1、實驗八大分子物質的水解和糖發酵試驗主 講:1一、目的與要求 證明不同微生物對各種有機大分子的水解能力不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系。 掌握微生物大分子水解試驗的原理和方法。 了解糖發酵的原理及在腸道細菌鑒定中的重要作用。 掌握通過糖發酵鑒別不同微生物的方法。 學習微生物接菌技術。2二、基本原理1、淀粉水解試驗 微生物不能直接利用淀粉，必須靠自身產生的胞外淀粉酶將大分子淀粉分解成糊精、雙糖和單糖才能進入細胞內，細菌是否能產生淀粉酶可通過觀察細菌菌落周圍的淀粉物質是否被水解來證實，淀粉遇碘液會產生藍色，被細菌水解淀粉的區域，用碘則呈褐色。3二、基本原理2、明膠水解試驗 微生物不能直接利用明

2、膠這蛋白質，必須靠自身產生的胞外明膠酶將大分子蛋白質水解成蛋白胨或氨基酸才能進入細胞內，細菌能否產生明膠酶可通過明膠穿刺培養來證實，在微生物的明膠酶作用下，明膠失去凝固性，呈液化狀態。4二、基本原理3、糖發酵試驗 糖發酵試驗是常用的鑒別微生物的生化反應，在腸道細菌的鑒定中尤為重要。大腸菌群能在370C培養下，利用乳糖產酸、產氣。當產酸時，溴甲酚紫指示劑可由紫色（pH6.8）變為黃色（pH5.2）。當產氣時，可通過倒置小倒管內的氣泡來判斷。5圖 糖類發酵試驗 6三、實驗器材1、菌種：枯草芽孢桿菌、普通變形桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌2、培養基： 淀粉培養基 2培養血/每組(5人） 明膠半固體培

3、養基 4支試管/每組(5人） 乳糖發酵培養液 3支試管/每組(5人） 葡萄糖發酵培養液 3支試管/每組(5人）2、試劑：碘液3、儀器或其他用具：培養箱、水浴鍋、接種環、接種針、酒精燈、無菌培養血等。7四、操作步驟1、淀粉水解試驗溶化三角瓶內的淀粉培養基 趁熱倒入二塊無菌培養皿各內約15ml 冷凝后點植法接入普通變形桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌 貼好標簽 平板倒置，370C培養24小時 滴加碘液鑒別有無淀粉水解圈2、明膠水解試驗取四支明膠試管培養基 用接種針分別穿刺接入普通變形桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌，另一支不接菌為空白對照管貼好標簽 200C培養35d （或370C培養2d ，

4、取出置冰浴冷卻）觀察明膠液化情況8四、操作步驟3、乳糖發酵試驗取三支乳糖蛋白胨培養基 分別接入大腸桿菌、普通變形桿菌， 另一支不接菌為空白對照管 貼好標簽 370C培養24小時 觀察產酸、產氣情況4、葡萄糖發酵試驗取三支葡萄糖蛋白胨培養基 分別接入大腸桿菌、普通變形桿菌，另一支不接菌為空白對照管 貼好標簽 370C培養24小時 觀察產酸、產氣情況操作要點： 注意無菌操作，勿染雜菌。 接好菌的平板一定要倒置放入培養箱中。9無菌操作技術10五、實驗數據及處理結果1、大分子物質水解試驗 將結果填入下表?！?”表示陽性，“-”表示陰性112、糖發酵試驗 將結果填入下表?！?”表示產酸產氣，“+”表示產酸，“-”表示陰性12六、思考與討