培養基的類型按物理狀態分固體培養基液體培養基——允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他微生物生長——根據微生物的代謝特點，在培養基中加入某種指示劑或化學藥品按功能分選擇培養基鑒別培養基培養基類型第一頁，共三十四頁。培養基的營養物質——水、無機鹽、碳源、氮源、生長因子培養基組分提供的主要營養牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸鹽、維生素蛋白胨10g氮源、維生素NaCl5g無機鹽水1000ml氫元素、氧元素牛肉膏蛋白胨培養基的營養構成培養基組成第二頁，共三十四頁?？梢宰鳛橄趸毦荚?、氮源和能源的是：A．CO2、NH3、光能B．(CH2O)、N2、NH3C．CO2、NH3、NH3D．(CH2O)、NH3、N2【解析】本題考查知識點：①硝化細菌是化能自養型微生物；②硝化細菌合成有機物所需能量來源來自氧化分解外界環境中的NH3；③合成有機物所需的碳源是CO2；④NH3氧化分解的產物是NO3－，也就是硝化細菌的氮源第三頁，共三十四頁。關于微生物營養物質的敘述中，正確的是：A.是碳源的物質不可能同時是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機物只提供無機鹽D.無機氮源也能提供能量【解析】有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。第四頁，共三十四頁?！窘馕觥繉τ贑選項，除水以外的無機物種類繁多功能也多樣。二氧化碳，可作為自養型微生物的碳源；NaHCO3可作為自養型微生物的碳源和無機鹽；而NaCl則只能提供無機鹽。對于D選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3可為硝化細菌提供能量和氮源。第五頁，共三十四頁。 ▲土壤中分解尿素細菌的分離▲分解纖維素的微生物的分離選擇培養基的成分：尿素作為唯一氮源選擇培養基的成分：纖維素作為唯一碳源鑒定方法：在培養基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，pH升高，說明細菌能分解尿素鑒定方法：剛果紅染色法第六頁，共三十四頁。透明圈透明圈越大，細菌分解纖維素的能力越強第七頁，共三十四頁。(2013廣東)以下為某興趣小組獲得的實驗結果及其分析，正確的是：解析：細菌分解纖維素后會形成一個透明圈，透明圈越大，細菌分解能力越強。第八頁，共三十四頁。（2011·新課標全國卷）有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同學欲從污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株。回答問題：

(1)在篩選過程中，應將土壤樣品稀釋液接種于以_______為唯一碳源的固體培養基上，從功能上講，該培養基屬于________培養基。

(3)為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍分解圈的大小，分解圈大說明該菌株的降解能力_____。選擇原油強第九頁，共三十四頁。(2)純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即____和_______。(4)通常情況下，在微生物培養過程中，實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、________和________。無菌技術要求實驗操作應在酒精燈________附近進行，以避免周圍環境中微生物的污染。火焰平板劃線法稀釋涂布平板法干熱滅菌高壓蒸汽滅菌第十頁，共三十四頁。富集培養指創設僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環境條件，使其群落中的數量大大增加，從而分離出所需微生物的培養方法。對產耐高溫淀粉酶微生物的富集培養應選擇_______的培養基，并在________條件下培養。

高溫以淀粉為唯一碳源脲酶可以將尿素分解為NH3，從而使尿素溶液pH升高，這可用_______試劑來檢驗。用纖維素作唯一碳源的培養基培養微生物，得到的纖維素分解菌中可能還混有_______。自養微生物(硝化細菌)酚紅第十一頁，共三十四頁。練習下表表示某培養基的配方，下列有關敘述正確的是： A.從物理性質看該培養基屬于液體培養基，從用途看該培養基屬于鑒別培養基B．培養基中屬于碳源的物質主要是葡萄糖，屬于氮源的物質是蛋白胨C．該培養基缺少提供生長因子的物質D．該培養基調節到合適的pH后就可以接種菌種第十二頁，共三十四頁。【解析】伊紅、美藍能使某些細菌著色，起鑒別作用；糖類(尤其是葡萄糖)是最常用的碳源；蛋白胨主要用作氮源，但也提供生長因子，并作為異養型微生物的碳源、能源。伊紅美藍培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色第十三頁，共三十四頁。選擇培養基的制作方法(1)基礎培養基中加抗性物質。舉例：①加高濃度食鹽：分離金黃色葡萄球菌。②加青霉素：分離酵母菌和細菌。(2)通過改變培養基的成分。舉例：①培養基中缺乏氮源：可分離自生固氮微生物。②培養基中缺乏有機碳源：可分離自養微生物。第十四頁，共三十四頁。(3)利用培養基的特定成分。舉例：①當石油是唯一碳源：可分離出能消除石油污染的微生物。②當纖維素為唯一碳源：可分離纖維素分解菌。(4)通過某些特殊環境分離微生物。舉例：①在高鹽環境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時易失水而不能生存。②在高溫環境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環境中因酶失活而無法生存。第十五頁，共三十四頁。消毒和滅菌獲得純凈培養物的關鍵——防止外來雜菌的入侵——指使用強烈的理化因素殺死物體內外

所有微生物，包括芽孢和孢子。——使用較為溫和的物理或化學方法，僅殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒滅菌常用的消毒和滅菌的方法P15-16第十六頁，共三十四頁。計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板培養基的制備P17倒平板操作的討論：(1)培養基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度？可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。(2)為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。第十七頁，共三十四頁。(3)平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。(4)在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生，因此最好不要用這個平板培養微生物。第十八頁，共三十四頁。純化原理：在培養基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是純化的細菌菌落。純化技術接種的方法平板劃線法稀釋涂布平板法第十九頁，共三十四頁。平板劃線法第二十頁，共三十四頁。稀釋涂布平板法第二十一頁，共三十四頁。平板劃線操作的討論(1)為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。第二十二頁，共三十四頁。(2)在灼燒接種環之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環溫度太高，殺死菌種。(3)在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。第二十三頁，共三十四頁?！@微鏡直接計數原理——利用特定細菌計數板或血細胞計數板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數量，但不能區分死菌與活菌統計微生物數目的方法▲活菌計數法原理——當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。統計的菌落數往往比活菌的實際數目低第二十四頁，共三十四頁。(2)純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即____和_______。(4)通常情況下，在微生物培養過程中，實驗室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、________和________。無菌技術要求實驗操作應在酒精燈________附近進行，以避免周圍環境中微生物的污染。火焰平板劃線法稀釋涂布平板法干熱滅菌高壓蒸汽滅菌（2011·新課標全國卷）有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同學欲從污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐栴}：

第二十五頁，共三十四頁。練習(2013四川)普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽胞桿菌的α-淀粉酶基因轉入酵母菌中，經篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種（過程如圖甲所示）。工程酵母菌固體平板培養接種接種篩選、接種②液體培養菌種α-淀粉酶基因①重組質粒接種到新鮮培養基③圖甲⑴圖甲中，過程①需要的酶有

。為達到篩選目的，平板內的固體培養基應以

作為唯一碳源。②、③過程需要重復幾次，目的是

。篩選出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌種限制酶和DNA連接酶淀粉第二十六頁，共三十四頁。練習⑵某同學嘗試過程③的操作，其中一個平板經培養后的菌落分布如圖乙所示。該同學的接種方法是

，推測該同學接種時可能的操作失誤是

。⑶以淀粉為原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發酵，接種

菌的發酵罐需要先排氣，其原因是

。⑷用凝膠色譜法分離α-淀粉酶時，在色譜柱中移動速度較慢的蛋白質，相對分子質量較

。圖乙稀釋涂布平板法涂布不均勻（3）工程酵母工程酵母菌利用淀粉的速度很快，發酵產生CO2的速度也很快（4）小第二十七頁，共三十四頁。練習（2013新課標卷II）臨床試用抗生素前，有時需要做細菌耐藥實驗。實驗時，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實驗步驟操作，以確定某致病菌對不同抗生素的敏感性。回答下列問題：（1）為了從樣本中獲取致病菌菌落，可用_______法或_________法將樣本借種于固體培養基表面，經過選擇培養、鑒別等步驟獲得。（2）取該單菌落適當稀釋，用______法接種于固體培養基表面，在37℃培養箱中培養24h，使其均勻生長，布滿平板。

第二十八頁，共三十四頁。練習（3）為了檢測該致病菌對于抗生素的敏感性，將分別含有A，B，C，D四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養一段時間后，含A的濾紙片周圍出現透明圈，說明該致病菌對抗生素A_____；含B的濾紙片周圍沒有出現透明圈，說明該致病菌對抗生素B_____；含C的濾紙片周圍的透明圈比含A的小，說明________；含D的濾紙片周圍的透明圈也比含A的小，且透明圈中出現了一個菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的________。（4）根據上述實驗結果，為達到抗菌目的，最好應選擇抗生素_______。第二十九頁，共三十四頁。練習【答案】（1）平板劃線稀釋涂布平板（2）稀釋涂布平板（3）敏感不敏感該致病菌對C的敏感性比對A弱耐藥菌（4）A【解析】（1）分離菌落常用稀釋涂布平板法或平板劃線法（2）取該單菌落適當稀釋，稀釋用涂布平板法進行接種（3）含抗生素的濾紙片周圍出現透明圈，說明該致病菌對該抗生素有敏感性，周圍沒有透明圈的說明該抗生素不具有敏感性。透明圈越大的敏感性越強。（4）實驗結果抗生素A對該致病菌的作用最好。第三十頁，共三十四頁。練習（2013上海）回答下列關于微生物的問題。阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某地合歡樹下距離地表深10～15cm處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株SM01，以下為該菌株的鑒定過程。為獲得單菌落，可采用

法將初篩菌液接種在_____培養基上。表4中培養液pH均為6.0，若對