1、兩種不同檢測方法對HBsAg和TP檢測結果的比較楊荷英 李菊蘭 高映雪 甘肅省白銀市中心血站 甘肅 白銀 730900【摘要】：目的 探討乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試劑（金標法）的敏感性、特異性。方法 采用ELISA法和金標法對768例血清樣本同時進行檢測,并且對結果進行對比分析。結果 768例樣本中，用ELISA法檢測HBsAg和TP全陰性的結果,金標法同樣均為陰性；ELISA法檢測HBsAg和TP陽性的，金標法檢測結果有所改變， 各單項指標經X2檢驗HBsAg檢測結果的差異有統計學意義(P0.01）；TP檢測結果差異沒有統計學意義（P0.05）。結論 兩種方法對HBsAg和T

2、P測定的特異性有差別,但是ELISA法敏感性更高。【關鍵詞】： 金標法 ELISA法 HBsAg TP 敏感性 特異性 目前我站對無償獻血者獻血前的初篩檢驗項目主要是ABO血型、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、TP,都采用快速檢測試劑條。這里筆者主要對乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試劑（金標法）加以探討。乙型肝炎表面抗原的檢測方法很多，血站實驗室主要以ELISA法和金標法最常用。ELISA法在臨床應用的時間較早，金標法是近年建立起來的免疫學檢測法。1 梅毒的實驗室檢測方法主要有病原學檢查和血清學試驗，血清學試驗又包括非梅毒螺旋體血清學試驗和梅毒螺旋體血清學試驗；梅毒螺旋體血清學試

3、驗包括梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)、熒光梅毒螺旋體抗體吸附試驗（FTA-ABS）、測定螺旋體抗體的血清學試驗（ELISA）。2目前血站主要使用梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒（ELISA）。1 兩種試劑的用途及原理1.1金標法預期用途：乙肝表面抗原(HBsAg)為乙肝病毒的胞膜蛋白，本身不具有傳染性，但它的出現常伴隨乙肝病毒的存在，所以乙肝表面抗原陽性是乙肝病毒感染的標志。它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液等分泌物中。在感染乙肝病毒后26個月，可在血清中測到陽性結果。急性乙型肝炎患者大部分可在病情早期轉陰，慢性乙型肝炎患者該指標可持續陽性，成為乙肝病毒攜帶

4、者。梅毒螺旋體是引起人類梅毒的病原體，當病原體侵入人體后，可刺激機體免疫系統產生梅毒螺旋體特異性抗體。梅毒主要通過性接觸、母嬰垂直傳播，也可通過血液傳播，先天性梅毒臨床主要表現以流產、死胎或梅毒兒，后天性梅毒臨床依據感染過程分為三期，早期診斷是杜絕感染及時治療的有效措施。乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試劑，為定性檢測人全血/血清/血漿中乙型肝炎病毒表面抗原和梅毒螺旋體抗體，適用于乙型肝炎表面抗原和梅毒螺旋體早期感染的輔助診斷。檢測原理 乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試劑采用膠體金免疫層析技術同時測定全血、血清或血漿中乙型肝炎表面抗原和梅毒螺抗體。在硝酸纖維素膜上依次包被乙型

5、肝炎病毒表面抗原檢測線、梅毒抗體檢測線，以及對照線。當檢測標本HBsAg/TP陽性時，標本中的乙肝表面抗原或梅毒抗體與膠體金標記的抗-Hbs單抗或TP抗原特異性結合，形成各自的復合物，如果是HBsAg復合物沿著硝酸纖維素膜層析至乙肝表面抗原檢測線時，即與檢測線上包被的抗-HBs單抗結合形成“Au-抗-HBs單抗- HBsAg-抗-HBs單抗”夾心結合物產生有色線條。若是TP復合物行至TP檢測線時，即與檢測線上包被的TP抗原結合形成“Au-TP抗原-TP抗體-TP抗原”夾心結合物產生有色線條。未結合的膠體金顆粒則富集在對照線處，使對照線呈現清晰可見的有色線條；被試的陰性樣品只在對照線處顯色。1.

6、2酶聯免疫法（ELISA）預期用途 乙型肝炎病毒表面抗原和梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒是定性檢測人血清或血漿中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和梅毒螺旋體抗體（TP）。適用于血液篩查和臨床乙型肝炎病毒表面抗原感染和梅毒螺旋體感染的輔助診斷。檢驗原理 兩種試劑盒均采用雙抗原夾心法酶聯免疫吸附試驗原理。筆者專門對768例獻血者血清樣本同時使用兩種方法進行檢測比對,發現有個別ELISA法檢測陽性或OD值在灰區（0.71.0之間）的金標法檢測為陰性，再用不同廠家的試劑ELISA法復查結果仍為陽性或OD值在灰區，經反復檢測ELISA法的敏感性和特異性均優于金標法，現將檢測結果報告如下。2 試驗材料和方法

7、2.1 試劑和儀器 ELISA法試劑由北京萬泰生物藥業有限公司（A試劑）和廈門英科新創科技有限公司（B試劑）提供的；金標法試劑由廈門英科新創科技有限公司提供，試劑均在有效期內使用。全自動酶免系統由深圳愛康公司生產的Uranus 100和Uranus 120。2.2 標本來源 2013年7-12月份部分無償獻血者血樣。2.3 檢測方法 所有樣本均使用一次性真空負壓管血袋留樣，EDTA-K抗凝管。ELISA法嚴格按照說明書操作，按照本檢測項目的標準操作規程設置三陰兩陽、QC1（低值）、QC2（高值）和NQC, HBsAg和TP檢測方法均為雙抗原夾心法酶聯免疫試驗原理。參考值：HBsAg 臨界值計算

8、（CUTOFF）：臨界值=陰性對照空A均值NC×2.1（陰性對照空低于0.05者按0.05計算），陰性對照空A值0.10，陽性對照空A值0.08，否則實驗無效。TP臨界值計算（CUTOFF）臨界值=陰性對照空A均值NC+0.18，陰性對照空A值0.10，陽性對照空A值0.08，否則實驗無效；若有1孔陰性對照A值大于0.1應舍去；若兩孔或兩孔以上陰性對照A值大于0.1，應重復試驗；結果判定：樣品A值臨界值（CUTOFF）者為陰性，樣品A值臨界值者為陽性，樣本OD值在0.71.0為灰區（初試陽性反應或在灰區者重新血袋便管剪樣雙孔復試）。乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試劑（金標法

9、）嚴格按照說明書操作。標本和試劑條平衡至室溫（18-25）并編號，加樣量必須在60-80ul之間滴加在加樣處，15分鐘最終觀察并判斷結果，超過30分鐘后試驗結果無效。2.4 結果判斷 觀測區僅對照線（C）位置處出現一條帶，HBsAg、TP均為陰性；在觀測區同時出現三條帶，HBsAg、TP均為陽性；在觀測區，對照線（C）及HBsAg檢測線(T1)位置處各出現一條帶，HBsAg陽性、TP為陰性；在觀測區，對照線（C）及TP檢測線(T2)位置處各出現一條帶，HBsAg,陰性、TP為陽性；觀測區對照線（C）處沒有條帶出現或僅有檢測線（T1、T2）處有條帶，表示此次檢測無效，必須換用新的試劑。三 檢測結

10、果1.768例樣本中，兩項結果均為陰性的樣本為607例；HBsAg陽性樣本為137例，TP陽性的樣本為22例，其中金標法檢測單項HBsAg陽性為123例，TP單項陽性的為18例，HBsAg和TP均為陽性的2例。結果見表1、表2。表1 兩種方法對768例樣本檢測HBsAg和TP的結果方 法名 稱ELISA法金標法符合率(%)HBsAg(+)13912589.93TP(+)242083.33兩項全陰性607607100.02. 768份標本中，ELISA法全陰性的結果金標法均為陰性；而ELISA法為陽性的結果金標法檢測結果有所變化，兩種方法檢測出不同結果符合率，見表1。表2 768例樣品金標法和E

11、LISA法檢測HBsAg和TP結果比較金標法ELISA法HBsAgTP陽性陰性合計陽性陰性合計陽性125012520020陰性146296434744748合計13962976824744768 2.由表2可以得出，HBsAg金標法和ELISA法比較，敏感度為89.93%，特異度為100%，經統計學分析X2=12.07，P0.01，差異有統計學意義，也就是說有高度顯著性；TP金標法和ELISA比較，敏感度為83.33%，特異度為100%；經統計學分析X2=2.25，P0.05，差異無統計學意義，見表2.表3 金標法和ELISA法檢測HBsAg和TP陽性符合率及總符合率比較項目ELISA法金標法

12、符合率（%）陽性例數%陽性例數%陽性例數%HBsAg13918.1012516.2889.9398.18TP243.13202.6083.3399.483.ELISA法為陽性的各單項結果中，金標法的陽性符合率HBsAg為16.28%、TP為2.6%；ELISA法為陰性的各單項結果中，金標法均為陰性，符合率均為100%；兩種方法各單項結果總符合率HBsAg為98.18%、TP為99.48%，見表3.四、討論兩種方法對768例樣本檢測結果表明：金標法敏感性較ELISA法差，存在假陰性結果。與過去有文獻報道相似3。通過對表1、表2的分析可知：金標法對HBsAg和TP檢測的敏感性較ELISA法差，尤其

13、對低滴度樣本監測結果較差，往往檢測結果為假陰性；但對于現代血站來說，采血前的初篩檢驗是至關重要的，由于采集的血液需要離心、分離、成分制備等各個環節，這些環節若陽性標本越多，對工作環境產生污染的可能性越大；另外，對于采血和檢驗人員來說也可以減少采血和化驗過程中的感染機會。還有金標法具有簡便、快速、特異性較高、試劑穩定，無需檢測儀器等特點，對抗原量過大的樣品未出現“鉤狀效應”現象，故一般不出現假陰性；4此外，金標法隨著反應時間的延長陽性率有所提高。因此，乙型肝炎表面抗原/梅毒螺旋體抗體聯合檢測試劑用于大量的無償獻血前的初篩檢測和流行病學調查工作更為合適。參考文獻1 莊嚴等.膠體金免疫層析法與酶聯免疫