1、第三節(jié)第三節(jié) 植物離體培養(yǎng)體系的建立植物離體培養(yǎng)體系的建立一、植物組織培養(yǎng)的階段劃分：一、植物組織培養(yǎng)的階段劃分： 通常將組織培養(yǎng)過程劃分為四個階段通常將組織培養(yǎng)過程劃分為四個階段 1、起始培養(yǎng)階段誘導(dǎo)階段）、起始培養(yǎng)階段誘導(dǎo)階段） 2、增殖培養(yǎng)階段、增殖培養(yǎng)階段 3、生根培養(yǎng)階段、生根培養(yǎng)階段 4、馴化移栽、馴化移栽 Stage 0 Selection & preparation of the mother plantsterilization of the plant tissue takes placeStage I - Initiation of cultureexplant

2、placed into growth mediaStage II - Multiplicationexplant transferred to shoot media; shoots can be constantly dividedStage III - Rootingexplant transferred to root mediaStage IV - Transfer to soilexplant returned to soil; hardened off Steps of Micropropagation二、外植體起始培養(yǎng)無菌體系建立）二、外植體起始培養(yǎng)無菌體系建立） 起始培養(yǎng)階段是

3、指無菌體系的誘導(dǎo)和起始培養(yǎng)階段是指無菌體系的誘導(dǎo)和建立過程。主要受外植體、培養(yǎng)基、環(huán)建立過程。主要受外植體、培養(yǎng)基、環(huán)境條件等因素的影響。境條件等因素的影響。（一外植體的起始培養(yǎng)過程（一外植體的起始培養(yǎng)過程 1、 起始培養(yǎng)的一般過程：起始培養(yǎng)的一般過程： A、選取適宜的基因型品種）；、選取適宜的基因型品種）； B、選取適宜的外植體；常用外植體有、選取適宜的外植體；常用外植體有莖尖、莖段、節(jié)間、葉片、葉柄等。莖尖、莖段、節(jié)間、葉片、葉柄等。 C、流水沖洗外植體；、流水沖洗外植體； D、外植體切割、分離及滅菌處理；、外植體切割、分離及滅菌處理； E、外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基。、外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基

4、。 F、環(huán)境條件控制促進(jìn)外植體的生長。、環(huán)境條件控制促進(jìn)外植體的生長。2、接種外植體的生長過程：、接種外植體的生長過程： A 細(xì)胞分裂的啟動；細(xì)胞分裂的啟動； B 細(xì)胞增殖；細(xì)胞增殖； C 組織和器官的形成。組織和器官的形成。 （二影響外植體起始培養(yǎng)的因素：（二影響外植體起始培養(yǎng)的因素： 1、影響外植體起始的因素、影響外植體起始的因素 A 外植體的遺傳基礎(chǔ)及生理影響外植體的遺傳基礎(chǔ)及生理影響 B 培養(yǎng)基組成成分：礦物鹽類、微量有機(jī)培養(yǎng)基組成成分：礦物鹽類、微量有機(jī)成分、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、碳源、瓊脂、活性炭、成分、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、碳源、瓊脂、活性炭、酚類化合物、多胺等。酚類化合物、多胺等。 C 培養(yǎng)條

5、件：光照、溫度、濕度培養(yǎng)條件：光照、溫度、濕度 A 外植體外植體 (1) 外植體種類及基因型外植體種類及基因型 (2) 外植體供體植株和外植體的來源與生理狀態(tài)外植體供體植株和外植體的來源與生理狀態(tài) (3) 外植體大小外植體大小 (4) 外植體的極性外植體的極性外植體種類及基因型外植體種類及基因型單子葉植物不易誘導(dǎo)器官發(fā)生。單子葉植物不易誘導(dǎo)器官發(fā)生。b. 木本植物較難誘導(dǎo)。木本植物較難誘導(dǎo)。c. 存在基因型差異如番茄存在基因型差異如番茄29%63%）d. 開始生長季節(jié)取材容易誘導(dǎo)。開始生長季節(jié)取材容易誘導(dǎo)。外植體狀態(tài)：外植體狀態(tài)：外植體大小：外植體大小： 外植體越小成苗能力越弱，較大的外植體外

6、植體越小成苗能力越弱，較大的外植體增殖較快。增殖較快。外植體極性：外植體極性： 當(dāng)外植體以形態(tài)學(xué)的基部接種于培養(yǎng)基上當(dāng)外植體以形態(tài)學(xué)的基部接種于培養(yǎng)基上時，從遠(yuǎn)離基部的表面誘導(dǎo)出芽、苗數(shù)目較時，從遠(yuǎn)離基部的表面誘導(dǎo)出芽、苗數(shù)目較多。多。B、培養(yǎng)基、培養(yǎng)基 a 培養(yǎng)基類型培養(yǎng)基類型: b 碳碳 源的影響源的影響: C、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì) a 細(xì)胞分裂素和生長素類細(xì)胞分裂素和生長素類 b 赤霉素類赤霉素類 c 乙烯及其生物合成抑制劑乙烯及其生物合成抑制劑 d 其他有機(jī)化合物其他有機(jī)化合物細(xì)胞分裂素和生長素：細(xì)胞分裂素和生長素：a.部分植物單獨(dú)使用細(xì)胞分裂素部分植物單獨(dú)使用細(xì)胞分裂素

7、CTK可以形成可以形成 無無根苗根苗b.部分植物無根苗的形成需要細(xì)胞分裂素和生長素配部分植物無根苗的形成需要細(xì)胞分裂素和生長素配合使用。合使用。c. 外源外源CTK與生長素必須維持適當(dāng)比例以改變內(nèi)源激與生長素必須維持適當(dāng)比例以改變內(nèi)源激素平衡，促進(jìn)器官發(fā)生。素平衡，促進(jìn)器官發(fā)生。d. 不同細(xì)胞分裂素對分化的作用效果不同不同細(xì)胞分裂素對分化的作用效果不同e. 苯基脲衍生物具有較高的細(xì)胞分裂素活性苯基脲衍生物具有較高的細(xì)胞分裂素活性 （4PU、CPPU 、TDZ）赤霉素類：赤霉素類： 赤霉素與促進(jìn)細(xì)胞伸長和開花反應(yīng)，組織培赤霉素與促進(jìn)細(xì)胞伸長和開花反應(yīng)，組織培養(yǎng)條件下只在少數(shù)植物上對芽的誘導(dǎo)有促進(jìn)

8、作養(yǎng)條件下只在少數(shù)植物上對芽的誘導(dǎo)有促進(jìn)作用。用。 如馬鈴薯、甜菜、櫻桃等。如馬鈴薯、甜菜、櫻桃等。乙烯及其生物合成抑制劑：乙烯及其生物合成抑制劑： 具有促進(jìn)和抑制兩方面的影響，但抑制作用具有促進(jìn)和抑制兩方面的影響，但抑制作用多于促進(jìn)作用。因此在某些植物種類，乙烯抑多于促進(jìn)作用。因此在某些植物種類，乙烯抑制劑可以促進(jìn)芽的形成。制劑可以促進(jìn)芽的形成。 AgNO3 、CoCl、AVG其他有機(jī)化合物：其他有機(jī)化合物： 腺嘌呤衍生物具有促進(jìn)器官分化作用。腺嘌呤衍生物具有促進(jìn)器官分化作用。 椰子汁等物質(zhì)也具有促進(jìn)分化的功能。椰子汁等物質(zhì)也具有促進(jìn)分化的功能。3. 培養(yǎng)條件及其他因素培養(yǎng)條件及其他因素 （

9、1光照光照 通常通常10005000 Lx 16 小時光照。小時光照。 非洲菊非洲菊1000 lx ，洋蔥，洋蔥 16小時，馬鈴薯連續(xù)小時，馬鈴薯連續(xù)光照，葡萄要求短日照。光照，葡萄要求短日照。 光質(zhì)也影響芽的再生，藍(lán)光有利于器官發(fā)光質(zhì)也影響芽的再生，藍(lán)光有利于器官發(fā)生，煙草實(shí)驗(yàn)，而紅光有利于根的發(fā)生。生，煙草實(shí)驗(yàn)，而紅光有利于根的發(fā)生。 （2溫度溫度 大部分植物要求大部分植物要求25 oC，少數(shù)要求較低，少數(shù)要求較低溫度溫度15 20 oC或較高的溫度或較高的溫度30 oC ） 如菖蒲、水仙、洋蔥、龜背竹等。如菖蒲、水仙、洋蔥、龜背竹等。 變溫處理對有些植物器官發(fā)生有促進(jìn)作變溫處理對有些植物器官發(fā)生有促進(jìn)作用，如豌豆。用，如豌豆。（3濕度：濕度： 培養(yǎng)室相對濕度以培養(yǎng)室相對濕度以7080為適宜，培為適宜，培養(yǎng)容器內(nèi)要保持適宜濕度，防止過于干燥或養(yǎng)容器內(nèi)要保持適宜濕度，防止過于干燥或濕度過大。濕度過大。（4氣體：氣體： 要注意保持培養(yǎng)容器內(nèi)良好的通氣性。維要注意保持培養(yǎng)容器內(nèi)良好的通氣性。維持適宜的氧氣和二氧化碳濃度，