1、xxxxx有限公司食品中霉菌和酵母菌測定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī) 程編R起草人日期審核人日期批準(zhǔn)人日期實施日期第 版文件密級1目的規(guī)范食品中霉菌和酵母菌測定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。2范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中霉菌和酵母菌（moulds and yeasts ）的計數(shù)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中霉菌和酵母菌的計數(shù)。3責(zé)任質(zhì)量部組織制訂、化驗室負(fù)責(zé)實施。4內(nèi)容設(shè)備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：冰箱：2 C 5 C。恒溫培養(yǎng)箱：28 C1 C。均質(zhì)器。恒溫振蕩器。顯微鏡：10X 100X。電子天平：感量0.1 g。無菌錐形瓶:容量500 mL、250 mL。無菌廣口瓶：500 mL0無菌吸管

2、：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL亥度）。無菌平皿：直徑90 mm。無菌試管：10 mm X 75 mm。無菌牛皮紙袋、塑料袋。培養(yǎng)基和試劑馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基：見附錄A中A.1孟加拉紅培養(yǎng)基：見附錄A中A.2。檢驗程序霉菌和酵母計數(shù)的檢驗程序見圖1。圖1霉菌和酵母計數(shù)的檢驗程序4.4操作步驟4.4.1樣品的稀釋固體和半固體樣品：稱取25 g樣品至盛有225 mL滅菌蒸儲水的錐形瓶 中，充分振搖，即為1:10稀釋液?；蚍湃胧⒂?25 mL無菌蒸儲水的均質(zhì)袋中， 用拍擊式均質(zhì)器拍打2min,制成1:10的樣品勻液。液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL樣品至盛有22

3、5 mL無菌蒸儲水的錐形瓶（可在瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成 1:10的樣品勻 液。取1 mL 1:10稀釋液注入含有9 mL無菌水的試管中，另換一支1 mL無 菌吸管反復(fù)吹吸 此液為1:100稀釋液。按5.1.3操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換 用1次1 mL無菌吸管。根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇2個3個適宜稀釋度的樣品勻液（液 體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分別吸取 1 mL 樣品勻液于2個無菌平皿內(nèi)。同時分別取1 mL樣品稀釋液加入2個無菌平皿作 空白對照。及時將15 mL20 mL冷卻至46 C的馬鈴薯-葡萄糖-

4、瓊脂或孟加拉紅培 養(yǎng)基（可放置于46c 1。叵溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均 勻。培養(yǎng)待瓊脂凝固后，將平板倒置，28c 1C培養(yǎng)5d,觀察并記錄。菌落計數(shù)肉眼觀察，必要時可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位(colonyforming units , CFU) 表小。選取菌落數(shù)在10 CFU150 CFU的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計數(shù)霉菌和酵母數(shù)。霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為多不可計。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均 數(shù)。4.5結(jié)果與報告計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計算。若所有平板上菌落數(shù)均大于150 CFU,則對稀釋度最高的平

5、板進(jìn)行計數(shù)， 其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。若所有平板上菌落數(shù)均小于10 CFU,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘 以稀釋倍數(shù)計算。若所有稀釋度平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算； 如為原液，則以小于1計數(shù)。報告菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報告。菌落數(shù)大于或等于100時，前3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前 2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)來表示結(jié)果；也可用10的指數(shù)形式來表示，此時 也按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字。稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告，報告 或分別報告霉菌和

6、/或酵母數(shù)。附錄A（規(guī)范性附錄）培養(yǎng)基和試劑A.1馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂A.1.1成分馬鈴薯（去皮切塊）300 g葡萄糖20.0 g瓊脂20.0 g氯霉素0.1 g蒸儲水1000 mLA.1.2制法將馬鈴薯去皮切塊，力口 1000mL蒸儲水，煮沸10 min20 min。用紗布過濾，補(bǔ) 加蒸儲水至1000 mL。加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝后，121 C滅菌20 min 傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中A.2孟加拉紅培養(yǎng)基A.2.1成分蛋白陳5.0 g葡萄糖10.0 g磷酸二氫鉀1.0 g硫酸鎂（無水）0.5 g瓊脂20.0 g孟加拉紅0.033 g氯霉素0.1 g蒸儲水1000

7、 mLA.2.2制法上述各成分加入蒸儲水中，加熱溶化，補(bǔ)足蒸儲水至 1000 mL,分裝后，121c滅菌20 min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培養(yǎng)基中。附錄B（資料性附錄）霉菌直接鏡檢計數(shù)法常用的為郝氏霉菌計測法，本方法適用于番茄醬罐頭。設(shè)備和材料折光儀。顯微鏡。郝氏計測玻片：具有標(biāo)準(zhǔn)計測室的特制玻片。蓋玻片。測微器：具標(biāo)準(zhǔn)刻度的玻片。操作步驟檢樣的制備：取定量檢樣，加蒸儲水稀釋至折光指數(shù)為1.34471.3460 （即濃度為7.9%- 8.8% ,備用。顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)視野的校正：將顯微鏡按放大率 90125倍調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)視野，使其直徑為1.382 mm。涂片：洗凈郝氏計測玻片，將制好的標(biāo)準(zhǔn)液，用玻璃棒均勻的攤布于計測室，以備觀察。觀測：將制好之載玻片放于顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)視野下進(jìn)行霉菌觀測，一般每一檢樣觀察50個視野，同一檢樣應(yīng)由兩人進(jìn)行觀察。結(jié)果與計算：在標(biāo)準(zhǔn)視