1、操作規程Olympus IX5廈門大學醫學院中心實驗室黃靜茹2016年10月說明：透射光主開關；汞燈高壓電源開關；透射光光強控制鈕；濾色片架；光路選擇桿；X軸和Y軸調節鈕；物鏡轉盤；粗/微調焦旋鈕；雙目觀察筒；屈光度調節環；聚光鏡高度調節鈕；聚光鏡對中旋鈕；視場光闌調節桿；孔徑光闌調節桿；聚光鏡轉盤；熒光光閘（SHUTTER）；熒光激發塊轉盤；熒光減光閥一、開機1、 打開透射光源（白光）主開關；2、 打開熒光光源（汞燈高壓電源）；3、 打開電腦，進入cellSens Standard工作站；備注：標本為HE染色、免疫組化時，不需要打開熒光光源；標本為熒光染料染色時，一般也不需要打開白光光源。二

2、、明場觀察（Bright Field BF）1、正確放置標本，BF主要用于HE染色、免疫組化標本；2、轉動熒光激發塊轉盤到“6”的位置；3、轉動聚光鏡轉盤到“BF”位置，直到聽到咔嗒聲；4、將光路選擇桿推進去（ 選擇目鏡觀察光路）；5、轉動物鏡轉盤，選用合適的物鏡，調節白光光強控制鈕至合適的強度，調節粗/細調焦旋鈕聚焦觀察,根據需要調節瞳間距和屈光度；三、相襯觀察（Phase contrast PH)1、正確放置標本，PH主要用于沒有任何染色的、較透明的標本；2、轉動熒光激發塊轉盤到“6”的位置；3、轉動物鏡轉盤，選用合適的物鏡；4、轉動聚光鏡轉盤，使相襯光學元件與所用物鏡相匹配（見表1）；5

3、、將光路選擇桿推進去（ 選擇目鏡觀察光路）；6、調節光強控制鈕直至合適的強度，調節粗/細調焦旋鈕進行聚焦觀察,根據需要調節瞳間距和屈光度。表1：物鏡、相差元件匹配表物鏡4X10X、20X40X相差元件PHLPH 1（PH C）PH 2四、熒光觀察1、如果需要，可先用明場觀察對標本定位，再轉入熒光觀察；2、如果不再需要BF觀察，可關閉白光電源；或將白光光強調節鈕逆時針旋至最低，將孔徑光闌向右撥至最小；3、轉動熒光激發塊轉盤，根據所用的熒光染料選擇匹配的熒光激發塊；表2：熒光激發塊序號激發塊名稱激發光（nm）發射光（nm）濾掉光（nm）1WU330-3854204002WB450-48051550

4、03WG510-5505905704WBV400-4404754555WIY545-5806106006BF明場、相差4、打開熒光光閘（SHUTTER），使其置于“O”位置；5、將光路選擇桿推進去（ 選擇目鏡觀察光路）；6、轉動物鏡轉盤，選用合適的物鏡，調節粗/細調焦旋鈕聚焦觀察，根據熒光強度選擇合適的ND濾鏡（熒光減光閥）進入光路。（第一個ND100：100% 的熒光強度進入光路；第二個ND6：6%的熒光強度進入光路，第三個ND25:25%的熒光強度進入光路）。五、CCD成像1、cellSens Standard工作站中，,點擊右側攝像控制中的實時觀察；2、將光路選擇桿拉出（，CCD成像光路

5、），調節粗/細調焦旋鈕進行聚焦；3、曝光：可先選擇自動曝光，參照自動曝光時間，再通過手動調節曝光時間使圖像更清晰；4、背景校準：進行明場和相差成像時執行白平衡 ，熒光成像時執行黑平衡，在樣品空白背景處畫一個小區域，軟件自動以該處為背景對整幅圖像進行調整，使所選區域顯示為白色或黑色；5、各成像參數設定完畢后，點擊拍照 ，儀器自動成像；6、右鍵文檔工具欄窗口或在文件處進行保存（TIF或JPG格式）。六、關機1、實驗完畢，先退出工作站；2、將透射光光強調節鈕逆時針旋至最低，關閉透射光主開關（TH4）；3、確認汞燈開啟超過0.5h，方能關閉汞燈高壓電源；4、用無水乙醇擦拭鏡頭，并將物鏡轉盤轉至空位，清

6、理載物臺及桌面；5、刻錄數據：放入全新光盤，將數據發送至光盤，電腦右下角出現刻錄提示，點擊該提示進入，確認待刻錄數據，點擊“刻錄到光盤”-下一步，刻錄完畢，光盤自動退出。6、關電腦及顯示器。七、圖像處理1、標尺：在工具欄上選擇正確的物鏡倍數，點擊“視圖”-標尺，軟件自動將標尺加在圖像上，再點擊“圖像”-印入信息，保存即可。2、測量：點擊“測量”-測量工具，軟件左側顯示出測量工具欄，點擊選擇所需的測量工具，在圖像上畫目標區域，右鍵點擊結束測量即可顯示結果。測量結果可導出Excel：點擊測量工具欄圖標。3、圖像疊加：打開擬疊加的圖，“圖像”-組合彩色圖像-“可用圖像”中選擇擬疊加的圖-合并層-確認。4、圖像拼接：按一定順序 拍攝圖像，相鄰兩張圖像的邊緣要部分重疊， 所有圖像拍攝完畢后，選擇視圖-工具-畫廊-全選擬拼接的圖像，選擇運算-圖像拼接-設置水平方向圖像數量-根據拍攝順序擺好圖像位置 -確定；預覽后視情況選擇“裁剪邊緣”-確定。八、注意事項1、汞燈開啟后必須至少使用0.5h才能關閉！汞燈關閉后若還需使用，必須等后才能再次開啟！2、軟