1、LightCycler480實時熒光定量PCR系統及其應用 精準源于設計，極速出自創新 羅氏應用科學部roche-applied-science實時定量PCR儀發展簡史1985 Kary Mullis 發明了PCR技術1991 Hoffmann-La Roche公司獲得全球PCR專利權1993 羅氏分子系統公司Russell Higuchi發明實時定量PCR儀1993 Kary Mullis 因發明PCR技術而獲得諾貝爾化學獎1995 羅氏診斷公司推出后來成為PCR診斷行業金標準的COBAS Amplicor分 析儀2019 羅氏診斷公司應用科學部推出LightCycler全自動實時定量PCR

2、系統2019 LightCycler全自動實時定量PCR系統全球銷量突破 5000臺，成為全球 銷量最大的單型號實時定量PCR系統2019 LightCycler 480實時定量PCR儀器上市2019 目前至今，羅氏診斷公司擁有PCR相關專利上千項，占全球PCR專利的 90%以上。 LightCycler 1.0Instrument32 320 Sample number Detection channels Sample volume l LightCycler1.5Instrument32 320 LightCycler 480 Instruments (I, II)96 / 384 5

3、/ 6 10 - 100 / 5 - 2020192019 2019 / 20192019 LightCycler 2.0 Instruments 32620 / 100Breakthrough to higher ThroughputLightCycler 系統發展回顧A Decade of Real-Time PCR Speed and Performance儀器試劑盒預制探針可更換溫控模塊多孔板模塊化軟件LightCycler 480熒光定量PCR系統：系統構成LightCycler 480熒光定量PCR系統獨有的Therma-BaseTM技術提升導熱效率，提高孔間溫度均一性銀質散熱塊加

4、快降溫速度加長光路系統改進光學檢測的邊緣效應快速，高效，均一，無需內參創新的技術改良以獲得業內最好的性能微孔板模塊（銀制）Peltier 半導體加熱單位 冷卻裝置（銀制）熱蓋溫度高度均一性，孔間溫度的精確度0.1快速冷卻和加熱速度 (Heating: (4.8) C/s - Cooling: (2.5)C/s)整個板的精確 PCR 結果96孔模式 1 hour 384孔模式 40 minTherma-BaseTM 溫控系統構成多孔板座Therma-Base層散熱鰭封閉的真空夾層，內壁為燈芯式結構，存貯工作液通過蒸發和凝結過程快速傳熱 使得PCR循環快速而精確!Peltier元件LightCyc

5、ler 480熒光定量PCR儀散熱元件：Therma-Base LightCycler 480普通實時定量PCR儀熱均一性 不同儀器比較LightCycler 480熒光定量PCR儀溫控系統無Therma-Base有Therma-Basemdr1-e26*cyp2C9-e3*cyp2C9-e7*熱均一性對實驗結果的影響溫控的均一性保證了各個反應樣品擴增的均一性，極大降低了檢測誤差率！快速循環模式更快地升降溫，提高反應速度，縮短反應進行的時間單位時間內檢測的工作量增大，實現更加快速的結果檢測！快速循環模式更快地升降溫，縮短了可能的非特異性結合，提高PCR 的特異性Amplification of

6、 a 536 bp -globin fragmentfrom genomic DNA Time (hr)Sample Temperature (C)GelAnalysisTime for 30Cycles (hr)Temperature Profiles536 bp利于PCR體系的優化！典型的96孔板式的頂部光路系統CCD相機光源由于光程差,激發光從頂部發出到達每孔的強度不一樣，中心強度高于邊緣，需要加入內參照來校正光密度不一樣光學系統 頂部照射產生的邊緣效應濾鏡輪CCD 相機多孔板物鏡利用優化的光學檢測元件（液態光導元件，光通路元件, 濾光片和冷CCD光通路元件）將激發光源通過液態光導元件后

7、變成均一的適合微孔板形狀的光線 均一的激發和檢測，無光程差 無需內參照熒光校正（ROX） 采用折疊光路增加光程，降低激發高度LightCycler 480 光路系統氙燈CCD相機5個激發通道6個檢測通道優化光學組件排列設計均一的激發及檢測過程LightCycler 480一大特色就是：從來無需內參染料數據生成 (熱循環模塊)數據檢測 (光學系統)數據分析 (軟件系統)每一個步驟都足夠準確！內參染料UPL probes1010 100 copiesLightCycler 480 與臨床檢測定量：動態范圍無論是強陽性樣品還是弱陽性樣品均能輕松同時檢測！LightCycler 480與基因表達調控微

8、量樣品的區分精確區分1000拷貝與2000拷貝置信度達到99.8%是同類儀器的5倍以上 （其他5000拷貝和10000拷貝）高分辨率有助于對于樣品的精細分析！LightCycler 480與基因表達調控微量樣品的定量檢測性能微量樣品基因表達調控分析 干細胞研究、激光顯微切割以micro RNA的qPCR檢測性能為例： 在LightCycler480上檢測1、5、10、50個細胞的microRNA表達差異，實驗結果與預期結果很好地吻合即使是微量樣品的檢測分析也是輕松自如！96 SamplesR/R: wild typeCGG/CGGR/W: wt/mut2(CGG)/(TGG)R/Q: wt/m

9、ut1(CGG)/(CAG)Q/Q: mutant 1(CAG)/(CAG)W/W: mutant 2(TGG)/(TGG)LightCycler 480 性能 兩個鄰近 SNP的區分可互換的熱循環模塊自己動手DIY，快速方便隨機附送裝載箱，便于更換模塊無需廠家工程師在場無需重新校準更換完畢后儀器自動檢測并確認模塊型號LightCycler 480熒光定量PCR儀96孔模塊與384孔模塊互換結合MagNA Pure 2.0全自動核酸提取系統，實現更短的實驗轉換時間優化的實驗和數據處理流程2小時內完成從核酸純化到PCR鑒定的所有工作，而傳統流程需要6小時甚至一個工作日LightCycler 48

10、0熒光定量PCR系統和全自動核酸提取系統聯用LightCycler 480熒光定量PCR系統結合自動機械臂實現自動裝板E.g., Twister II Plate Handler (Caliper Life Science)可配機械臂，自動化分液裝置可配備讀碼器可配備LIMS可配備全自動的PCR workflow系統試劑選擇范圍廣LightCycler 480熒光定量PCR儀：與自動化流程整合LightCycler 480熒光定量PCR系統全能 可更換熱循環模塊：96 384可采用多種樣品數及體積：96（10-100 l）；384（5-20 l）用不同光學濾鏡組合可檢測多種熒光染料：6個檢測通道可選多種檢測模式：適用目前所有的檢測模式方便強大的軟件工具模塊化軟件高速快速熱循環： Heating: (4.8) C/s - Cooli