1、藥代動力學在新藥研究中的應用 ： 85327256 ： 1 生物利用度和生物等效性研究 人體生物利用度（bioavailability）是反映制劑中主藥吸收進入人體體循環的相對量和速度的藥代動力學參數。生物等效性（bioequivalancy）試驗是指用生物利用度研究的方法，以藥代動力學參數為指標，比較同一種藥物的相同或者不同劑型的制劑，在相同的試驗條件下，其活性成份吸收程度和速度有無統計學差異的人體試驗。 一、生物樣品測定方法的要求1特異性首選色譜法如HPLC、GC、GC-MS或LC-MS等方法放免與ELISA方法有一定的特異性，靈敏度高，但常有交叉反應。2標準曲線與線性范圍必須用至少5個濃

2、度建立標準曲線，應使用與待測樣品相同生物介質，線性范圍要能覆蓋全部待測濃度，不得用線性范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。標準曲線不包括零點。3精密度與準確度精密度用質控樣品的日內和日間相對標準差（RSD）表示，一般RSD應小于15，在LOQ附近RSD應小于20。準確度是指用特定方法測得的生物樣品濃度與真實濃度的接近程度，可用相對回收率表示，一般應85115范圍內，在LOQ附近應在80120范圍內。 加樣濃度 (mgL)0.269.8419.680.269.8419.680.299.1020.490.299.7221.540.2210.2219.030.259.3819.56 檢出濃度0.241

3、0.2721.080.309.2118.26 (mgL)0.308.6617.510.299.3719.090.308.4716.960.309.6217.65 X0.279.3419.010.299.4619.22 SD0.040.851.800.020.211.50 RSD（%）14.89.19.56.92.27.8 表1-3 精密度試驗日 內 變 異 日 間 變 異6提取回收率應考察高、中、低三個濃度的提取回收率，其限度一般應高于50。7質控樣品質控樣品系將已知量的待測藥物加入到生物介質中配制的樣品，用于質量控制。一般配制高、中、低三個濃度的質控樣品。8質量控制應在生物樣品分析方法確證完

4、成之后開始測試未知樣品。每個未知樣品一般測定一次，必要時可進行復測。每批生物樣品測定時應建立新的標準曲線，并隨行測定高、中、低三個濃度的質控樣品。質控樣品測定結果的偏差一般應小于20。一般情況下，受試者應具備如下條件:男性1840周歲。同一批受試者年齡不宜相差10歲以上。體重：一般要求在標準體重10范圍內；或體重指數BMI在2024范圍內。身體狀況：無心、肝、腎、消化道、神經系統、精神異常及代謝異常等病史；體格檢查示血壓、心率、心電圖、呼吸狀況、肝、腎功能和血象無異常。試驗前兩周內未服用任何其它藥物。簽署知情同意書。 受試者例數為1824例 絕對生物利用度試驗選用經批準上市的相同藥物靜脈注射劑

5、作為參比制劑。相對生物利用度試驗選用經批準上市的相同藥物相同劑型的主導產品作為參比制劑 對受試者的要求受試者于試驗前1日和試驗期內均勿飲用酒類和咖啡類飲料；試驗前禁食過夜10小時。于次日早晨空腹服用受試制劑或參比制劑，用150200ml溫開水送服；服藥2小時后方可再飲水，4小時后進統一餐。受試者服藥后應避免劇烈運動，亦不得長時間臥床三、設計方法一個受試制劑與一個參比制劑比較的情況下，采用兩制劑雙周期交叉試驗設計，以減少不同試驗周期和個體差異對試驗結果的影響。受試者按隨機原則分成兩組。一組受試者先服用受試制劑，后服用參比制劑；另一組受試者先服用參比制劑，后服用受試制劑。通常應間隔1周或2周。半衰

6、期長的藥物，需有更長的間隔時間。四、生物樣品采集時間點的確定通常應有預試驗，為合理設計采樣點提供依據。應用血藥濃度測定法時，服藥前應先取空白血樣。一般在藥時曲線峰前部分至少取4個點，峰后部分取6個或6個以上點。總采樣點不少于11個。采樣持續到受試藥原形或其活性物35個半衰期時，或持續采樣至血藥濃度為Cmax的110120以后。2 臨床前藥代動力學研究 1研究目的：了解新藥在體內動態變化規律，闡明ADME過程。為藥理毒理研究中的安全性與有效性提供依據。2、檢測方法：建立檢測方法要求同上！放射性核素標記藥物，用前要進行純度檢查，放化純度95%標準曲線與線性范圍：要指明藥物的化學純度要制備藥物在不同

7、生物介質中的標準曲線。在所測濃度范圍內，藥物自生物樣品的回收率不低于70。3.試驗材料與方法1）實驗藥品應注明受試藥物的名稱、批號、來源、純度、保存條件及配制方法。使用的受試藥物應與藥效學或毒理學研究使用的一致。對照品應是標明含量的純品 2）實驗動物一般采用成年和健康的動物。常用動物有小鼠、大鼠、兔、豚鼠和狗等。首選動物：應與藥效學或毒理學研究一致。盡量在清醒狀態下實驗，動力學研究最好從同一動物多次采樣。 創新藥應選用兩種或兩種以上的動物，其中一種為嚙齒類動物；另一種為非嚙齒類動物。其他類型的藥物，可選用一種動物（建議首選非嚙齒類動物，如犬或兔等）。口服用藥不宜選用兔子等食草類動物。 3）給藥

8、途徑 所用的給藥途徑和方式，應盡可能與臨床用藥一致。4）試驗劑量藥代動力學研究至少應設三個劑量組，其中一個劑量應相當于藥效學試驗有效劑量，高劑量一般接近于最大耐受量(MTD)，以了解藥物在體內的動力學過程是線性動力學還是非線性動力學。4 實驗設計1）血藥濃度時間曲線：取樣點的設計應兼顧到吸收相、分布相和消除相.根據研究樣品的特性，取樣點通常可安排913個點不等，即吸收相應取23個點，達峰濃度處取23點，分布相取23點，消除相取34個點整個采樣時間應持續到35個半衰期或到Cmax的1/101/20。在非連續取樣的動物試驗中，每個時間點至少應有5只動物的數據;如經同一動物多次采樣，每個時間點至少應

9、有3只動物的數據。口服給藥，一般在給藥前應禁食12小時以上。特布他林濃度-時間曲線圖3）排泄試驗一般選用小鼠或大鼠進行排泄試驗。選定一個有效劑量，給藥后按一定的時間間隔分段收集尿液、糞便和大鼠的膽汁，記錄每一時間間隔內的尿液、糞便和膽汁的體積或重量，測定藥物在其中的排泄量。至少5只動物的試驗數據，以確定藥物的排泄途徑、排泄速度和各途徑的排泄量。4）血漿藥物蛋白結合方法：平衡透析法、超過濾法、分配平衡法、凝膠過濾法、光譜法等。以平衡透析法最簡單、經濟，但費時，需24h達平衡。至少進行3個濃度的血漿蛋白結合率試驗，每個濃度至少重復試驗3次，以了解是否有濃度依賴性。注意事項：考慮影響因素：pH、血漿

10、濃度、藥物濃度等證明藥物與半透膜本身有無結合，應做對照從半透膜上溶解下來的成分會影響藥物測定，應特別注意。要分析空白讀數高的原因。可被血漿轉化的藥物，要加少量酶抑制劑。6）藥物對代謝酶活性的影響： 對于創新藥，應觀察該藥物對細胞色素P450同工酶的誘導或抑制作用。5、數據分析6、結果與評價7、注意事項：應提供有關測試方法學的確證資料應提供每一只動物每個時間點的數據、均值和標準差；每只動物的藥物濃度時間曲線及藥代動力學參數值。比較藥物濃度時間曲線擬合計算值與觀察值的符合程度。進行生物樣品分析時，應注意凍融的影響和質控。在短時間內，一組動物不得重復不同劑量的試驗。常用動力學軟件介紹1.NONLIN

11、軟件國外應用最廣泛的軟件Win Nonlin是其Windows版本，為美國Pharsight公司的產品可用于幾乎所有的藥代、藥效及非房室模型的分析藥代動力學和生物藥劑學程序包PKBP-N1由南京軍區總醫院于1985年編制主要功能包括：非線性曲線擬合隔室模型并作參數估算非線性米曼型消除動力學參數估算非房室模型分析給藥方案設計和預測體內血濃變化3P87/3P97（practical pharmacokinetic program)國家藥品評審中心組織中國藥理學會數學專業委員會編制國內應用最廣可處理各種途徑的線性和非線性藥動學模型主要功能：可處理不同房室數的各種線性和非線性藥動學模型的時間血濃數據，

12、并打印藥動學參數及各種圖表計算機自動給出可能的房室數及權重系數的計算結果對多劑量組數據進行批處理及統計分析用戶可自定義房室模型、權重系數、計算方法、收斂精度、初始值等進行研究分析提供12種模型，其中9種屬于一級速率消除的線性房室模型，3種屬于M ichaelis-Menten消除的一房室非線性模型 MAIN MENU 1. 3p87 (New Edition) 2. Bioequivalence evaluation 3. Estimation of Absorption Rate 4. Estimation of Pk parameters from urinary data 5. Exit

13、 MAIN MENU 1. Input or Modify Data 2. Computation for Mean C-T Data or Selection of Models 3. Computation for Batch or Groups of C-T Data 4. Algorithms and Conditions Specified by User 5. Output of Computed Results 6. Definition of Pharmacokinetic Models 7. Simplified Parameters Estimation System 8.

14、 ExitMODEL: Two-compartment Model with i.v. InjectionRecord No. 2 Mean of Group 1Algorithm = Marquardt Weight = 1Compartment number = 2 Regression coefficient = .9987655R square = .9975322 WSS = 4.953764E-02Goodness of fit = 7.419017E-02 Maximum C(obs)-C(cal) = .1531363Max (C-C(cal)/C) % = 11.99278

15、Convergent precision = 7.894796E-30AIC = -31.06529 Run test: 4Parameter Unit Values Standard ErrorA ug/ml 6.668624 2.88E-01alpha 1/h 3.888228 3.02E-01B ug/ml 1.162247 1.62E-01beta 1/h 0.392228 6.58E-02V (c) (mg)/(ug/ml) 1.276997T 1/2 alpha h 0.178268t 1/2 beta h 1.767202K21 1/h 0.911100K10 1/h 1.673

16、882K12 1/h 1.695475AUC (ug/ml)*h 4.678270CL(s) mg/h/(ug/ml) 2.137542 BIOEQUIVALENCE EVALUATION PROGRAM 1. Input PK parameters (AUC,Cmax,Tmax,. ) 2. Bioequivalence Analysis of PK parameters file input in 1. 3. Input Concentration-Time data and create a data file 4. Estimation of Concentration-Time da

17、ta file 5. Example From : Textbooks & Monographs: S-C Chow & J-P Liu 6. ExitANALYSIS OF BIOEQUIVALENCE 1. Input Concentration-Time data file and Estimation of Parameters 2. Display F Test and Two two One-sided tests Procedure 3. Display Individual subject Concentration-Time data and curve 4. Printou

18、t C-T data and Estimated Parameters on Printer 5. Return to Main menu PARAMETER:AUC(0-Tn) ANALYSIS OF VARIANCE Data without transformation-Source Sum of Squares DF Mean Squares F value P value-Inter-subjects Carry-over 554.0536 1 554.0536 7.1019 0.01578 Residuals 1404.2750 18 78.0153 5.5943 0.00032I

19、ntra-subjects Formulation 0.0051 1 0.0051 0.0004 0.98493 Periods 5.7711 1 5.7711 0.4138 0.52814 Residuals 251.0191 18 13.9455Total 2215.1239 39-Two one-side test and (1-2*alpha) confidential interval-Mean of Reference: 33.7026 Mean of Tested: 33.7266t1: 5.728 = t(1-alpha): 1.7340 t2: 5.688 = t(1-alpha): 1.73490% confidential interval: 94.0%-106.1%- CONCLUSION: Test and Reference formulation bioequivalencePARAMETER:AUC(0-Tn) ANALYSIS OF VARIANCE After Logrithmic transformation-source Sum of Squares DF Mean Squares