育過夜或37℃孵育1h～2h。洗板將酶聯板迅速反扣，棄去孔中液體，每孔加入PBST液200μL，靜置3min～5min后迅速棄去孔中液體，并在吸水紙上扣打幾下以盡量除去孔中液體，重復3次。B.4封閉B.4封閉去除酶標板中的PBST緩沖液，每孔加入150μL的封閉緩沖液，37℃恒溫箱孵育1.5h。B.5洗板同步驟C.3。B.6加一抗用PBST稀釋棗瘋植原體免疫膜蛋白抗體（來源于兔）至合適的工作濃度（1:1000），每孔樣品加150μL，37℃恒溫箱孵育2h。B.7洗板同步驟C.3。B.8加酶標抗體每孔加入150μLPBST稀釋的堿性磷酸酯酶標記的羊抗兔（1:5000），37℃恒溫箱孵育2h。B.9洗板同步驟C.3。每孔加底物溶液150μL；室溫避光顯色30min～60min；酶聯儀在405nm下讀數。附錄C（）藥劑防治棗瘋病的方法見表C.1。表C.1藥劑防治棗瘋病的方法藥劑選擇四環素類農用抗生素使用時間棗樹展葉期，5月上旬使用方法配藥4～6500mL打孔20cm452cm～3cm0.45cm的注藥孔。若多側均有瘋枝時，打孔數量依據樹干直徑決定，樹干直徑＜10cm110cm210cm410cm附近不能有樹洞和裂縫，避免造成漏液。輸液1.5m常滴液后，放到最大輸液速度處輸液。輸完液后用泥巴涂抹好孔口，以防藥液揮發。使用藥量10cm～