1、乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗(yàn)證PPT課件-醫(yī)學(xué)資料乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗(yàn)證PPT課件-醫(yī)學(xué)課程要求掌握： 乙肝表面抗原的ELISA法定量檢測(cè)方法； ELISA法方法學(xué)評(píng)價(jià)的方法。熟悉： 定量檢測(cè)的酶標(biāo)儀操作要領(lǐng)； 各種緩沖液的配制。了解： ELISA檢測(cè)中的影響因素和注意事項(xiàng)。課程要求掌握：試驗(yàn)?zāi)康?進(jìn)行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的方法學(xué)驗(yàn)證。試驗(yàn)?zāi)康?進(jìn)行乙肝表面抗原ELISA法定量分析的方法學(xué)驗(yàn)證。 試驗(yàn)材料 1 試劑盒乙肝表面抗原ELISA法定量分析試劑盒，福州藍(lán)圖生物工程有限公司出品。2 儀器及酶標(biāo)板酶標(biāo)儀：Bio-Rad 680 ；洗板機(jī)：Bi

2、o-Rad 1575；超純水系統(tǒng)：Millipore Elix ；電熱恒溫培養(yǎng)箱(DNP-9052):上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。 試驗(yàn)材料 1 試劑盒3 溶液配制0.01M pH7.4的PBS緩沖液： 稱取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L即可。質(zhì)控品： 用PBS緩沖液將標(biāo)準(zhǔn)品配制成6、3、1.5ng/ml三個(gè)質(zhì)控品，每質(zhì)控品1ml。3 溶液配制試驗(yàn)方法 1 標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度的配制用PBS緩沖液將標(biāo)準(zhǔn)品配制成8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.062

3、5ng/ml。試驗(yàn)方法 1 標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度的配制2 測(cè)定方法 設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品及空白分配方案；取出試劑盒中已包被酶標(biāo)板，取出板條，按需要重新配制；在相應(yīng)孔中加入系列標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品及空白對(duì)照，每孔50ul；37溫育30min，洗板4次；加入酶標(biāo)抗體，生物素二抗，50 ul/孔；37溫育30min，洗板4次；加入A、B液,50 ul/孔，37溫育15分鐘。加入終止液，50 ul/孔。2 測(cè)定方法 3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作及結(jié)果計(jì)算酶標(biāo)板放入酶標(biāo)儀，蓋上蓋子；在電腦上打開Microplate Manager 5.2軟件選擇450nm波長（參照波長630nm），設(shè)置LAYOUT和報(bào)告模式，測(cè)定各孔吸收值；輸

4、入標(biāo)準(zhǔn)品各濃度值，以雙對(duì)數(shù)法制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲取各孔的濃度值，打印標(biāo)準(zhǔn)曲線圖和計(jì)算結(jié)果。3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作及結(jié)果計(jì)算ELISA法標(biāo)準(zhǔn)曲線示意圖ELISA法標(biāo)準(zhǔn)曲線示意圖4 準(zhǔn)確度（回收率）計(jì)算 按示例表1樣式列表并計(jì)算回收率。4 準(zhǔn)確度（回收率）計(jì)算 乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗(yàn)證PPT課件-醫(yī)學(xué)資料5 按示例表列表并計(jì)算精密度 。5 按示例表列表并計(jì)算精密度 。板內(nèi)精密度板內(nèi)精密度板間精密度板間精密度6 檢測(cè)限（LOD）計(jì)算：取空白孔的OD值的均數(shù)加2倍標(biāo)準(zhǔn)差。6 檢測(cè)限（LOD）計(jì)算：注意事項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品配制要準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)各個(gè)環(huán)節(jié)都很重要，每步操作都要認(rèn)真。注意事項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品配制要準(zhǔn)確。討 論1.實(shí)驗(yàn)背景介紹（目的、采用的方法、檢測(cè)原理、方法學(xué)驗(yàn)證的基本知識(shí)介紹）2.本實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)及實(shí)施特點(diǎn)3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析4.臨床應(yīng)用及分析討 論1.實(shí)驗(yàn)背景介紹（目的、采用的方法、檢測(cè)原理、方法學(xué)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)報(bào)