1、臨床基因擴增檢驗的質量保證衛生部臨床檢驗中心 李金明臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗的質量保證衛生部臨床檢驗中心 李金明臨質量保證(Quality Assurance,QA)為一產品或服務滿足特定質量要求提供充分可信性所必要的有計劃的和系統的措施。 臨床基因擴增檢驗質量保證質量保證(Quality Assurance,QA)臨床基室內質量控制（Internal Quality Control,IQC)的概念由實驗室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續評價本實驗室工作的可靠性程度，旨在監測和控制本實驗室工作的精密度，提高本室常規工作中批內、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結果是否可靠、可

2、否發出報告的一項工作。可概括為:(1)執行者：實驗室技術人員；(2)目的：監測實驗室測定的重復性；(3)功能：決定了當批測定的有效性，報告可否發出。是對實驗室測定的即時性評價。 臨床基因擴增檢驗質量保證室內質量控制（Internal Quality Contro室間質量評價（External Quality Assessment, EQA） 為客觀比較一實驗室的測定結果與靶值的差異，由外單位機構，采取一定的辦法，連續、客觀地評價實驗室的結果，發現誤差并校正結果，使各實驗室之間的結果具有可比性。這是對實驗室操作和實驗方法的回顧性評價，而不是用來決定在實時的測定結果的可接受性。當EQA用來為執業許

3、可或實驗室認證的目的而評價實驗室操作時，常描述為實驗室能力驗證（Proficiency testing, PT）。在以前的文獻中，EQA常描述室間質量控制。臨床基因擴增檢驗質量保證室間質量評價（External Quality Assess批 (Run)在相同條件下所獲得的一組測定。 臨床基因擴增檢驗質量保證批 (Run)在相同條件下所獲得的一組測定。 臨床基因擴增檢定 義正態分布(Gaussian distribution) 當一質控物用同一方法在不同的時間重復多次測定，當測定數據足夠多時，如以橫軸表示測定值，縱軸表示在大量測定中相應測定值的個數，則可得到一個兩頭低，中間高，中為所有測定值的

4、均值，左右對稱的“鐘形”曲線，亦即正態分布，又稱高斯分布。 臨床基因擴增檢驗質量保證定 義正態分布(Gaussian distribution正態分布的基本統計學含義可用均數（X）、標準差（s）和概率來說明。臨床基因擴增檢驗質量保證正態分布的基本統計學含義可用均數（X）、標準差（s）和概率來臨床基因擴增檢驗實驗室常規測定步驟標本收集：選擇測定項目、標本收集和保存。實驗室測定：標本接收、貼標簽、樣本處理、核酸擴增、產物檢測、測定的有效性和臨床診療價值。報告和解釋：結果發出、結果解釋和臨床管理。臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗實驗室常規測定步驟標本收集：選擇測定項目、質量保證、室內質控和室

5、間質評之間的關系臨床基因擴增檢驗質量保證質量保證、室內質控和室間質評之間的關系臨床基因擴增檢驗質量保臨床標本收集、運送、保存及其質量控制 標本收集 標本保存標本運送 臨床基因擴增檢驗質量保證臨床標本收集、運送、保存及其質量控制 臨床基因擴增檢驗質量標本收集標本采集時間對擴增檢測結果的影響 標本采集部位的準備 標本的類型和采集量 采樣質量的評價 采樣及運輸容器 標本采集中的防污染 臨床基因擴增檢驗質量保證標本收集標本采集時間對擴增檢測結果的影響 臨床基因擴增檢驗質標本采集時間對擴增檢測結果的影響在疾病發展過程中，標本采集過早或過晚都可能會給出假陰性結果。 臨床基因擴增檢驗質量保證標本采集時間對擴

6、增檢測結果的影響在疾病發展過程中，標本采集過標本采集部位的準備血液標本采集分泌物標本:采集部位的清潔消毒可去掉污染的微生物或其它雜物,但應適度,過度清潔消毒有可能會去掉或破壞靶微生物,故標本采集部位的準備應由訓練有素的人員進行。臨床基因擴增檢驗質量保證標本采集部位的準備血液標本采集臨床基因擴增檢驗質量保證標本的類型和采集量標本的類型: 血清(漿)、分泌物、痰、糞便、尿和腦脊液等。標本的采集量:應根據所測病原體而定。一般來說，如果標本的量對病原體培養夠用的話，則其量亦足以用于核酸提取及其后的擴增檢測。對于定量測定來說，對標本的收集要求更為精確。臨床基因擴增檢驗質量保證標本的類型和采集量標本的類型

7、: 血清(漿)、分泌物、痰、糞便采樣質量的評價血清(漿)標本:溶血、脂血等；分泌物、痰：評價內容包括細胞組成，所需類型細胞的數量和核酸總量。 評價方法：包括肉眼觀察,顯微鏡下觀察和化學分析等。 臨床基因擴增檢驗質量保證采樣質量的評價血清(漿)標本:溶血、脂血等；臨床基因擴增檢驗采樣及運輸容器 標本的采集材料如棉簽應為一次性使用；采樣及運輸容器應為密閉的一次性無菌裝置；采樣所用的防腐劑、抗凝劑及相關試劑材料不應對核酸擴增及檢測過程造成干擾。 臨床基因擴增檢驗質量保證采樣及運輸容器 標本的采集材料如棉簽應為一次性使用；臨床基因標本采集中的防污染 采集中要特別注意污染，防止混入操作者的頭發、表皮細胞

8、、痰液等； 如使用玻璃器皿，必須經高壓滅菌，以使可能存在的RNase失活。臨床基因擴增檢驗質量保證標本采集中的防污染 采集中要特別注意污染，防止混入操作者的頭標本保存 靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標本的保存對于核酸擴增測定的有效性極為重要。 使用GITC作為穩定劑保存標本，標本可在室溫下穩定約7天。 臨床基因擴增檢驗質量保證標本保存 靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，標本保存臨床體液標本長期保存應在-70下。 如為提取核酸后用于DNA擴增分析的樣本，可于10 mmol/L Tris,1mmol/L EDTA(pH7.58.0)緩沖液中4 下保存。 用于

9、RNA擴增分析的樣本，則應于上述緩沖液中-80或液氮下保存。 核酸的乙醇沉淀物則可于-20下保存。 臨床基因擴增檢驗質量保證標本保存臨床體液標本長期保存應在-70下。 臨床基因擴增檢標本運送 樣本一經采集，則應盡可能快的送至檢測實驗室。樣本中如加入了適當的穩定劑,如用于RNA測定加入GITC的血清(漿)樣本和用于DNA測定的EDTA抗凝血等,則可在室溫下運送或郵寄。實驗室應根據待測靶核酸的特性，對各種臨床樣本的運送條件作出相應的規定。臨床基因擴增檢驗質量保證標本運送 樣本一經采集，則應盡可能快的送至檢測實驗室。臨床基臨床基因擴增檢驗的室內質量控制測定前的質量控制核酸樣本的制備及其質量控制 統計

10、學質量控制質量控制的評價臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗的室內質量控制測定前的質量控制臨床基因擴增檢測定前質量控制實驗室設施、儀器設備及管理理想的試劑和操作方法 人員培訓臨床基因擴增檢驗質量保證測定前質量控制實驗室設施、儀器設備及管理臨床基因擴增檢驗質量實驗室設施、儀器設備及管理臨床基因擴增檢驗實驗室應有充分合理的空間、良好的照明和空調設備 ；實驗室儀器設備應保養良好，實驗用品要達到相應的要求。加樣器的校準？帶濾塞吸頭的使用及質檢？離心機？熱循環儀？水浴箱和/或恒溫干浴儀？酶標儀和洗板機？臨床基因擴增檢驗質量保證實驗室設施、儀器設備及管理臨床基因擴增檢驗實驗室應有充分合理理想的核酸擴增

11、實驗室設計A產物分析區空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴增區標本制備區試劑準備區臨床基因擴增檢驗質量保證理想的核酸擴增實驗室設計A產物分析區空氣流向空氣流向空氣流向產物分析區空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴增區標本制備區試劑準備區理想的核酸擴增實驗室設計B臨床基因擴增檢驗質量保證產物分析區空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間核酸擴增檢測實驗室設計的一般原則各區獨立注意風向因地制宜方便工作“十六字口訣”臨床基因擴增檢驗質量保證核酸擴增檢測實驗室設計的一般原則各區獨立“十六字口訣”臨床基門試劑準備區標本制備區擴增區

12、產物分析區外走廊門門門門試劑準備區標本制備區擴增及產物分析區外走廊門門門門AB臨床基因擴增檢驗質量保證門試劑準備區標本制備區擴增區產物分析區外走廊門門門門試劑準備試劑準備區標本制備區擴增及產物分析區門門門門空氣流向空氣流向空氣流向臨床基因擴增檢驗質量保證試劑準備區標本制備區擴增及產物分析區門門門門空氣流向空氣流向走廊走廊試劑準備區標本制備區擴增和產物分析區空氣流向空氣流向空氣流向其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室臨床基因擴增檢驗質量保證走廊走廊試劑準備區標本制備區擴增和產空氣流向空氣流向空氣流向門試劑準備區標本制備區擴增及產物分析區門門門空氣流向空氣流向+空

13、氣流向+走廊走廊試劑準備區標本制備區擴增和產物分析區空氣流向空氣流向+空氣流向+其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室其他實驗室空氣流向臨床基因擴增檢驗質量保證門試劑準備區標本制備區擴增及產物分析區門門門空氣流向空氣流向產物分析區空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間專用走廊工作流向擴增區標本制備區試劑準備區傳遞窗傳遞窗傳遞窗臨床基因擴增檢驗質量保證產物分析區空氣流向空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間緩沖間緩沖間“無基因”或“無核酸”概念的重要性臨床基因擴增檢驗質量保證“無基因”或“無核酸”概念的重要性臨床基因擴增檢驗質量保證基因擴增儀器設備的質控臨床基因擴增檢驗

14、質量保證基因擴增儀器設備的質控臨床基因擴增檢驗質量保證帶濾芯吸頭的使用及質檢首先制備一個含12%甘油及色素（如甲基橙）的水溶液，如果吸頭的最大體積為100l，則將加樣器吸取體積調至110120l，再套上吸頭后吸取上述有色液體。如果吸頭質量好，則有色液體不應出現在濾芯之上，否則說明濾芯不嚴。 臨床基因擴增檢驗質量保證帶濾芯吸頭的使用及質檢首先制備一個含12%甘油及色素（如甲核酸提取用離心管質檢離心管PCR抑制物質檢其他臨床基因擴增檢驗質量保證核酸提取用離心管質檢離心管PCR抑制物質檢臨床基因擴增檢驗質擴增儀孔間溫度的重復性和均一性的檢測方法一是使用一種熱電偶探針、微伏轉換器和自動圖示記錄儀組成擴

15、增加熱模塊孔內溫度監測記錄系統，當孔間溫度變異超出1時，其可測出來。具體做法是將裝有TE緩沖液并上加石蠟油的擴增反應管放置于擴增儀各孔中，熱電偶探針透過擴增反應管蓋插至緩沖液中，然后按程序進行一個常規的PCR擴增，加熱模塊如為96孔，則至少要測定12孔不同位置孔內的溫度，在整個擴增過程中，可移動熱電偶探針至上述不同孔中監測溫度，但每一孔內溫度監測至少要有一個擴增周期。 臨床基因擴增檢驗質量保證擴增儀孔間溫度的重復性和均一性的檢測方法一是使用一種熱電偶探擴增儀孔間溫度的重復性和均一性的檢測方法第二種方法并非直接測定孔內溫度，而是通過擴增功能來間接獲知孔間的均一性，即將加有一已知的含一定濃度的陽性

16、質控樣本的擴增反應管置于擴增儀各孔中按常規進行擴增檢測，觀察結果的一致性程度，如果有某一個或幾個孔結果有問題，則應確定這一個或幾個孔是否會重復性地得到假陰性結果，如果是，則表明相應孔的熱傳導有損壞。 臨床基因擴增檢驗質量保證擴增儀孔間溫度的重復性和均一性的檢測方法第二種方法并非直接測理想的試劑和操作方法 試劑盒的質檢定量測定的精密度是測定組成步驟的變異和的平方根(SD)= 上式中SDa、SDb、SDc是步驟a、b、c等（例如試劑準備、標本采集、核酸提取、擴增和產物檢測等）的標準差 臨床基因擴增檢驗質量保證理想的試劑和操作方法 試劑盒的質檢臨床基因擴增檢驗質量保證理想的試劑和操作方法改善測定精密

17、度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，應對試劑準備、標本收集、核酸提取、測定方法和儀器操作寫出“標準操作程序”(SOP) 臨床基因擴增檢驗質量保證理想的試劑和操作方法改善測定精密度的措施必須首先著重在最不精實驗室質量管理體系的建立質量手冊質量體系程序文件標準操作程序(SOP) (相關記錄表格、報告)臨床基因擴增檢驗質量保證實驗室質量管理體系的建立質量手冊臨床基因擴增檢驗質量保證存在問題SOP：形式，缺乏可操作性記錄：檢查型。多而雜。質控：形式或沒有分析：缺乏。臨床基因擴增檢驗質量保證存在問題SOP：形式，缺乏可操作性臨床基因擴增檢驗質量保證實驗室質量管理的內涵寫你所應做的做你所寫的記錄你已做

18、的分析你已做的臨床基因擴增檢驗質量保證實驗室質量管理的內涵寫你所應做的臨床基因擴增檢驗質量保證看得見的看不見的臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證好習慣是生產力習慣即命運思維習慣與行為習慣羅馬不是一天建成的(Rome was not built in a day )臨床基因擴增檢驗質量保證好習慣是生產力臨床基因擴增檢驗質量保證質量體系文件的三大特性法規性、唯一性和適用性。法規性:是指文件一旦制定完成并批準實施，就必須認真執行，按照相應的文件去完成日常檢驗工作，也就是前面所說的做你所寫的。

19、并且文件的修改不能隨意，只能按規定的程序進行。唯一性:則是指（1）一個實驗室只能有一個質量體系文件系統；（2）一項檢驗活動只能有唯一的操作程序；（3）一項規定只能有唯一的理解，不產生歧義；（4）只能使用文件的有效版本，無效版本在實驗室的任何地方都不能使用。適用性:是指質量體系文件無統一格式；無標準文本；怎么做怎么寫，切合實際，具有可操作性，不拘一格。所有文件的規定均應保證在臨床實際檢測工作中能完全做到。當發現文件有不適合情況時，則應立即按規定程序對文件進行修改。臨床基因擴增檢驗質量保證質量體系文件的三大特性法規性、唯一性和適用性。臨床基因擴增檢SOP等于試劑盒說明書嗎？臨床基因擴增檢驗質量保證

20、SOP等于試劑盒說明書嗎？臨床基因擴增檢驗質量保證怎樣編寫SOP？XXX單位XXX實驗室XXX標準操作程序編號：啟用日期：版本：第 頁 共 頁一目的：適用范圍：職責或責任人：（方法原理）（檢測設備和試劑）（所需的環境條件）操作步驟： 1 2 3 五、本操作程序變動程序：六、相關的文件七、相關的記錄表格和報告編寫人審核人批準人臨床基因擴增檢驗質量保證怎樣編寫SOP？XXX單位XXX編號：編寫人審核人批準人臨床SOP （5W和1H）誰來做(Who)： 責任人做什么(What)：適用范圍何時（When）：適用范圍何地（Where）：適用范圍為什么做（Why）：目的如何做（How）：操作步驟臨床基因擴

21、增檢驗質量保證SOP （5W和1H）誰來做(Who)： 責任人臨床基因擴增臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保

22、證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證 實驗記錄表格的設計臨床基因擴增檢驗質量保證 實驗記錄表格的設計臨床基因擴增檢驗質量保證存在問題表格種類繁多重復記錄表格無實用性，用于檢查的痕跡很重臨床基因擴增檢驗質

23、量保證存在問題表格種類繁多臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證記錄表格設計的基本原則信息充分簡單明了臨床標本的檢測信息能有機聯系起來融入LIS系統？臨床基因擴增檢驗質量保證記錄表格設計的基本原則信息充分臨床基因擴增檢驗質量保證 臨床PCR檢驗流程記錄表 檢驗日期 檢驗項目： 擴增儀中保存文件名： 使用說明：1本記錄表須嚴格遵循試劑準備區標本制備區擴增區（產物分析區）單一流向移動，嚴禁逆向移動。2各項工作執行后，在相應敘述前的“”內打“”。3本記錄表最后與相應的標本

24、接收記錄等歸檔保存于擴增區的專用文件柜內，以備查找。實驗前準備 試劑在有效期內 擴增儀、加樣器和溫度計在校準的有效期內 生物安全柜的濾膜在使用有效期內 消毒溶液在有效期內 洗眼器內無菌生理鹽水在有效期內 離心管、帶濾芯吸頭已經過質檢合格 操作者： 臨床基因擴增檢驗質量保證 臨床PCR檢驗流程記錄 試劑準備區（1區）實驗前 ： 打開通風設備 實驗臺面清潔（水或70%酒精擦拭） 冰箱溫度：冷藏室（28） ； 冷凍室（182） 實驗室溫度： （允許范圍：1030）；相對濕度： （允許范圍：30%80%）PCR試劑來源： （可直接列出有關廠家名稱） 批號：XXXXXXX 檢驗項目： 本次實驗用量： 人

25、份，剩余量： 人份。其他有關試劑配制： 按XXX（將有關SOP編號列出）SOP配制1%含氯消毒液 毫升； 按XXX（將有關SOP編號列出）SOP配制4NaOH溶液 毫升； 按XXX（將有關SOP編號列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯 毫升； 按XXX（將有關SOP編號列出）SOP配制 毫升； 其他： 儀器設備使用：離心機： 正常 不正常 振蕩器： 正常 不正常 超凈臺： 正常 不正常實驗后： 按XXX（將有關SOP編號列出）SOP清潔實驗室臺面、地面、加樣器和離心機，并進行紫外照射30分鐘以上。 按XXX（將有關SOP編號列出）SOP處理實驗廢棄物。 操作者： 臨床基因擴增檢驗質量保證 試劑

26、準備區（1區）臨床基 標本制備區（2區）實驗前： 打開通風設備 實驗臺面清潔（水或70%酒精擦拭） 冰箱（柜）溫度：冷藏室（28） ； 冷凍室（182） 實驗室溫度： （允許范圍：1030）；相對濕度： （允許范圍：30%70%）陽性室內質控物來源： 濃度及批號： 擴增位置： 陰性室內質控物來源： 批號： 擴增位置： 所取理的標本（對應標本接收的唯一編號）及擬擴增位置：191725 334149 2101826 3442503111927 3543514122028 3644525132129 3745536142230 3846 5471523313947 5581624324048 56核

27、酸提取及加樣過程：按XXX（列出編號）SOP進行。儀器設備使用： 生物安全柜： 正常 不正常 恒溫儀溫度校準： 離心機： 正常 不正常 振蕩器： 正常 不正常實驗后： 按XXX（將有關SOP編號列出）SOP清潔實驗室臺面、地面及儀器設備。 按XXX（將有關SOP編號列出）SOP處理實驗廢棄物。 操作者： 臨床基因擴增檢驗質量保證 標本制 擴增及產物分析區（3區）實驗前 打開通風設備 實驗臺面清潔（水或70%酒精擦拭） 實驗室溫度： （允許范圍：1030）；相對濕度： （允許范圍：30%70%）擴增儀操作： 開機自檢及運行正常 按XXX（列出編號）SOP進行編程、參數設定標準曲線計算值：Slop

28、e值： （ ）Intercept值： （ ） r值： （ ）室內質控結果：結果： 填寫室內質控記錄、描質控圖 是否失控：否 是 實驗結果：見所附擴增儀打印結果實驗后： 按XXX（將有關SOP編號列出）SOP清潔實驗室臺面、地面及儀器設備。 按XXX（將有關SOP編號列出）SOP處理實驗廢棄物。 操作者： 失控原因及分析：（失控判斷標準及原因分析按XXXSOP進行）臨床基因擴增檢驗質量保證 擴增及產物分析區另外兩個存在較多問題的檔案記錄人員的技術檔案：一人一個檔案（包括個人基本情況；學歷、學位、任職資格、培訓證、上崗證、榮譽證書等的復印件；論文、著作、成果等的目錄和必要的證明文件復印件；培訓考核

29、的記錄等。）儀器設備的技術檔案：一臺儀器一個檔案（包括儀器基本情況，如儀器設備名稱、型號、序列號、生產廠家、購置日期、啟用日期、目前放置地點、責任人等；儀器校準的記錄（本次校準日期和下次應校準的日期、校準證書或數據）；維修維護的歷史記錄；儀器使用說明書、注冊證等的復印件；合格證書；配備的小配件如保險絲、燈泡等）臨床基因擴增檢驗質量保證另外兩個存在較多問題的檔案記錄人員的技術檔案：一人一個檔案（人員培訓 方法原理核酸擴增檢測的關鍵環節儀器設備使用、維護和校準結果的分析、報告及進一步處理質控的分析知其然又知其所以然。 臨床基因擴增檢驗質量保證人員培訓 方法原理臨床基因擴增檢驗質量保證實驗室人員內部

30、培訓的重要性外部培訓提供的是“理念”，是被動的，更多的是“學習”內部培訓是主動的，源于實踐，高于實踐，更多的是“思考”臨床基因擴增檢驗質量保證實驗室人員內部培訓的重要性臨床基因擴增檢驗質量保證人員培訓臨床基因擴增檢驗質量保證人員培訓臨床基因擴增檢驗質量保證如何培訓的舉例：新購儀器設備的操作培訓在儀器購買合同中，加入培訓的內容：廠家提供培訓計劃培訓計劃應包括：培訓教材（含具體培訓內容，如儀器操作及維護校準的SOP、安全性）、培訓者資質證明、培訓所需時間與次數、需要接受培訓方準備的條件（人員、用具和場地等）、培訓合格的考核方法及判斷標準等。培訓后保存所有有關記錄。臨床基因擴增檢驗質量保證如何培訓的

31、舉例：新購儀器設備的操作培訓在儀器購買合同中，加入核酸樣本的制備、擴增檢測及其質量控制一般核酸提取試劑促使靶核酸從細胞內釋出的原理核酸的分離純化靶核酸提取的質量 臨床標本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質 核酸樣本制備及擴增檢測的質控 產物檢測的質控 臨床基因擴增檢驗質量保證核酸樣本的制備、擴增檢測及其質量控制一般核酸提取試劑促使靶核酸的分離純化 核酸的分離純化就是要將蛋白、脂類等干擾核酸擴增的物質去除。 經典方法硅吸附法對于商品核酸提取試劑盒，臨床實驗室在使用前，必須對其核酸提取純度和效率進行評價。 臨床基因擴增檢驗質量保證核酸的分離純化 核酸的分離純化就是要將蛋白、脂類等干擾核酸擴臨床標

32、本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質 臨床標本中：血清或血漿中的血紅素及其代謝產物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份 、降解靶核酸的核酸酶等。核酸提取中：許多試劑如乙二胺四乙酸(EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機溶劑 。 臨床基因擴增檢驗質量保證臨床標本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質 臨床標本中：血對臨床標本中可能存在的抑制/干擾物的質控措施質控措施： 采用內質控（internal control, IC）（通常稱為內標）的方法 內標有兩種,即競爭性的和非競爭性的內標。 臨床基因擴增檢驗質量保證對臨床標本中可能存在的

33、抑制/干擾物的質控措施質控措施： 采核酸提取及擴增有效性的質控 已知弱陽性質控樣本（基質與待測標本相同）：至少帶1份，其最后的檢測結果，應是核酸提取和擴增檢測的有效性的綜合反映。已知陰性質控樣本（基質與待測標本相同）：至少帶1份，擴增測定的結果可以判斷核酸提取過程中是否發生污染。 臨床基因擴增檢驗質量保證核酸提取及擴增有效性的質控 已知弱陽性質控樣本（基質與待測標室內質控方法非統計學方法統計質控方法臨床基因擴增檢驗質量保證室內質控方法臨床基因擴增檢驗質量保證非統計學方法在檢測血液標本的同時，檢測一定數量（與臨床樣本的數量相適應）的已知弱陽性（與試劑宣稱的測定下限相適應）和陰性的質控樣本檢測有效

34、的質控判斷方法：陽性檢測為陽性（反應性），陰性檢測為陰性（非反應性）。臨床基因擴增檢驗質量保證非統計學方法在檢測血液標本的同時，檢測一定數量（與臨床樣本的統計學質量控制 理想的室內質控樣本的條件測定中質控樣本的設置、數量及排列順序 統計學質控的特點 統計質控方法臨床基因擴增檢驗質量保證統計學質量控制 理想的室內質控樣本的條件臨床基因擴增檢驗質量理想的室內質控樣本的條件基質與待測樣本一致；所含待測物濃度接近試驗的決定性水平；穩定；靶值或預期結果已定；無已知的生物傳染危險性；單批可大量獲得；價廉臨床基因擴增檢驗質量保證理想的室內質控樣本的條件基質與待測樣本一致；臨床基因擴增檢驗測定中質控樣本的設置

35、、數量及排列順序標本量不大，如少于30份，定性測定有1份接近cut-off的弱陽性和1份陰性質控樣本應可以滿足要求。樣本量大，則可按比例增加。定量測定則要根據試驗的測定范圍，采用高、中、低三種濃度的質控樣本。核酸提取時，質控樣本要隨機放在臨床標本中間。至于在測定中的排列順序，可排于標準品或校準品之后，臨床樣本之前。 臨床基因擴增檢驗質量保證測定中質控樣本的設置、數量及排列順序標本量不大，如少于30份臨床基因擴增檢驗室內質控的獨特性即監測污染發生的陰性質控的設置。 可包括1份陰性原血清樣本、1份在標本核酸提取過程中帶入的一個空管和僅含擴增反應混合液的管。 臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗

36、室內質控的獨特性即監測污染發生的陰性質控的設陰性原血清質控樣本的功能 監測實驗室的以前擴增產物的污染； 由實驗操作所致的標本間的交叉污染；擴增反應試劑的污染。 臨床基因擴增檢驗質量保證陰性原血清質控樣本的功能 監測實驗室的以前擴增產物的污染； 在標本核酸提取過程中帶入的一個空管的功能監測實驗操作過程中的實驗室污染和標本間交叉污染.不能取代原血清陰性樣本。臨床基因擴增檢驗質量保證在標本核酸提取過程中帶入的一個空管的功能臨床基因擴增檢驗質量僅含擴增反應混合液的管的功能監測擴增試劑是否發生污染，具有較強的污染鑒別性。臨床基因擴增檢驗質量保證僅含擴增反應混合液的管的功能監測擴增試劑是否發生污染，具有較

37、實驗室是否發生污染的鑒別可將一個或多個空管打開靜置于標本制備區3060分鐘，然后加入擴增反應混合液同時以水替代核酸樣本擴增，如為陽性，而上述僅含擴增反應混合液的管為陰性，則說明實驗室以前擴增產物的存在。 臨床基因擴增檢驗質量保證實驗室是否發生污染的鑒別可將一個或多個空管打開靜置于標本制備統計學質控的特點 檢驗誤差有兩類，一是系統誤差，一是隨機誤差。系統誤差通常表現為質控物測定均值的漂移，是由操作者所使用的儀器設備、試劑、標準品或校準物出現問題而造成的，這種誤差可以通過前述的措施方法加以控制，是可以排除的。隨機誤差則表現為測定SD的增大，主要是由實驗操作人員的操作等隨機因素所致，其出現難以完全避

38、免和控制。臨床基因擴增檢驗質量保證統計學質控的特點 檢驗誤差有兩類，一是系統誤差，一是隨機誤差統計學質控的功能統計學質控的功能就是發現誤差的產生及分析誤差產生的原因，采取措施予以避免。開展統計質量控制前，應將可以控制的誤差產生因素盡可能地加以控制，這不但是做好室內質控的前提，也是保證常規檢驗工作質量的先決條件。 臨床基因擴增檢驗質量保證統計學質控的功能統計學質控的功能就是發現誤差的產生及分析誤差統計質控方法 基線測定質控規則的表達方式及定義 Levey-Jennings質控圖方法 Levey-Jennings質控圖結合Westgard多規則質控方法 累積和 (CUSUM) 質控方法 “即刻法”

39、質控方法 臨床基因擴增檢驗質量保證統計質控方法 基線測定臨床基因擴增檢驗質量保證基線測定最佳條件下的變異（Optimal conditions variance, OCV）和常規條件下的變異（Routine conditions variance, RCV）； 當RCV與OCV接近，或小于2 OCV時，則RCV是可以接受的。以上為批間變異。批內變異的測定；室內質控物的測定準確度的評價。 臨床基因擴增檢驗質量保證基線測定最佳條件下的變異（Optimal condition臨床基因擴增檢驗IQC統計計算問題可使用質控樣本擴增后的IU/ml來進行統計計算，也可用其對數值進行。由于基因擴增結果的原始數

40、據通常很大，故使用其對數值來進行質控統計分析可能要更為方便一些。 臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗IQC統計計算問題可使用質控樣本擴增后的I質控規則的表達方式及定義 質控規則的表達方式 質控規則的功能 常用質控規則的符號及定義 臨床基因擴增檢驗質量保證質控規則的表達方式及定義 質控規則的表達方式 臨床基因擴增檢質控規則的表達方式通常質控規則以符號AL來表示，其中A為質控測定中超出質量控制限的測定值的個數，L為控制限，通常用均值或均值13SD來表示。 當質控測定值超出控制限L時，即可將該批測定判為失控。 常用的13S質控規則，其中1為原式中的A，3s為原式中的L，表示均值3s，其確切的含

41、義為：在質控測定值中，如果有一個測定值超出均值3s范圍，即可將該批測定判為失控。 臨床基因擴增檢驗質量保證質控規則的表達方式通常質控規則以符號AL來表示，其中A為質控質控規則的功能 簡單地說就是用于判斷測定批的失控還是在控 。臨床基因擴增檢驗質量保證質控規則的功能 簡單地說就是用于判斷測定批的失控還是在控 。常用質控規則的符號及定義 符 號 定 義12S 一個質控測定值超出2s控制限。13S 一個質控測定值超出3s控制限。22S 兩個連續的質控測定值同時超出+2s或2s控制限。R4S 同一批測定中，兩個不同濃度質控物的測定值之間的 差值超出4s控制限。41S 四個連續的質控測定值同時超出+1s

42、或1s控制限。7T 七個連續的質控測定值呈現一個向上或向下的趨勢變 化。10X 十個連續的質控測定值同時處于均值（X）的同一側。臨床基因擴增檢驗質量保證常用質控規則的符號及定義 符 號 Levey-Jennings質控圖方法 也稱Shewhart質控圖，是由美國的Shewhart 于1924年首先提出，并用于工業產品的質量控制。二十世紀五十年代初，Levey-Jennings將其引入臨床檢驗的質量控制 。經Henry和Segalove的改良，即為目前常用的Levey-Jennings質控圖。臨床基因擴增檢驗質量保證Levey-Jennings質控圖方法 也稱ShewhartLevey-Jenn

43、ings質控圖臨床基因擴增檢驗質量保證Levey-Jennings質控圖臨床基因擴增檢驗質量保證Levey-Jennings質控圖基本的統計學含義穩定條件下，在20個IQC結果中不應有多于1個結果超過2SD（95.5%可信限）限度；在1000個測定結果中超過3SD（99.7%可信限）的結果不多于3個。如以3s為失控限，假失控的概率為0.3%。 臨床基因擴增檢驗質量保證Levey-Jennings質控圖基本的統計學含義穩定條件“假陽性”的統計學室內質控方法基于日常檢驗的陽性率比值(呈正態分布)直接概率計算方法（不呈正態分布）臨床基因擴增檢驗質量保證“假陽性”的統計學室內質控方法基于日常檢驗的陽性

44、率比值(呈正“即刻”質控方法 “即刻法” 的實質是一種統計學方法,即Grubs異常值取舍法 只要有3個以上的數據即可決定是否有異常值的存在。 臨床基因擴增檢驗質量保證“即刻”質控方法 “即刻法” 的實質是一種統計學方法,即Gr室內質控數據的評價 IQC為一集體活動，除實際測定者外，還應有另外一人對測定數據進行質檢。不能將IQC作為一個監察方法，當發現一次測定未達到質量標準時，應以建設性的而非批評的方式去探查失控的原因。除了將IQC數據作為日常質控外，還應定期評價累積數據以監測在測定操作中的長期變化趨勢。評價應定期進行。臨床基因擴增檢驗質量保證室內質控數據的評價 IQC為一集體活動，除實際測定者

45、外，還應分析你已做的每次實驗結果的分析 表象與真象多次實驗結果的綜合分析 趨勢的內在含義儀器設備的使用情況分析 維護與校準周期的有效性臨床基因擴增檢驗質量保證分析你已做的每次實驗結果的分析臨床基因擴增檢驗質量保證弱陽性質控樣本常見的失控原因 核酸提取中的隨機誤差。如核酸提取中的丟失、有機溶劑的去除不徹底、標本中擴增抑制物的殘留等。 儀器的問題。如擴增儀孔間溫度的不均一性、孔內溫度與所示溫度的不一致性等。 試劑的問題。如Taq酶和/或逆轉錄酶的失活、探針的純度及標記效率和核酸提取試劑的效率等。 臨床基因擴增檢驗質量保證弱陽性質控樣本常見的失控原因 核酸提取中的隨機誤差。如核酸提陽性質控樣本測定結

46、果偏低或為陰性結果偏低陰性臨床標本中無強陽性臨床標本中有較強陽性臨床標本中有陽性臨床標本全為陰性觀察臨床標本情況所用離心管含抑制物Taq酶活性降低核酸提取試劑效率低更換進口離心管更換Taq酶再檢測更換核酸提取試劑所有標本重新檢測核酸提取中靶核酸丟失核酸提取中抑 抑物殘留核酸提取試劑混入擴增儀孔間溫度差異隨機誤差檢測質控樣本及35份已知陽性樣本質控樣本測定正常且陽性樣本有些值增加質控及已知陽性樣本測定仍異常按系統誤差途徑分析重新提取或已知濃度DNA在同一孔內擴增結果正常結果仍低進行擴增儀孔溫度校準后再檢測Taq酶或逆轉錄酶失活臨床基因擴增檢驗質量保證陽性質控樣本測定結果偏低或為陰性結果偏低陰性臨

47、床標本中無強陽陰性質控樣本的失控原因 主要為擴增產物的“污染”和/或臨床標本的核酸提取過程中發生的標本間的交叉 “污染” 臨床基因擴增檢驗質量保證陰性質控樣本的失控原因 主要為擴增產物的“污染”和/或臨床標陰性質控樣本測定為陽性臨床標本亦全為陽性臨床標本中有陽性也有陰性擴增產物“污染”試劑“污染”同時檢測的標本情況擴增產物輕度“污染”標本間交叉“污染”35空管室內靜置58份水樣本檢測試劑直接擴增檢測驗證驗證58份水樣本檢測暫停日常檢驗，實驗室清潔、通風更換試劑措施有陽性，則確認有實驗室“污染”無陽性，說明為標本交叉“污染”改善操作措施臨床基因擴增檢驗質量保證陰性質控樣本測定為陽性臨床標本亦全為

48、陽性臨床標本中有陽性也有 一個臨床PCR實驗室對全年室內質控結果的分析舉例臨床基因擴增檢驗質量保證 一個臨床PCR實驗室對全年室內質控結果的分析舉例臨床基因臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證臨床基因擴增檢驗質量保證IQC的局限性IQC可能測不出的誤差 測定前 測定中 測定后 樣本鑒定不對 樣本吸取不對 結果記錄錯誤 樣本貯存中變質 試劑加入不對此類誤差的發生率在不同的實驗室有所不同，一般要求小于0.1%，且應均衡地分布于測定前、測定中和測定后的不同階段。 臨床基因擴增檢驗質量保證IQC的局限性IQC可能測不出的誤差臨床基因擴增檢驗質量保證影響臨床基因擴增檢驗結果的最關鍵因素產物“污染”（Carry-over)測定人員的操作：標本混淆；貼錯標簽、核酸提取等試劑臨床基因擴增檢驗質量保證影響臨床基因擴增檢驗結果的最關鍵因素產物“污染”（Carry避免基因擴增檢驗假陽性結果的措施嚴格的實驗室分區；使用帶“濾芯”的吸頭；設立“陰性”質控（與標本同