1、影響C18色譜柱性能的主要(zhyo)因素色譜柱與色譜填料的特性1、 柱填料 硅膠純度 粒徑 比表面積 孔徑2、 色譜柱的構型 色譜柱直徑(zhjng) 色譜柱長度3、 固定相 鍵合類型 殘余硅羥基的影響 反相鍵合相的保留行為 鍵合硅膠的穩定性物理物理(wl)因因素素化學因素化學因素第1頁/共30頁第一頁，共30頁。柱填料對色譜柱填料對色譜(s p)(s p)柱性能的影響柱性能的影響第2頁/共30頁第二頁，共30頁。柱填料(tinlio)對C18色譜柱性能的影響：硅膠純度I2.3-二羥基(qingj)萘OHOHOHOH2.7-二羥基(qingj)萘 TF=1.31Brand W, AQ Col

2、umn 5m, 4.6mm150mm Brand Z,C18 Column 5m, 4.6mm150mm Venusil MP C18 5m, 4.6mm150mm Brand H, C18 Column 5m, 4.6mm150mm Brand U,C18 Column 5m, 4.6mm150mm！TF=1.42TF=1.39TF=1.69TF=？流動相： 甲醇：水=65：35流速： 1 mL/min溫度： 35檢測波長： 230 nm 進樣量： 20 L硅膠純度金屬含量第3頁/共30頁第三頁，共30頁。柱填料(tinlio)對C18色譜柱性能的影響：硅膠純度II 硅膠純度(chnd)金屬

3、含量d第4頁/共30頁第四頁，共30頁。柱填料對C18色譜(s p)柱性能的影響：粒徑 硅膠粒徑和類型(lixng)對柱效的影響d硅膠粒徑和類型(lixng)對壓力的影響第5頁/共30頁第五頁，共30頁。柱填料(tinlio)對C18色譜柱性能的影響：粒徑II 目前市場主要可供選擇的填料粒徑目前市場主要可供選擇的填料粒徑 1.7m，1.8m，2.2m 快速液相色譜快速液相色譜(s p)柱：匹配柱：匹配快速色譜快速色譜(s p)儀儀 2.7m 多孔殼層：在常規液相色譜多孔殼層：在常規液相色譜(s p)儀上實現快儀上實現快速分離速分離(Halo) 3.0m，3.5m 普通快速分析普通快速分析 5.

4、0m 常規分析常規分析顆粒越小，柱效越高, 但是耐污染(wrn)性能下降，柱壓升高. 第6頁/共30頁第六頁，共30頁。柱填料對C18色譜柱性能(xngnng)的影響：比表面積 l 每克填料的表面積，與粒度，孔徑有關l比表面積大，保留增加，載樣量增加，平衡時間增加(梯度洗脫(x tu)尤為注意)l 根據需要選擇合適的比表面積第7頁/共30頁第七頁，共30頁。柱填料(tinlio)對C18色譜柱性能的影響：孔徑I l 多孔材料的多孔材料的95%以上表面以上表面在孔內部在孔內部l 樣品分子直徑小于平均樣品分子直徑小于平均(pngjn)孔徑，才能進入微孔徑，才能進入微粒內部粒內部l 孔徑至少是樣品流

5、體學直孔徑至少是樣品流體學直徑的徑的4倍倍l 300孔徑用于：超過孔徑用于：超過50個氨基酸的肽或個氨基酸的肽或25個殘基的個殘基的低聚寡核苷酸低聚寡核苷酸樣品分子直徑小于平均孔徑，才能(cinng)進入微粒內部第8頁/共30頁第八頁，共30頁。柱填料對C18色譜柱性能(xngnng)的影響：孔徑II 小生物分子的保留值在小孔徑小生物分子的保留值在小孔徑(kngjng)填料通填料通常更大常更大條件(tiojin)：C8色譜柱，4.6150mm，3.5um，A溶劑，0.1%TFA水溶液；B溶劑，0.1%TFA于80%乙腈水中；20min梯度，1030%B；60C，1.5ml/min第9頁/共30

6、頁第九頁，共30頁。色譜柱的構型對色譜柱性能色譜柱的構型對色譜柱性能(xngnng)(xngnng)的影響的影響第10頁/共30頁第十頁，共30頁。色譜柱的構型對色譜柱性能的影響(yngxing)：長度和直徑色譜柱尺寸 對色譜分離(fnl)的影響： 短柱 (15-100mm) - 運行時間短, 柱壓低 長柱 (150-250mm) - 分辨率高, 運行時間長 窄徑柱 ( 2.1mm) - 檢測器靈敏度高 寬徑柱 (3-21.2mm) - 載樣量高第11頁/共30頁第十一頁，共30頁。固定固定(gdng)(gdng)相對色譜柱性能的影相對色譜柱性能的影響響第12頁/共30頁第十二頁，共30頁。固

7、定相對色譜柱性能的影響(yngxing)：鍵合類型A 縱向交聯：保留和選擇不穩定縱向交聯：保留和選擇不穩定B 橫向橫向(hn xin)交聯：寬交聯：寬pH適用，適用，Durashell，C 單體鍵合：重現性好，柱效高單體鍵合：重現性好，柱效高D 單體（空間保護）：低單體（空間保護）：低pH穩定（穩定（Venusil ASB）第13頁/共30頁第十三頁，共30頁。固定相對色譜柱性能的影響：殘余(cny)硅羥基的影響殘余硅羥基的影響殘余硅羥基的影響普通硅膠普通硅膠(u jio)當流動相的當流動相的 pH 值大于值大于 4.5-5.0 時，表時，表面的硅羥基會帶負電荷，堿性化合物拖尾。面的硅羥基會帶

8、負電荷，堿性化合物拖尾。解決方法解決方法封尾封尾雙層表面修飾雙層表面修飾第14頁/共30頁第十四頁，共30頁。固定相對色譜柱性能(xngnng)的影響：殘余硅羥基的影響封尾封尾鍵合填料與小硅烷進行后續反鍵合填料與小硅烷進行后續反應，如三甲基氯硅烷，反應掉應，如三甲基氯硅烷，反應掉部分殘余硅羥基部分殘余硅羥基(qingj)，以，以增加表面覆蓋率。增加表面覆蓋率。缺點：缺點：不能完全反應（仍有不能完全反應（仍有50%的硅的硅羥基羥基(qingj)未被反應）未被反應）在在pHC3C1，長鏈之間差別不大，長鏈之間差別不大 第20頁/共30頁第二十頁，共30頁。固定相對色譜柱性能的影響：反相鍵合相的保留

9、(boli)行為不同廠家(chn ji)色譜柱的保留值，選擇性與峰型色譜柱：4.6*150mm，流動相：乙腈0.05M磷酸鉀緩沖液，pH3.2(65:35);流速：1ml/min，拖尾峰 T0（尿嘧啶）P: 吡啶(bdng)L: 苯酚N: N,N-二甲基苯胺B: 4-丁基苯甲酸J: 甲苯第21頁/共30頁第二十一頁，共30頁。固定相對色譜(s p)柱性能的影響： 鍵合硅膠的穩定性鍵合硅膠的穩定性鍵合硅膠的穩定性 低低pH值，鍵合相流失值，鍵合相流失 高高pH值，硅膠溶解值，硅膠溶解(rngji)影響色譜柱壽命，方法不重現影響色譜柱壽命，方法不重現 第22頁/共30頁第二十二頁，共30頁。固定(

10、gdng)相對色譜柱性能的影響： 鍵合硅膠的穩定性低pH值，鍵合相流失(lish)第23頁/共30頁第二十三頁，共30頁。固定相對色譜柱性能的影響(yngxing)： 鍵合硅膠的穩定性空間(kngjin)位阻保護，延緩鍵合相流失空間(kngjin)位阻鍵合代表產品：Venusil ASB C18Zorbax SB C18第24頁/共30頁第二十四頁，共30頁。固定相對色譜柱性能(xngnng)的影響： 鍵合硅膠的穩定性高pH值，硅膠(u jio)基質溶解pH9時，色譜(s p)柱的穩定性第25頁/共30頁第二十五頁，共30頁。固定(gdng)相對色譜柱性能的影響： 鍵合硅膠的穩定性碳雜化，延硅膠(u jio)緩高pH值水解表面(biomin)碳雜化Agela Durashell RP表面碳雜化示意圖第26頁/共30頁第二十六頁，共30頁。博納艾杰爾為您提供(tgng)全面的LC解決方案 2010版藥典LC方法開發(kif)服務 全面的色譜柱選擇 低pH條件色譜柱（pH=0.8） Venusil ASB C18 高pH條件色譜柱（pH=1-12） Durashell C18 親水色譜柱 Venusil MP C18 經濟性通用色譜柱 Odyssil C18色譜柱第27頁/共30頁第二十七頁，共30頁?？偨Y(zngji)：如何選擇色譜柱