1、微生物與發酵工藝實訓一顯微鏡的使用和微生物測微技術一、實驗目的 1. 練習和掌握顯微鏡的使用方法（低倍鏡、高倍鏡、油鏡）。 2. 掌握使用測微尺測定微生物大小的方法，熟悉微生物大小的一般概念。二、實驗原理（一）顯微鏡的結構、光學原理和操作方法 1.顯微鏡分機械系統和光學系統兩部分 機械系統包括：鏡筒、轉換器、載物臺、鏡臂、鏡座、粗準焦螺旋、細準焦螺旋。 光學系統包括：目鏡、物鏡、聚光器、光源、濾光片、虹彩光圈。雙目光學顯微鏡二、實驗原理（二）顯微鏡的光學原理 1.成像原理 光路：光源虹彩光圈聚光鏡通光孔標本（一定要透明）物鏡鏡筒目鏡眼。二、實驗原理(三)油鏡工作原理 香柏油的折光率講義與玻璃

2、片折光率（1.52）相近似，因此在物鏡（玻璃）與標本載片（玻璃）之間加入香柏油可以使光線不致因從一個介質（玻璃）進入到另一折光率不同的介質即空氣（折光率為1.0）而引起部分散射，造成亮度不夠而觀察不清，這對透鏡彎曲度較大，直徑較小（通過光線亦較小）的油鏡頭是特別重要的。 做法是在用油鏡觀察時要把油鏡頭（100）浸入香柏油中。二、實驗原理 1.物測微尺 物測微尺是一厚玻片，中央有一圓形蓋玻片，中央刻有1mm長的標尺，等分為100格，每格100m，用以標定目測微尺，在不同放大倍數下每格的實際長度。二、實驗原理(四)測微技術二、實驗原理 物測微尺 目測微尺 2.目測微尺的標定 將目測微尺裝入目鏡的隔

3、板上，使刻度朝下；把物測微尺放在載物臺上使刻度朝上。用低倍鏡找到目測微尺的刻度，移動物測微尺和目測微尺，使兩者的第一條刻度線重合，順著刻度找到另一條重合刻度線。計算在該放大倍數下目測微尺每個小格的實際長度。 目測微尺每小格長度(m)= 二、實驗原理用物測微尺標定目測微尺二、實驗原理1.材料 枯草芽孢染色涂片。 金黃色葡萄球菌涂片。 酵母菌染色涂片。2.用具：顯微鏡、二甲苯、香柏油、鏡頭紙、物測微尺、目測微尺。三、實驗材料和用具（一）顯微鏡的使用 1.取鏡和安放 右手握住鏡臂，左手托住鏡座。 把顯微鏡放在水平的實驗臺上，略偏左（顯微鏡放在距實驗臺邊緣7厘米左右處）。 四、實驗方法2.低倍鏡的操作

4、 置顯微鏡于固定的桌上，接通電源，打開光源。 將標本片放在載物臺上，是觀察的目的物處于圓孔的正中央。 將粗準焦螺旋向下旋轉，眼睛在測向注視物鏡，防止物鏡和載玻片相碰。 張開雙眼向物鏡里觀察，如果見到目的物，但不十分清楚，可用細準焦螺旋，至目的物清晰為止。注意觀察時兩眼應同時睜開。使用單筒顯微鏡，應習慣用左眼觀察，以便繪圖。四、實驗方法 3.高倍鏡的操作 使用高倍鏡前，必須先用低倍鏡觀察，發現目的物后將它移至視野正中處。 旋動轉換器換高倍鏡。如果高倍鏡觸及載玻片立即停止旋動，這說明原來低倍鏡并沒有調準，目的物并沒有真正找到，必須用低倍鏡重新調節。如果高倍鏡下觀察目的物有點模糊，調節細準焦螺旋，直

5、到視野清晰。調節細準焦螺旋時要注意旋轉方向與載物臺上升或下降的關系，防止鏡頭與載玻片強力接觸，損壞鏡頭或載玻片。四、實驗方法 4.油鏡的操作 如果用高倍鏡目的物未能看清，可用油鏡。先用低倍鏡和高倍鏡檢查標本片，將目的物移到視野正中。 在載玻片上滴一滴香柏油（或液體石蠟），將油鏡移至正中使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片。用細準焦螺旋微微向上調（切忌不用粗準焦螺旋）即可。 油鏡觀察完畢，用油鏡紙將鏡頭上的油揩凈，另用擦鏡紙蘸少許二甲苯揩拭鏡頭，再用擦鏡紙揩干。四、實驗方法5.顯微鏡使用注意事項.顯微鏡應置于平坦的桌面上。 .將標本片夾在顯微鏡載物臺的十字夾中，注意要正面向上。.先用低倍鏡再用高倍

6、鏡觀察尋找目的物，此時要控制視野不能太亮，注意區別鏡頭上的灰塵和目的物。.在標本中央滴加一小滴香柏油，從鏡筒側面觀察，將油鏡（100）輕輕旋下，使它浸在香柏油內。切勿猛烈的將鏡頭壓在標本片上，防止損壞物鏡！ 四、實驗方法.將眼睛移至目鏡，一邊觀察一邊慢慢旋動粗準焦螺旋，將載物臺上提。當見到物象時，再用細準焦螺旋調至圖像清晰。對于單目顯微鏡，使用油鏡時要將聚光器盡量上升，虹彩光圈放大。 .注意在旋動粗準焦螺旋時，必須特別小心。決不能在觀察時將載物臺很快提升，以免損傷螺旋。.假如用油鏡時一再看不清目的物，可驗看油中是否存在氣泡。如存在氣泡，可將鏡頭及標本片上的油擦去，重新滴加。四、實驗方法.觀察完

7、畢后，下降載物臺，取下標本片，用干凈的擦鏡紙蘸少量的二甲苯，輕揩去載玻片上的香柏油后，立即用干擦鏡紙揩干。.收存顯微鏡時，應將最短的鏡頭對準透光孔，或將物鏡的長鏡頭轉成“八”字式，使兩個鏡頭同時擱在載物臺上。切勿將長鏡頭對準透光孔，以免與聚光器相碰而損壞。鏡臺、鏡身上占有水及污物，必須及時擦去。然后套上顯微鏡罩，對號放入顯微鏡箱中鎖好。 四、實驗方法（二）微生物測微 1.分別在低倍鏡、高倍鏡和油鏡下進行目測微尺的標定。 2.菌體大小的測量 將物測微尺取下，換上標本片，選擇適當的物鏡測量目的物的大小，分別找出菌體的長和寬占目測微尺的格數，再按照目測微尺1格的長度算出菌體的長度和寬度。用目測微尺測

8、量微生物的大小。即可算出標本（菌體）的大小。 四、實驗方法 1.在低倍鏡、高倍鏡和油鏡下觀察標本片 2.測量菌體的大小 在高倍鏡下測量酵母的大小(測1020個菌，求平均值)。 在油鏡下測枯草芽孢桿菌的長與寬，測金黃色葡萄球菌的直徑(測量1020個菌體求平均值)。 在低倍鏡下求出目測微尺每格長度后，再用同法求出在高倍鏡下和油鏡下(物測微尺上需加1滴香柏油)目測微尺每格的長度。 五、實驗內容1.繪出油鏡下的枯草芽孢染色涂片、金黃色葡萄球菌涂片，高倍鏡下酵母菌染色涂片。2.微生物大小的測量的結果填入下列空白在低倍鏡下：目鏡測微尺（ ）格鏡臺測微尺（ ）格 目鏡測微尺每格（ ） m在高倍鏡下：目鏡測微尺（ ）格鏡臺測微尺（ ）格 目鏡測微尺每格 （ ） m六、實驗報告在油鏡下：目鏡測微尺（ ）格鏡臺測微尺（ ）格 目鏡測微尺每格 （ ）m枯草桿菌在油鏡下：長目鏡測微尺（ ）格 （ ）m 寬目鏡測微尺（ ）格（ ）m金黃色葡萄球菌在油鏡下： 直徑目鏡測微尺（ ）格= （ ）m 酵母菌在高倍鏡下：長目鏡測微尺（ ）格 （ ）