1、2021.03.07*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編2021.03.07*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編鄰二貌務(wù)憲光度法測(cè)建薇量鐵歐陽(yáng)光明(2021.03.07)二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康腒 學(xué)會(huì)吸收曲線及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，了解分光光度法的基本原理。2、掌握用鄰二氮菲分光光度法測(cè)定微量鐵的方法原理。3721型分光光度計(jì)的正確使用，了解其工作原理。4、 學(xué)會(huì)數(shù)據(jù)處理的基本方法。5三、實(shí)驗(yàn)原理根據(jù)朗伯-比耳定律：A=wbc,當(dāng)入射光波長(zhǎng)入及光程 b 定Ac成 正比。只Ac為橫坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲 線，測(cè)出試液的吸光相關(guān)的回歸分析軟件，將數(shù)據(jù)輸入 計(jì)算機(jī)，得到相應(yīng)的分析結(jié)果。用分光光度法測(cè)定試樣中的微量鐵，可選用顯色劑鄰二氮菲 （又稱(chēng)鄰菲羅麻pH2-9的

2、溶液中，鄰二氮菲和二價(jià)鐵離子接合 Th成紅色配合物：lgK穩(wěn)=21.3,摩爾吸光系數(shù)5101.1x104Lmol-lcm-1,Fe3+能與鄰二氮菲Th31 配合物，呈淡藍(lán)色，lgK*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編2021.03.07*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編2021.03.07穩(wěn)=14.1。所以在加入顯色劑之前，應(yīng)用鹽酸輕胺(NH2OH HC1)將 Fe3+Fc2+,其反映式如下：2Fe3+2NH2OHHC12Fe2+N2+H2O+4H+2C1-測(cè)定時(shí)酸度高，反映進(jìn)行較慢；酸度太低，則離子易水解。本 實(shí)驗(yàn)采用HAc-NaAcpH=5.0,為判斷待測(cè)溶液中鐵元素含量，需首先繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo) 準(zhǔn)曲線中不同濃度鐵離子引起

3、的吸光度的變化，關(guān)于應(yīng)實(shí)測(cè)樣本引起 的吸光度，計(jì)算樣本中鐵離子濃度。40Sn2+、A13+、 62+、Mg2+、Zn2+、SiO32-;20倍的 Cr3+、Mn2+.VO3-、 PO43-;5倍的Co2+、Ni2+、Cu2+-Bi3+C2+、Hg2+、Zn2+.Ag+等離子與鄰二氮菲作用Th成沉淀干擾測(cè) 定四、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑：721型分光光度計(jì)、酸度計(jì)、50ml比色管、吸量管(ImL.2mL、5mL、10 mL).比色 K 洗耳球。l.lxl0-3mol L-l鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液、lOOug-ml-1胺、醋酸鈉.0.15%鄰二氮菲水溶液。五、實(shí)驗(yàn)步()準(zhǔn)備工作打開(kāi)儀器電源開(kāi)關(guān)，預(yù)熱，調(diào)節(jié)儀器。10,的

4、透射光I,T,T A 值1、吸收曲線的繪制和測(cè)量波長(zhǎng)的選擇用吸量管吸取2.00 mLl.0 xl0-3mol.L-l50 mL比色管中，1.00 mL 10%2.00 mL0.15%5.0mLNaAc 1 cm 比色皿，采用試劑440-560 nm10 nm測(cè)量一次吸光度，以波長(zhǎng)為max 為測(cè)定波長(zhǎng)。2、顯色劑條件的選擇（顯色劑用量）6 2.00mL 1.0 xl0-3mol L-l 鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液 和l.OOmL 10%0.10, 0.50, 1.00, 2.00, 3.00 4.00mL0.15%鄰二氮菲溶液，5.0 mL NaAc 溶液，以水稀釋至刻度，搖勻。在光 度計(jì)上用1cm比色皿，采用

5、試劑溶液為參比溶液，測(cè)吸光度。以鄰二氮菲體積為 橫坐標(biāo)， 吸光度為縱坐標(biāo)，繪制吸光度試劑用量曲線，從而確定最佳顯色劑用 量。3.pH的確定8 50 mL 2mL 1.00 x10-3mol/L-1 mL 10%2 min,再加入特定體積2021.03.07*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編2021.03.07*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編（2中探究出的最適量）0.15% L0.0、 0.20、0.50、1.00、1.50、2.00、3.00mL0.15%NaAclcni的比色皿，選擇適宜（T”所決定的）參比，訣別測(cè)其吸光度。在坐標(biāo)紙上以加入的 NaAc溶液體積數(shù)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的ApH pH范圍。4、 顯色時(shí)間及有色溶液的穩(wěn)定

6、性2mL1.00 xl0-3mol/L-l50mL1 mL（2mL 鄰二氮菲溶液，加入特定體積的（3中探究出的）NaAc1mL 510nm之間測(cè)定吸A-t 間。5、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作650mL10mL0.000.20.0.40、0.60、0.80、1.00niL100ngniL-l1mL10%鹽酸徑月安，搖勻（原則上每加入一種試劑都要搖勻）2mL0.15%的鄰二氮菲溶液和特1mobL-lNaAc（4中探）510nmlcm定各溶液的吸光度。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。*歐陽(yáng)光*創(chuàng)編2021.03.07*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編2021.03.07*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編2021.03.076、試液含鐵量的測(cè)定準(zhǔn)確吸取適量試液（如

7、水樣或工業(yè)鹽酸、石灰石樣本制備液等） 代替標(biāo)準(zhǔn)溶液， 其他步驟同上，平行三次測(cè)定其吸光度。記錄計(jì)算 機(jī)顯示的含鐵量，計(jì)算試液中鐵的含量（mg-L-1表示）。六、數(shù)據(jù)處理1、鄰二氮菲-Fc2+吸收曲線的繪制（1）數(shù)據(jù)紀(jì)錄不同波長(zhǎng)吸光度4404454504554604654704754800.3400.3530.36403770.3950.4150.4330.4470.4544854904955005055105155205250.4570.4600.4670.4770.4900.4970.4910.4680.4285305355405455505555600.3740.3100.2460.188

8、0.1400040.077波長(zhǎng)A/mn吸光度 波長(zhǎng)波長(zhǎng)A/mn吸光度 波長(zhǎng)A/mn吸光度 波長(zhǎng)VmnA由圖可知，最大吸收波長(zhǎng)入 max= 510nm2、顯色劑用量的測(cè)定鄰二氮菲的體積（ml）000.501.002.003.00鄰二氮菲的體積（ml）000.501.002.003.004.00A0.0480.2820.4970.5000.4910.485據(jù)上面數(shù)據(jù)，作得標(biāo)準(zhǔn)曲線圖如下：1-00mL0.15%鄰二氮菲溶液。2021.03.07*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編2021.03.072021.03.07*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編2021.03.07*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編2021.03.07pH與吸光度的

9、關(guān)系濃度濃度ug/ml00.20.511.522.5Abs0.0060.060.2310.420.4060.4020395NaAc1.00mL。顯色時(shí)間及有色溶液的穩(wěn)定性tmin03691215A0.4800.4770.4780.4790.4800.47912分鐘后鐵離子與鄰二氮菲基本完全接合。2、工業(yè)鹽酸中鐵含量的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作試液中鐵含量與吸光度的關(guān)系VlOOug/mLVlOOug/mLmLA0.000.000.600.2180.800.2891.000.3551.200.4301.400.494試液含鐵量的測(cè)定測(cè)試次數(shù)123吸光度 A0.4820.4830.483鐵的濃度/ug/mL

103574鐵水樣濃度的平均值/ug/mL鐵水樣濃度的平均值/ug/mL13564相關(guān)于偏差0.095%0.05%0.05%六.實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編2021.03.072021.03.07*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編2021.03.07*歐陽(yáng)光明*創(chuàng)編1、不能顛倒各種試劑的加入順序。2AT所關(guān)于應(yīng)的數(shù)據(jù)。透射比與吸光度的 關(guān)系為:A=log(I0/I)=log(l/T);3、最佳波長(zhǎng)選擇好后不要再改變。4、每次測(cè)定前要注意調(diào)滿刻度。七、思考題1、鄰二氮菲分光光度法測(cè)定微量鐵時(shí)為何要加入鹽酸輕胺溶 液？Fe2+Fe3+,Fe2+與鄰二氮菲(phen) 能Th成穩(wěn)定的桔紅色配合物Fe(phen)32+lgK穩(wěn)=21.3,摩爾吸光系數(shù)510=l.lxl04L mol-l cm-l,Fe3+能與鄰二氮菲 Th31配合物，呈淡藍(lán)色，lgK穩(wěn)=14.1以在加入顯色劑之 前，應(yīng)用鹽酸輕胺(NH2OH.HC1)Fe3+Fe2+,然后，進(jìn)行 鐵的總量的測(cè)定。2.參比溶液的作用是什么？在本實(shí)驗(yàn)中可否用蒸徭水作參 比？答：參比溶液的作用是扣除背景干