1、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)作者：王心如主編出版社：人民衛(wèi)生出版社出版時(shí)間：2006-2-1字?jǐn)?shù)：302000版次：1頁(yè)數(shù)：203印刷時(shí)間：2006-2-1開本：印次：紙張：膠版紙ISBN：9787117056618包裝：平裝所屬分類：圖書>>醫(yī)學(xué)>>醫(yī)藥衛(wèi)生教材第一章毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)第一節(jié)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)的原則和局限性在描述毒理學(xué)的試驗(yàn)中，有三個(gè)基本的原則：1化學(xué)物在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生的作用，可以外推于人?；炯僭O(shè)為：人是最敏感的動(dòng)物物種；人和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生物學(xué)過程包括化學(xué)物的代謝，與體重（或體表面積）相關(guān)。這兩個(gè)假設(shè)也是全部實(shí)驗(yàn)生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的前提。以單位體表面積計(jì)算在人產(chǎn)生毒作用的劑量和實(shí)

2、驗(yàn)動(dòng)物通常相近似。而以體重計(jì)算則人通常比實(shí)驗(yàn)動(dòng)物敏感，差別可能達(dá)10倍。因此可以利用安全系數(shù)來(lái)計(jì)算人的相對(duì)安全劑量。已知人致癌物都對(duì)某種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有致癌性。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致癌物是否都對(duì)人有致癌性，還不清楚，但此已作為動(dòng)物致癌試驗(yàn)的基礎(chǔ)。一般認(rèn)為，如果某一化學(xué)物對(duì)幾個(gè)物種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的毒性是相伺的，則人的反應(yīng)也可能是相似的。2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須暴露于高劑量，這是發(fā)現(xiàn)對(duì)人潛在危害的必需和可靠的方法。此原則是根據(jù)質(zhì)反應(yīng)的概念，隨劑量或暴露增加，群體中效應(yīng)發(fā)生率增加。毒理學(xué)試驗(yàn)中，一般要設(shè)3個(gè)或3個(gè)以上劑量組，以觀察劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系，確定受試化學(xué)物引起的毒效應(yīng)及其毒性參數(shù)。毒性試驗(yàn)的設(shè)計(jì)并不是為了證明化學(xué)品的安

3、全性，而是為了了解化學(xué)品可能產(chǎn)生的毒作用。僅僅檢測(cè)受試化學(xué)物在人的暴露劑量是否引起毒效應(yīng)是不夠的，盡管此劑量已超過人可能的暴露劑量。當(dāng)引起毒效應(yīng)的最低劑量（LOAEL）與人的暴露劑量接近時(shí)，說(shuō)明該化學(xué)物不安全。當(dāng)該劑量與人的暴露劑量有很大的距離（幾十倍，幾百倍或以上），才認(rèn)為具有一定安全性，此距離越大，安全性越可靠。如果在研究中所用的一系列的劑量不能引起毒性效應(yīng)，則認(rèn)為所用劑量還不足夠高，應(yīng)增加劑量，以確定受試化學(xué)晶的毒性。但如果在試驗(yàn)的最高劑量組的劑量與人可能的暴露劑量有足夠的安全界限，則對(duì)于安全性評(píng)價(jià)來(lái)說(shuō)未觀察到毒效應(yīng)的研究是可以接受的。在毒理學(xué)試驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ退璧膭?dòng)物總是遠(yuǎn)少于處于危險(xiǎn)中

4、的人群。為了在少量動(dòng)物得到有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的可靠的結(jié)果，需要應(yīng)用相對(duì)較高的劑量，以使效應(yīng)發(fā)生的頻率足以被檢測(cè)到。例如，低達(dá)0.01的癌癥發(fā)生率，這意味著在100萬(wàn)人群中有100人發(fā)生癌癥，此發(fā)生率太高，不能為公眾接受。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物直接檢測(cè)如此低發(fā)生率將至少需要30000只動(dòng)物。因此，在毒理學(xué)試驗(yàn)中，對(duì)相對(duì)較少的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須以較高劑量進(jìn)行試驗(yàn)，然后根據(jù)毒理學(xué)原則外推估計(jì)低劑量的危險(xiǎn)性。3成年的健康（雄性和雌性未孕）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人可能的暴露途徑是基本的選擇。成年的健康（雄性和雌性未孕）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是為了使實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有代表性和可重復(fù)性。以成年的健康（雄性和雌性未孕）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為一般人群的代表性實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，而將幼?/p>

5、和老年動(dòng)物、妊娠的雌性動(dòng)物、疾病狀態(tài)作為特殊情況另作研究。這樣可降低實(shí)驗(yàn)對(duì)象的多樣性，減少實(shí)驗(yàn)誤差。毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的敏感性取決于受試物處理引起毒效應(yīng)強(qiáng)度和實(shí)驗(yàn)誤差兩個(gè)因素，處理引起的毒效應(yīng)強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)誤差小，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果的敏感性增加，反映受試物處理的真實(shí)效應(yīng)，反之亦然。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是要規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件，嚴(yán)格控制可能影響毒效應(yīng)的各種因素，保證實(shí)施質(zhì)量，降低實(shí)驗(yàn)誤差。只有這樣，才能保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重現(xiàn)性。外源化學(xué)物從不同途徑染毒實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所表現(xiàn)的毒性可有很大差異，這是由于染毒部位解剖生理特點(diǎn)不同，外源化學(xué)物吸收進(jìn)入血液的速度和量也不同，首先到達(dá)的器官和組織也不同。因此，毒理學(xué)試驗(yàn)中染毒途徑的選擇，應(yīng)盡可能

6、模擬人接觸該受試物的方式。歷史上，環(huán)境污染物及某些藥物所引起的中毒和死亡多次發(fā)生，引起各國(guó)的重視，推動(dòng)了毒理學(xué)的發(fā)展，各國(guó)政府主管部門制訂和多次修訂了有關(guān)藥品和各種化學(xué)品安全性評(píng)價(jià)的規(guī)范或準(zhǔn)則，希望在嚙齒類和非嚙齒類的毒理學(xué)研究能為有關(guān)候選新藥和各種化學(xué)品提供安全性證據(jù)，但以動(dòng)物的資料預(yù)測(cè)人的毒性的預(yù)測(cè)價(jià)值尚有待于研究。Lumley(1990)和lgarashi(1994)根據(jù)有限的臨床資料報(bào)告對(duì)人的毒性約一半不能由臨床前(動(dòng)物)毒性研究預(yù)測(cè)。Heywood(1983)報(bào)告27個(gè)化學(xué)物(大多為藥品)的靶器官毒性在大鼠和犬(或猴)之間的相符率僅20。Olson等(1998)報(bào)告131種化學(xué)物對(duì)動(dòng)

7、物的毒性與人的毒性相符率，嚙齒類為6，非嚙齒類(犬和猴)為28，合并達(dá)36，所有的物種相符率可達(dá)69。按照目前的規(guī)范，進(jìn)行毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)，可以在一定程度上提高新藥和各種化學(xué)品的使用安全性，但仍不能完全排除對(duì)人健康危害的風(fēng)險(xiǎn)。WHO在臨床前藥物安全性實(shí)驗(yàn)原則的文件中指出雖然事先對(duì)生物活性物質(zhì)進(jìn)行了最仔細(xì)徹底的研究，但給人使用時(shí)總是不可避免地要冒一定的風(fēng)險(xiǎn)。這就是利用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的局限性，即動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果外推到人的不確定性。用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的毒理學(xué)試驗(yàn)資料外推到人群接觸的安全性時(shí)，會(huì)有很大的不確定性。這是因?yàn)椋庠椿瘜W(xué)物的毒性作用受到許多因素的影響。首先，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人對(duì)外源化學(xué)物的反應(yīng)敏感性不同，有時(shí)甚至

8、存在著質(zhì)的差別。雖然在毒理學(xué)試驗(yàn)中通常用兩種或兩種以上的動(dòng)物，并盡可能選擇與人對(duì)毒物反應(yīng)相似的動(dòng)物，但要完全避免物種差異是不可能的。而且，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不能述說(shuō)涉及主觀感覺的毒效應(yīng)，如疼痛、腹脹、疲乏、頭暈、眼花、耳鳴等，這些毒效應(yīng)就難以或不可能發(fā)現(xiàn)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，可觀察到體征(sign)，而沒有癥狀(symptom)。第二，在毒理學(xué)試驗(yàn)中，為了尋求毒作用的靶器官，并能在相對(duì)少量的動(dòng)物上就能得到劑量-反應(yīng)或劑量效應(yīng)關(guān)系，往往選用較大的染毒劑量，這一劑量通常要比人實(shí)際接觸的劑量大得多。有些化學(xué)物在高劑量和低劑量的毒性作用規(guī)律并不一定一致，如大劑量下出現(xiàn)的反應(yīng)有可能是由于化學(xué)物在體內(nèi)超過了機(jī)體的代謝能力

9、，這就存在高劑量向低劑量外推的不確定性。第三，毒理學(xué)試驗(yàn)所用動(dòng)物數(shù)量有限，那些發(fā)生率很低的毒性反應(yīng)，在少量動(dòng)物中難以發(fā)現(xiàn)。而化學(xué)物一旦進(jìn)入市場(chǎng)，接觸人群往往會(huì)很大。這就存在小數(shù)量實(shí)驗(yàn)動(dòng)物到大量人群外推的不確定性。第四，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般都是實(shí)驗(yàn)室培育的品系，一般選用成年健康動(dòng)物，反應(yīng)較單一，而接觸人群可以是不同的人種、種族，而且包括年老體弱及患病的個(gè)體，在對(duì)外源化學(xué)物毒性反應(yīng)的易感性上存在很大差異。以上這些都構(gòu)成了從毒理學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果向人群安全性評(píng)價(jià)外推時(shí)的不確定因素。第二節(jié)毒理學(xué)毒性評(píng)價(jià)試驗(yàn)的基本目的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)的常規(guī)部分是毒性評(píng)價(jià)或安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)。為了對(duì)受試物的毒性進(jìn)行全面的測(cè)試，增強(qiáng)測(cè)試結(jié)果的可

10、靠性，權(quán)威機(jī)構(gòu)規(guī)定了評(píng)價(jià)程序，以保證毒性評(píng)價(jià)研究可以達(dá)到普遍能接受的最低要求和原則。由于受試物的多樣性，試驗(yàn)程序應(yīng)該有一定的靈活性。對(duì)毒理學(xué)試驗(yàn)的原理和設(shè)計(jì)思路的深入理解，有助于研究者對(duì)評(píng)價(jià)程序的實(shí)施，在發(fā)現(xiàn)新的現(xiàn)象或線索時(shí)，可進(jìn)一步設(shè)計(jì)新的實(shí)驗(yàn)來(lái)證實(shí)，并研究其機(jī)制。毒性評(píng)價(jià)或安全性評(píng)價(jià)方面的基本目的包括以下幾點(diǎn)：1受試物毒作用的表現(xiàn)和性質(zhì)在急性和慢性毒性試驗(yàn)中，觀察受試物對(duì)機(jī)體的有害作用，對(duì)每個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行全面的逐項(xiàng)的觀察和記錄。發(fā)現(xiàn)有害作用是進(jìn)行劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）研究的前提。2劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）研究劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）研究是毒性評(píng)價(jià)和安全性評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)。通過對(duì)不同有害作用的劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）研

11、究，可以得到該受試物的多種毒性參數(shù)。在急性（致死性）毒性試驗(yàn)中，應(yīng)該得到LD50，也可以得到LDo和MTD。在急性非致死性毒性試驗(yàn)中，應(yīng)該得50到急性可觀察到有害作用的最低劑量（LOAEL）和未觀察到有害作用的劑量（NOAEL）。在亞急性、亞慢性及慢性毒性試驗(yàn)中，應(yīng)該得到相應(yīng)的LOAEL和NOAEL。在致突變、致癌和致畸等特殊毒性試驗(yàn)中，劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）研究將為確定受試物是否具有這些特殊毒性提供依據(jù)。在致畸試驗(yàn)也可得到LOAEL和NOAEL；在致突變、致癌試驗(yàn)中，盡管認(rèn)為是無(wú)閾值的，但也可得到表觀的LOAEL和NOAEL。3確定毒作用的靶器官確定受試物有害作用的靶器官，是毒理學(xué)研究的重要目的

12、，以闡明受試物毒作用的特點(diǎn)，并為進(jìn)一步的機(jī)制研究和毒性防治提供線索。4確定損害的可逆性一旦確認(rèn)有害作用存在，就應(yīng)研究停止接觸后該損害是否可逆和消失，器官和組織功能是否能恢復(fù)，還是像化學(xué)致癌作用那樣停止接觸后損害繼續(xù)發(fā)展。毒性的可逆性關(guān)系到對(duì)人的危害評(píng)價(jià)，如果受損的器官組織能夠修復(fù)并恢復(fù)正常功能，則可能接受較高危險(xiǎn)性的接觸水平。當(dāng)然，毒理學(xué)研究還可能有其他的目的和要求，例如毒作用的敏感檢測(cè)指標(biāo)和生物學(xué)標(biāo)志、毒作用機(jī)制研究、受試物的毒物動(dòng)力學(xué)和代謝研究、中毒的解救措施等。對(duì)這些要求，應(yīng)擴(kuò)展常規(guī)試驗(yàn)的設(shè)計(jì)以包括有關(guān)的項(xiàng)目，或者另外設(shè)計(jì)和進(jìn)行靶器官毒理學(xué)研究及機(jī)制毒理學(xué)研究。第三節(jié)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的職業(yè)道德實(shí)

13、驗(yàn)動(dòng)物(Laboratoryanimal)包括所有脫離自然環(huán)境而用于研究、教學(xué)和試驗(yàn)的脊椎動(dòng)物。要預(yù)防和治療人類的疾病、要認(rèn)識(shí)生命過程，生物學(xué)實(shí)驗(yàn)是必不可少的。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)醫(yī)學(xué)的發(fā)展有不可忽視的貢獻(xiàn)。所有的研究人員要尊重生命，善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。關(guān)于人類對(duì)待動(dòng)物的倫理學(xué)爭(zhēng)論由來(lái)已久。18世紀(jì)哲學(xué)家JeremyBethan指出：?jiǎn)栴}既不是它們能否思考，也不是它們會(huì)不會(huì)說(shuō)話，而是它們痛苦不痛苦。也出版了很多有關(guān)動(dòng)物的倫理學(xué)的書籍和文章。19世紀(jì)以來(lái)興起了動(dòng)物保護(hù)主義，各國(guó)成立各種動(dòng)物保護(hù)組織，其中有一部分是主張絕對(duì)禁止動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的激進(jìn)派。科學(xué)家和大多數(shù)民眾則主張對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)加以規(guī)范，通過立法保障動(dòng)物福利。英國(guó)

14、1822年通過了馬丁法，禁止虐待動(dòng)物；1876年通過了禁止虐待動(dòng)物法；1986年通過了科學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物法。美國(guó)1873年聯(lián)邦法中有人道地對(duì)待動(dòng)物的條文；1966年通過了動(dòng)物福利法。我國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例規(guī)定對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須愛護(hù)，不得戲弄或虐待。對(duì)于那些人為造成喪失獨(dú)立生存能力的生物和那些用于研究、教學(xué)的試驗(yàn)的動(dòng)物，我們都負(fù)有道義上的責(zé)任。使用有知覺動(dòng)物作研究時(shí)，其前提必須期望該研究對(duì)最終能使人類或動(dòng)物的健康和福利得到改進(jìn)的認(rèn)識(shí)有重大的貢獻(xiàn)。遵守下列原則給予人道主義的管理和處理；使痛覺和不適感減少到最低限度；避免不必要的使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。合適的建筑設(shè)備固然重要，但更重要的是管理體制和使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的各級(jí)人員的

15、知識(shí)水平和對(duì)動(dòng)物的關(guān)心程度。應(yīng)貫徹英國(guó)WilliamRussell和RexBrursh(1959)在ThePrinciplesOfHumaneExperimentalTechnique提倡的3R原則，即替代(replacement)、減少(reduction)和優(yōu)化(refinement)。替代是指應(yīng)用無(wú)知覺材料的科學(xué)方法來(lái)代替使用活的有知覺脊椎動(dòng)物的方法。減少是指在能保證獲取一定數(shù)量與精確度的數(shù)據(jù)信息的前提下，減少動(dòng)物的使用數(shù)量。優(yōu)化是指在必須使用動(dòng)物時(shí)，要盡量減少非人道程序的影響范圍和程度。第四節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇和管理毒理學(xué)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為研究對(duì)象的，為獲得可靠的研究結(jié)果，先決條件

16、是正確地選用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物物種的選擇外源化學(xué)物的固有毒性往往在人和不同物種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間表現(xiàn)不同，物種差別可以表現(xiàn)在量和質(zhì)的差別。因此，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物物種進(jìn)行選擇。一般認(rèn)為，從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果外推到人，定性外推的可靠性高于定量外推，毒效學(xué)預(yù)測(cè)優(yōu)于毒動(dòng)學(xué)預(yù)測(cè)。對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物物種選擇的基本原則是：在代謝、生物化學(xué)和毒理學(xué)特征與人最接近的物種；自然壽命不太長(zhǎng)的物種；易于飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)操作的物種；經(jīng)濟(jì)并易于獲得的物種。在選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)存在固有的限制?？衫玫奈锓N不多，主要原因包括經(jīng)濟(jì)（購(gòu)買和飼養(yǎng)的費(fèi)用）、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的壽命、行為和生活能力、處置，也許最重要的是對(duì)該物種正常生理和病理的資料，以及對(duì)所研究的毒性的敏

17、感性。要利用對(duì)受試物在代謝、生物化學(xué)和毒理學(xué)特征與人最接近的物種，這就需要了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物物種和人對(duì)受試化學(xué)物的吸收、生物轉(zhuǎn)化等資料，但這往往并不切合實(shí)際，因?yàn)槭紫刃枰M(jìn)行一系列的比較研究，而對(duì)人體的資料在動(dòng)物試驗(yàn)之前是很難得到的。實(shí)際上沒有一種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物完全符合上述物種選擇的原則，目前常規(guī)選擇物種的方式是利用兩個(gè)物種，一種是嚙齒類，另一種是非嚙齒類。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生物學(xué)和生理學(xué)參數(shù)見表1-1。系統(tǒng)毒性研究最常用的嚙齒類是大鼠和小鼠，非嚙齒類是犬豚鼠常用于皮膚刺激試驗(yàn)和致敏試驗(yàn)，兔常用于皮膚刺激試驗(yàn)和眼刺激試驗(yàn)遺傳毒理學(xué)試驗(yàn)多用小鼠，致癌試驗(yàn)常用大鼠和小鼠，致畸試驗(yàn)常用大鼠、小鼠和兔。遲發(fā)性神經(jīng)毒性

18、試驗(yàn)常用母雞。一般認(rèn)為，如以與人相同的接觸方式、大致相同的劑量水平，在兩個(gè)物種有毒性反應(yīng)，則人有可能以相同的方式發(fā)生毒性反應(yīng)。當(dāng)不同物種的毒性反應(yīng)有很大的差異時(shí)，必須研究外源化學(xué)物在不同物種的代謝、動(dòng)力學(xué)及毒作用機(jī)制，然后才可將實(shí)驗(yàn)結(jié)果外推到人。（二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系的選擇品系（strain）是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的專用名詞，指用計(jì)劃交配的方法，獲得起源于共同祖先的一群動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按遺傳學(xué)控制分類可分為：近交系：指全同胞兄妹或親子之間連續(xù)交配20代以上而培育的純品系動(dòng)物。如小鼠有津白工、津白II、615、DBA/1、DBA/2、BALB/C、C3H、C57B/6J、A和A/He等。雜交群動(dòng)物（雜交1代，F(xiàn)

19、）,指兩個(gè)不同的近交系之間有目的進(jìn)行交配，所產(chǎn)生的第一代動(dòng)物。封閉群：一個(gè)種群在5年以上不從外部引進(jìn)新血緣，僅由同一品系的動(dòng)物在固定場(chǎng)所隨機(jī)交配繁殖的動(dòng)物群。如昆明種小鼠、NIH小鼠、LACA小鼠、F344大鼠、Wistar大鼠、SD（Sprague-Dauley）大鼠等。根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳的均一性排序，近交系最高、雜交群次之、封閉群較低。不同品系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)外源化學(xué)物毒性反應(yīng)有差別，所以毒理學(xué)研究要選擇適宜的品系，對(duì)某種外源化學(xué)物毒理系列研究中應(yīng)固定使用同一品系動(dòng)物，以求研究結(jié)果的穩(wěn)定性。尬陽(yáng)實(shí)曉戒物生醜學(xué)和生理學(xué)肆監(jiān)fit兔二卜只咸體惦重ike）是緲年）世3.5151.03.33.7£

20、;3：.：.=1.50.43.310.12吧35032C3M3u輕M53015G1CncIQU1ftMalf嗆D1閔關(guān)闘llflIK曲K»23-：3i.i-31*疋丘3i.23；.-3aae呼?：2C2u汩卻羽討扌爼）財(cái)咼煜甘髯1（常（時(shí)1佛(7lT14»)窗130)2C01饑L2C-2CO325SCO454)W1371/lOC-L10/aC-130財(cái)lWraiU5CIC'ii1100524®L2S1C«5池1.5THftOi2.C肝皐時(shí)國(guó)宣i刃云信3C0C-flCU2=iCaa出蘭當(dāng)夭31210ii出蘭當(dāng)天!羽ea31212C-囪1各22巧Fa

21、丄幵WW目741-2廠133G11111呂YIF1-J3J-121-a1-12薩乳WUQ）三537313F生膻年離月）訶號(hào)1072-32J2l(tl55M041-31LJ1生殖垂節(jié)EF月冬寧任灼時(shí)p枉呵時(shí)閔田:Jll陶芒巨330.40.4ft70L14玳E世Sg128128128.:壻'芻血寧量応IZh©T5旳談汩孟7u羽溉血時(shí)N（s）卻1昶12v3KJHSH3HCT饕紅細(xì)妙藥1C-42和42S?12.ii10.011.811614.&12120遺傳毒理學(xué)一般利用嚙齒類動(dòng)物，主要是小鼠或大鼠。如果有合適的理由，其他物種也可接受。在致癌試驗(yàn)中對(duì)大鼠和小鼠常選擇有關(guān)病理?yè)p

22、害的自發(fā)發(fā)生率低的品系。(三) 對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物控制的選擇1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇按微生物控制分類，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四級(jí)，見表1-2。對(duì)于毒性試驗(yàn)及毒理學(xué)研究應(yīng)使用二級(jí)(或二級(jí)以上)的動(dòng)物，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。(1)普通動(dòng)物(conventionalanimal，CVA):是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中在微生物控制上要求最低的動(dòng)物。飼養(yǎng)在開放系統(tǒng)的動(dòng)物室內(nèi)?？諝馕磧艋?，飼喂全價(jià)顆粒飼料，可飲自來(lái)水。房舍要求有防鼠和防止昆蟲人內(nèi)的設(shè)施。人員進(jìn)入要穿工作服，專用鞋帽(2)悉生動(dòng)物(gnotobioticanimal，GNA)：又稱清潔動(dòng)物。飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中，空氣要經(jīng)過凈化，飼養(yǎng)室要保持正壓，進(jìn)入室內(nèi)的一切物品要經(jīng)過消毒滅

23、菌，工作人員進(jìn)入要洗澡和穿滅菌工作服，動(dòng)物飲滅菌水。表1-2丈驗(yàn)動(dòng)物蟻生物等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)等級(jí)詞養(yǎng)邱境I繼普逋動(dòng)物開放系統(tǒng)應(yīng)段有傳染齊人的浜病11級(jí)瘙生動(dòng)物巫降系統(tǒng)除I級(jí)標(biāo)準(zhǔn)外，種系清琵屜有該動(dòng)物詩(shī)有兇族病無(wú)蚌宦病原體旬物除11翅標(biāo)準(zhǔn)外，動(dòng)物為劑按產(chǎn)或子宮切除產(chǎn)"強(qiáng)純系(SPF)要菠變殖.在隔瑪酵內(nèi)或?qū)邮朗覂?nèi)詢養(yǎng).有不致病蹭黃曲，證有致病病原體n級(jí)無(wú)戲動(dòng)物阿遹系統(tǒng)在仝封的無(wú)貨條件下飼養(yǎng)初攔系切物，旬物體外不帶有任何甌生物利寄生蟲【包荷絕大朗分病毒無(wú)特定病原體動(dòng)物(specificpathogenfreeanimal，SPF):飼育在屏障或隔離系統(tǒng)中，是通過無(wú)菌動(dòng)物、悉生動(dòng)物、SPF動(dòng)物獲得的

24、。籠具、飼料飲水要經(jīng)過特殊處理，并有嚴(yán)格的檢疫、消毒、隔離制度。無(wú)菌動(dòng)物(germfreeanimal,GFA)：此種動(dòng)物在自然界中并不存在，是在隔離器中經(jīng)人工剖宮產(chǎn)取得仔體，用無(wú)菌母體代乳或人工哺乳，經(jīng)凈化培育得到。2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施的分類開放系統(tǒng)(opensystem)：飼育環(huán)境與外界相同，有強(qiáng)力通風(fēng)設(shè)施、飼料、飲水和墊料要求不被污染，應(yīng)防鼠和防昆蟲措施。(2)屏蔽系統(tǒng)(barriersystem)潔凈度萬(wàn)級(jí)：飼育環(huán)境是密閉的。送人的空氣需經(jīng)過濾，潔凈度達(dá)萬(wàn)級(jí)，飼料、飲水和墊料要需經(jīng)滅菌，飼養(yǎng)人員進(jìn)入要經(jīng)過淋浴、穿無(wú)菌工作服、戴口罩、手套。隔離系統(tǒng)(isolationsys_tem)潔凈度百級(jí)

25、：是以一個(gè)隔離器(isolator)為主體及其客觀存在附屬裝置組成的飼養(yǎng)系統(tǒng)，送入的全新風(fēng)要經(jīng)百級(jí)以上潔凈度過濾，一切物品都有要經(jīng)嚴(yán)格滅菌后經(jīng)傳遞倉(cāng)送入，飼養(yǎng)人員不得入內(nèi)。(四) 個(gè)體選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)外來(lái)化學(xué)物的毒性反應(yīng)還存在個(gè)體差異，應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的個(gè)體選擇。1. 性別同一物種、同一品系的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雌雄兩性通常對(duì)相同外源化學(xué)物毒性反應(yīng)類似，但雌雄兩性對(duì)化學(xué)物的毒性敏感性上存在著差別。一般來(lái)說(shuō)，對(duì)于初次試驗(yàn)的受試物，應(yīng)該采用兩種性別。如實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)存在性別差異，則應(yīng)將不同性別動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別統(tǒng)計(jì)分析。如果已知不同性別的動(dòng)物對(duì)受試物敏感性不同，應(yīng)選擇敏感的性別。2. 年齡和體重毒理學(xué)試驗(yàn)選用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

26、的年齡取決于試驗(yàn)的類型。急性試驗(yàn)一般選用成年動(dòng)物；慢性試驗(yàn)因?qū)嶒?yàn)周期長(zhǎng)，應(yīng)選用較年幼的或初斷乳的動(dòng)物，以使實(shí)驗(yàn)周期能覆蓋成年期。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的年齡應(yīng)由其出生日期來(lái)定，但實(shí)際工作中常以動(dòng)物的體重粗略地判斷動(dòng)物的年齡，作為挑選適齡動(dòng)物的依據(jù)。同一試驗(yàn)中，組內(nèi)個(gè)體間體重差異應(yīng)小于10，各組間平均體重差異不應(yīng)超過5。3. 生理狀態(tài)在毒理學(xué)試驗(yàn)中動(dòng)物如出現(xiàn)妊娠，則影響體重及其他指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果，并且性激素對(duì)外源化學(xué)物代謝轉(zhuǎn)化有影響，故應(yīng)選用未產(chǎn)未孕的雌性動(dòng)物。雌雄動(dòng)物應(yīng)分籠飼養(yǎng)。但在某些試驗(yàn)如顯性致死試驗(yàn)、致畸試驗(yàn)及繁殖試驗(yàn)等，則需有計(jì)劃地合籠交配。4. 健康狀況實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的健康狀態(tài)對(duì)毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果有很大的影響

27、，因此應(yīng)選用健康動(dòng)物。上述對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物控制的選擇實(shí)際上是選擇健康狀況的一個(gè)重要指標(biāo)，健康個(gè)體的選擇還包括了其他方面。健康動(dòng)物應(yīng)發(fā)育正常、體形健壯、無(wú)外觀畸形，被毛濃密、有光澤、順貼而不蓬亂、行動(dòng)靈活、反應(yīng)敏捷、眼睛明亮有神、表皮無(wú)潰瘍和結(jié)痂，天然孔道干凈無(wú)分泌物等。為確保選擇健康動(dòng)物，一般在實(shí)驗(yàn)前觀察57天。對(duì)于大鼠和犬的亞慢性和慢性試驗(yàn)，可在實(shí)驗(yàn)前采血進(jìn)行血液學(xué)和血液生化學(xué)檢查，異常的動(dòng)物應(yīng)剔除；對(duì)犬應(yīng)常規(guī)驅(qū)除腸道寄生蟲。（五）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的管理我國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的政府管理機(jī)構(gòu)是在國(guó)家科技部和?。ㄊ校⒆灾螀^(qū)科技廳領(lǐng)導(dǎo)下的各行業(yè)或系統(tǒng)、各行政區(qū)域、各單位的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)。自1988年國(guó)務(wù)院批

28、準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例以來(lái)，發(fā)布了多項(xiàng)國(guó)家和地方法規(guī)，并制定了有關(guān)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，其中強(qiáng)制性國(guó)標(biāo)為GBI4922-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)監(jiān)測(cè)等級(jí)（嚙齒類的兔類）、GBI4923-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物哺乳類動(dòng)物的遺傳質(zhì)量控制、GBI49242001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全價(jià)營(yíng)養(yǎng)飼料、GBI4925-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施。在毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中所用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)有動(dòng)物合格證、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證、飼料合格證、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證等。進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的人員應(yīng)經(jīng)培訓(xùn)，取得資格認(rèn)可（上崗證）。對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的管理應(yīng)遵循上述的法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)，特別注意：1. 動(dòng)物的管理動(dòng)物的健康、動(dòng)物的接收、適應(yīng)、飼養(yǎng)、鑒別和記錄。對(duì)所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都須記錄每

29、只或每群動(dòng)物的來(lái)源、處理以及其他有關(guān)資料。2. 環(huán)境條件的控制氣候（溫度、濕度、通風(fēng)、光照），其他條件（噪音、氣味、墊料、群體密度和空間限制）、飼料、飲水、運(yùn)動(dòng)等。3. 設(shè)施的管理清潔衛(wèi)生、廢棄物處理、害蟲控制、節(jié)假日和突發(fā)事件的管理。第五節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的準(zhǔn)備（一）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在購(gòu)進(jìn)之后，應(yīng)雌雄分開飼養(yǎng)。一般應(yīng)進(jìn)行57天的檢疫，在此期間應(yīng)多次觀察動(dòng)物，及時(shí)剔除不健康的動(dòng)物。觀察期結(jié)束，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的要求進(jìn)行標(biāo)記和分組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組的原則要求所有的動(dòng)物分配到各劑量組和對(duì)照組的機(jī)會(huì)均等，避免主觀選擇傾向，減少偏性，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。正確的分組方法是隨機(jī)分組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按性別、體重

30、順序編號(hào)，然后利用統(tǒng)計(jì)學(xué)的隨機(jī)數(shù)字表，按完全隨機(jī)分組法或配伍組隨機(jī)分組法，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分配到各劑量組和對(duì)照組。然后應(yīng)計(jì)算各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，必要時(shí)可將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適當(dāng)調(diào)組，以使各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重的均值的差別不超過允許范圍。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別鑒別：對(duì)小鼠和大鼠，最簡(jiǎn)單的方法是看性器官與肛門的距離。雌鼠的性器官與肛門間距離極短，界限不清。成年雌鼠有明顯可見的乳頭。雄鼠的性器官與肛門間距離較長(zhǎng)，兩者間有毛。成年雄鼠可見睪丸。家兔：兔呈仰臥位，自尾向前觀察，肛門位于尾的基部之下，肛門前有一個(gè)泄殖孔。成年雄兔可見兩睪丸。而雌兔在肌門前面有兩個(gè)相距極近的孔分別為尿道口和陰道口。成年雌兔有五對(duì)乳頭。（二）

31、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取和固定方法正確地抓取和固定動(dòng)物，是為了不損害動(dòng)物，不影響觀察指標(biāo)，并防止被動(dòng)物咬傷，保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。抓取固定動(dòng)物的方法依實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和動(dòng)物種類而定。抓取固定動(dòng)物前，必須對(duì)各種動(dòng)物的一般習(xí)性有所了解，抓取固定時(shí)既要大膽敏捷，又要小心仔細(xì)，不能粗暴。1.小鼠的抓取固定方法小鼠的抓取法有兩種：一種是用右手提起尾部，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上，向后上方輕拉，此時(shí)小鼠前肢緊緊抓住粗糙面，迅速用左手拇指和示指捏住小鼠頸背部皮膚并用小指和手掌尺側(cè)夾持其尾根部固定手中，另一種抓法是只用左手，先用拇指和示指抓住小鼠尾部，再用手掌尺側(cè)及小指夾住尾根，然后用拇指及示指捏住其頸部皮膚（圖1-1）。小鼠的固定

32、可用固定器方法（圖1-3）。I.SCEH2.5*aiwmFHi-a小忖的d富希洲遠(yuǎn)方汕2大鼠的抓取固定方法抓大鼠時(shí)若操作不熟練者，最好戴上防護(hù)手套（帆布或硬皮質(zhì)均可）。如是灌胃、腹腔注射、肌肉和皮下注射，可采用與小鼠相同的手法，即用拇、示指捏住鼠耳頭頸皮膚，余下三指緊捏住背部皮膚，置于掌心中，調(diào)整大鼠在手中的姿勢(shì)后即可操作（圖1-2）。大鼠的固定可用固定器方法（圖1-4）。大鼠手術(shù)操作應(yīng)對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉和固定。麻醉的大鼠可置于大鼠實(shí)驗(yàn)板上（仰臥位），用橡皮筋固定好四肢（也可用棉線），為防止蘇醒時(shí)咬傷人和便于頸、胸部實(shí)驗(yàn)操作，應(yīng)用棉線將大鼠兩上門齒固定于實(shí)驗(yàn)板上。大鼠靜脈注射的固定器見圖1-4。3

33、.兔的抓取固定方法兔的抓取一般以右手抓住兔頸部的毛皮提起，然后左手托其臀部或腹部，讓其體重重量的大部分集中在左手上（圖1-5），這樣可避免抓取過程中的動(dòng)物損傷。不應(yīng)采用抓雙耳或抓提胯部的方法。兔的固定分為盒式、臺(tái)式兩種。盒式固定適用于兔耳采血、耳血管注射等情況；若做血壓測(cè)量、呼吸等實(shí)驗(yàn)和手術(shù)時(shí)，則需將兔固定在兔臺(tái)上，四肢用粗棉繩活結(jié)綁住，拉直四肢，將繩綁在兔臺(tái)四周的固定木塊上，頭以固定夾固定。（三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)標(biāo)記對(duì)各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的標(biāo)記方法如下：小鼠：剪趾（胎鼠/新生鼠）、耳打孔、刺紋、植入；大鼠：剪趾（胎鼠/新生鼠），耳打孔、刺紋、耳標(biāo)記、植入；豚鼠：耳打孔、耳標(biāo)記、刺紋、植入；兔：耳標(biāo)記、

34、刺紋、植入；犬和猴：刺紋、項(xiàng)圈、植入。對(duì)嚙齒動(dòng)物或白色家兔等的標(biāo)記常用染色法，可用苦味酸（黃色）、品紅（紅色）的酒精飽和溶液在動(dòng)物不同部位被毛上染色標(biāo)記。如給小鼠或大鼠標(biāo)記110號(hào)，可將小鼠或大鼠從頭頂1號(hào)、右前肢2號(hào)、右腰3號(hào)、右后肢4號(hào)、尾根5號(hào)、左后肢6號(hào)、左腰?號(hào)、左前肢8、背中9號(hào)的順序標(biāo)記19號(hào)，第10號(hào)不作標(biāo)記（圖1-6）。用一種顏色可編46個(gè)鼠（189號(hào)，不染色為10號(hào)，染兩處按低號(hào)計(jì)。如3號(hào)和4號(hào)兩處染色，應(yīng)為34，不是43。棄去個(gè)位號(hào)與十位號(hào)重復(fù)的號(hào)，如無(wú)11、22、99號(hào)等）。如用紅色表示十位數(shù)黃色表示個(gè)位數(shù)，可標(biāo)出1-99號(hào)。由于被毛上顏色會(huì)逐步消失，故需重復(fù)染色。耳緣

35、孔口標(biāo)記法見圖1-7。第號(hào)606W9實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分配到各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組必須遵循隨機(jī)的原則，以保證實(shí)驗(yàn)中非處理因素均衡一致。按性別，將動(dòng)物稱體重、編號(hào)，再按體重從大到小排序，可利用衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)中提供的隨機(jī)數(shù)字表或隨機(jī)排列表進(jìn)行隨機(jī)分組。限于篇幅，在此不贅述。為日常工作需要，作者自編了分成4組（3個(gè)劑量組和1個(gè)陰性對(duì)照組）或5組（3個(gè)劑量組，陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組各1個(gè)）的配伍組隨機(jī)分組表，見表1-3。配伍組隨機(jī)分組法應(yīng)按性別，將動(dòng)物稱體重、編號(hào)，再按體重從大到小排序，以分4組（分別為ABCD）為例，將動(dòng)物按體重順序4個(gè)為1區(qū)組。在下表分4組列中任指定1行開始，依次標(biāo)于各配伍區(qū)組的動(dòng)物編號(hào)下。如第5行，

36、第1區(qū)組4個(gè)動(dòng)物分別分到ACBD，以下區(qū)組則為DBCA、CABD、BDAC等。各動(dòng)物據(jù)此分配到4組。分組后，再統(tǒng)計(jì)各組動(dòng)物體重的均數(shù)，必要時(shí)在組間進(jìn)行調(diào)整。玉L-2五伍組甌機(jī)骨組吉?jiǎng)?42aL0CAD1UE13CAECDU17LIEUDisECmACUBE2BjO1EC13DAACE15UI)Ej!C13CDAEBBACliEaCDE?銅EUCE15DC、DCEli!丈皿EC4CliW4AO5DEDCliEA15CDEACE15ADE1MAtfiDaUE111CClj：l£U蟲ECWJBCEA66EClilDC13E111EEDC：D15E甜AIOC7C?J5D?UlilCE叩li憶

37、蟲E1O腔ED:'KF'PSWISEJBCDEE15C31113C£BDCEB自匚血專ACHEBBEADCLi?J3ECEDC?J5匚血也：0A11BCLO150A陽(yáng)儷CEBLi?UI3ECL13C1'.:13?CB11GAUEEDCAEUE；OD13E：!CDACE11B12DJLICL21KW.ECAU15E?DUCEEU5DCUCW.:a趣L3EG1D1515UCAEC?J5LiE?J1EC15JBCAE140DCB：L4APC15EECll'LLiE血C15D：1E15AECBD<liL5嵐W.E；UJC£15DJ.C1J2即1

38、5爲(wèi)CWJiCUli'.L6DCPJJE15ECADECJ15DjIECUBC?BEH:TbDCliL?UlPfEbDLl£；EBCD111CB；CEDL-SAJSDCL5L'liUCCEAWUGUJ2?J；ECDAECB沖D<?15曲CdEijA?15CEDEll'.CliD1LECb?J)ECWJ520A15DCEDEli'.C3JJCEE1LCDC?£Db2：?.UCD21沁iDECJ15?.DE15CBDECA:15UL辰UCll'.221汨a£CijCLmsCEIBAE鷗23勢(shì)ACHED亂皿E?1OCliWE

39、241ACllli'.E生ABCisCLvdaELdCii訛第六節(jié)受試物和樣品的準(zhǔn)備第七節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒途徑和技術(shù)第八節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物標(biāo)本采集及處死第九節(jié)毒理學(xué)試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)第十節(jié)優(yōu)良實(shí)驗(yàn)研究規(guī)范第二章一般毒性試驗(yàn)第一節(jié)急性毒性試驗(yàn)一、經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)二、經(jīng)呼吸道急性毒性試驗(yàn)三、經(jīng)皮膚急性毒性試驗(yàn)第二節(jié)局部毒性試驗(yàn)第三節(jié)蓄積毒性實(shí)驗(yàn)第四節(jié)亞慢性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)一、亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)二、慢性毒性試驗(yàn)第三章特殊毒性試驗(yàn)第一節(jié)致突變實(shí)驗(yàn)方法一、鼠傷寒沙門菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)二、哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)三、動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變分析四、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)五、單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)第二節(jié)致癌試驗(yàn)一、哺乳動(dòng)物細(xì)胞體外惡性轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（未解決的小節(jié)）二、哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)（未解決的小節(jié)）三、哺乳動(dòng)物長(zhǎng)期致癌試驗(yàn)（未解決的小節(jié)）第三節(jié)、發(fā)育毒性和致畸作用試驗(yàn)一、三段生殖毒性試驗(yàn)（未解決的小節(jié)）二、大鼠體外全胚胎培養(yǎng)試驗(yàn)（未解決的小節(jié)）第四章血液毒理學(xué)研究方法（未解決的小節(jié)）第一節(jié)特殊血液學(xué)檢測(cè)一、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)二、紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)三、高鐵血紅蛋白含量測(cè)定四、變性珠蛋白小體測(cè)定（煌焦油藍(lán)沉淀法）五、血液細(xì)胞的化學(xué)染色六、血液細(xì)胞的免疫細(xì)胞化學(xué)染色七、免疫