1、腫瘤疾病近期療效的判斷方法腫瘤疾病近期療效的判斷方法臨床因子作為預后與預測因子 預后：預后：T, N, M staging, PS score 預測：預測： 吸煙狀況：指導靶向治療吸煙狀況：指導靶向治療 性別：指導靶向治療性別：指導靶向治療 種族：指導靶向治療種族：指導靶向治療 組織學：指導化療和靶向治療組織學：指導化療和靶向治療影像學方法影像學方法非侵入地、直觀地對患者的腫瘤大小變化情況進行評估。 缺點： 存在一定的健康危害或健康隱患 腫瘤大小常與腫瘤的惡性程度或浸潤能力不完全一致 費用昂貴 滯后性 靈敏性低病理學方法病理學方法手術或活檢獲得病灶組織/周圍淋巴結組織，進行病理學染色和分析，是

2、目前唯一明確腫瘤有否轉移的金標準缺點： 精確度不夠高 是侵入性檢查手段 易造成擴散 人工誤差大 難以標準化血清腫瘤標記物測定血清腫瘤標記物測定血清腫瘤標志物的濃度往往可以在一定程度上提示腫瘤的發展程度缺點： 特異性不高 易受非特異蛋白的干擾 其他的病理生理狀態影響導致假陽/陰性結果 1869年 Aust Med J，Ashworth最早在轉移性癌癥患者血液中觀察到。2005年 N Engl J Med，Cristofanilli證實治療前CTC數目是轉移性乳腺癌患者無進展生存期和總生存期的獨立預測因子。 循環腫瘤細胞指從實體瘤中脫離出來并進入外周血液循環的腫瘤細胞。循環腫瘤細胞 原發腫瘤血管生

3、成侵潤侵入血管內侵入血管外(CTC)血管內增殖(CTM)轉移轉移播散腫瘤細胞（DTC）微轉移休眠灶循環腫瘤細胞（CTC）循環腫瘤微栓（CTM）凋亡的CTC侵潤腫瘤細胞擴增血管生成上皮間質轉化（EMT）間質上皮轉化（MET）轉移到骨髓和其他器官CTC檢測檢測 預測PFS及OS 指示預后效果 復發轉移預測與分期 有助于腫瘤個體化治療的藥物篩選和治療方案的確定 是傳統的影像學及其他生物標志物的補充檢測手段 有助于尋找新的腫瘤標識物以及開發新的抗腫瘤藥物腫瘤細胞作為生物標志物 外周血和肺靜脈血中的循環腫瘤細胞（外周血和肺靜脈血中的循環腫瘤細胞（CTCs） 臨床意義臨床意義: 轉移的輔助標志物？轉移的輔

4、助標志物？ 可以預測治療？可以預測治療？ 預后因子？預后因子？ 最小損傷的突變檢測最小損傷的突變檢測?獲取獲取CTCCTC需要解決的技術問題需要解決的技術問題從紅細胞和白細胞中從紅細胞和白細胞中富集富集惡性腫瘤細胞惡性腫瘤細胞將惡性腫瘤細胞與紅細胞、白細胞、正常將惡性腫瘤細胞與紅細胞、白細胞、正常上皮細胞、造血干細胞等上皮細胞、造血干細胞等區分區分開來開來每10mL血液中可能僅含有幾個到幾十個循環腫瘤細胞，而10mL血液中含有的白細胞約有1億個，紅細胞有500億個。三種技術三種技術過濾法過濾法ISET: Isolation by Size of Epithelial Tumor cells8m

5、孔徑過濾膜，漏檢孔徑過濾膜，漏檢體積較小的腫瘤細胞體積較小的腫瘤細胞敏感性低敏感性低梯度密度法梯度密度法腫瘤細胞和單核細胞密腫瘤細胞和單核細胞密度小于度小于1.077g/mlCTC純度低，混入較多純度低，混入較多白細胞白細胞腫瘤細胞會遷移至血漿腫瘤細胞會遷移至血漿層，而聚集后容易下沉層，而聚集后容易下沉聚蔗糖聚蔗糖-泛影葡胺泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)對細胞有毒性對細胞有毒性免疫磁珠法免疫磁珠法腫瘤細胞表面抗原腫瘤細胞表面抗原CTC純度低，混入較多純度低，混入較多白細胞白細胞不能有效排除細胞碎片不能有效排除細胞碎片假陽性和假陰性高假陽性和假陰性高Cell Search-免疫磁珠免疫

6、磁珠+流式細胞分析流式細胞分析+化學發光化學發光90年代中期開始摸索捕獲、分析CTC的方法1999-2003 大量臨床實驗建立CellSearch與CTC的臨床相關數據2004 獲得美國FDA批準用于臨床2009 Cleveland Clinic十大醫學突破第一名2009 Prix Galien USA最佳醫學技術獎2010.1 中國 CTC在復發轉移乳腺癌上的應用注冊實驗2011.5 CTC在小細胞肺癌上的應用實驗研究%Probability of SurvivalTime from Baseline (Months)02468101214161822242628300%10%20%30%4

7、0%50%60%70%80%90%100%20Logrank p 5 CTCsn=87 (49%)5 CTCsn=90 (51%)CellSearch CellSearch 是全球第一也是唯一經是全球第一也是唯一經FDAFDA批準可用于批準可用于臨床的循環腫瘤細胞（臨床的循環腫瘤細胞（CTCCTC）產品產品1983 磁流體J J ClinClin OncolOncol. 2011 Apr 20;29(12):1556-63. . 2011 Apr 20;29(12):1556-63. EpubEpub 2011 Mar 21. 2011 Mar 21.Evaluation and progno

8、stic significance of circulating tumor cells in patients with non-Evaluation and prognostic significance of circulating tumor cells in patients with non-small-cell lung cancer.small-cell lung cancer.肺癌是最常見的原發性惡性腫瘤，85%的肺癌患者為非小細胞肺癌，大多數患者發現時已是晚期，其5年生存率只有2%。目前，仍然缺乏有效的生物標記物預測治療的有效性。CTC是一個潛在的療效預測因子。驗證能否在N

9、SCLC患者中檢測出CTC及CTC能否預測治療有效性。背景背景實驗流程實驗流程病人病人入組入組基線基線CTC檢測檢測化療一化療一個療程個療程CTC檢測檢測統計統計分析分析患者入組標準患者入組標準未做過化療，且4周內未做過放療病理學確診為非小細胞肺癌IIIA, IIIB, IV期準備進行標準的細胞毒療法5年內未患過惡性腫瘤實驗方法實驗方法CellSave 專用收集管采集血液采集血后于室溫儲存并于96小時內進行檢測Cellsearch 系統進行檢測患者化療前患者化療前CTC數量（基線數量（基線CTC）與臨床特征的關）與臨床特征的關系系IV期患者期患者CTC數量明顯多于數量明顯多于IIIB期患者，期

10、患者， IIIB期患者的期患者的CTC數量又明顯多于數量又明顯多于IIIA期患者期患者。肝轉移及骨轉移患者中肝轉移及骨轉移患者中CTC數量明顯多于其它轉數量明顯多于其它轉移患者。移患者。患者化療前患者化療前CTC數量與腫瘤轉移地點的關系數量與腫瘤轉移地點的關系所有非小細胞肺癌病人所有期非小細胞肺癌病人基線基線CTCCTC數量與無進展生存期和總生存期的關系數量與無進展生存期和總生存期的關系基線基線CTC數量少于數量少于5的患者無進展生存期和總生存期明顯高于基的患者無進展生存期和總生存期明顯高于基線線CTC數量大于等于數量大于等于5的患者。的患者。化療前后化療前后CTCCTC數量與患者無進展生存期

11、和總生存期的關系數量與患者無進展生存期和總生存期的關系化療后化療后CTC數量少于數量少于5的患者無進展生存期和總生存期明顯高于的患者無進展生存期和總生存期明顯高于CTC數量大于數量大于5的患者。的患者。化療前后化療前后CTC數量都少于數量都少于5 的患者無進展生存期和總生存期明顯高于的患者無進展生存期和總生存期明顯高于只有一次測出只有一次測出CTC數量少于數量少于5的患者。的患者。化療前后化療前后CTC的數量變化反映臨床療效的數量變化反映臨床療效化療前化療后化療后化療后CTC數量減少患者的臨床療效好于數量減少患者的臨床療效好于CTC數量增加的患者數量增加的患者結結 論論CTC能在能在IV期非小

12、細胞肺癌患者中檢出期非小細胞肺癌患者中檢出CTC數量的變化反映了臨床療效數量的變化反映了臨床療效 CTC數量與數量與OS 和和PFS相關，是非小細胞肺癌的一個相關，是非小細胞肺癌的一個新的預后判斷因子新的預后判斷因子CTCCTC在判斷是否存在轉移中有重要參考價值在判斷是否存在轉移中有重要參考價值對于原發性肺癌患者，CTC計數在有遠處轉移的肺癌患者中有顯著升高，相關性優于CEA。CTCCTC升高對于判斷遠處轉移的敏感性達升高對于判斷遠處轉移的敏感性達71%71%，特異性達，特異性達83%83%CTCCTC計數和血清計數和血清CEACEA水平在不同切點的診斷價值水平在不同切點的診斷價值治療前和治療

13、后治療前和治療后CTC的數量變化反映療效的數量變化反映療效大多數患者的大多數患者的CTCCTC數量在第一個化療療程后（數量在第一個化療療程后（2222天）下天）下降，提示療效好。降，提示療效好。The Annals of Thoracic Surgery Volume 87,Issue 6,June 2009, Pages 1669-1675 The Annals of Thoracic Surgery Volume 87,Issue 6,June 2009, Pages 1669-1675 Circulating Tumor Cells in Pulmonary Venous Blood o

14、f Primary Lung Cancer Patients Circulating Tumor Cells in Pulmonary Venous Blood of Primary Lung Cancer Patients鱗癌中鱗癌中periCTC和和pvCTC的數量明顯高于腺癌的數量明顯高于腺癌N N EnglEngl J Med 2008;359:366-77. J Med 2008;359:366-77.Detection of Mutations in EGFR in Circulating Lung-Cancer CellsDetection of Mutations in EGF

15、R in Circulating Lung-Cancer Cells吉非替尼是較好地治療非小細胞肺癌的靶向藥物，但是EGFR的基因型決定了藥物的治療效果。目前，檢測EGFR的基因型需要選取患者的腫瘤組織，找到一種非侵入性的方法檢測EGFR迫在眉睫。驗證能否在CTC中檢測EGFR的基因型，且與藥物療效相關。背景背景CTC中中EGFR突變與腫瘤組織中突變與腫瘤組織中EGFR突變的一突變的一致性（致性（SARMS方法）方法）CTC中中EGFR基因型有基因型有17個與腫瘤組織中的一樣，準確率為個與腫瘤組織中的一樣，準確率為94%，CTC數量與病情進展的關系數量與病情進展的關系吉非替尼治療后吉非替尼治療

16、后CTC數量下降，伴隨著疾病進展數量下降，伴隨著疾病進展CTC數量也隨之上升。數量也隨之上升。腫瘤大的患者腫瘤大的患者CTC數量比腫瘤小的患者多。數量比腫瘤小的患者多。CTC數量影像學腫瘤變化檢測檢測CTC中中EGFR的基因型與組織中檢測結果高度的基因型與組織中檢測結果高度符合符合可以通過可以通過CTC來檢測非小細胞肺癌患者腫瘤的基因型來檢測非小細胞肺癌患者腫瘤的基因型 CTC數量與疾病進展密切相關數量與疾病進展密切相關結結 論論小細胞肺癌患者活檢組織及相對應的CTC中的CD56活檢組織中的活檢組織中的CD56和和CTC中的中的CD56表達具有一致性表達具有一致性肺癌組織肺癌肝轉移組織Base

17、line blood CAC腫瘤細胞a, monosomy 6p11-q12;b, amplification EGFR, c-MYC; EGFR (red) 5.p15.3 (green),6p11-q12 (aqua), c-MYC (yellow).c, trisomy CEP3 and monosomy CEP17; d, polysomy CEP3, CEP7,CEP17 and 9p21.3. CEP3 (red),CEP7 (green), CEP17 (aqua),9p21.3 (yellow).外周循環腫瘤細胞的異常情況與手術切除的腫瘤細胞具有高度一致性。外周循環腫瘤細胞的異

18、常情況與手術切除的腫瘤細胞具有高度一致性。Baseline blood CTC腫瘤細胞CTC中的染色體異常分子標記物與疾病的復發和生存密切相關中的染色體異常分子標記物與疾病的復發和生存密切相關CTCCTC計數計數CTCCTC的分子特性的分子特性n指示預后n輔助檢測抗癌藥物的反應作為預測和/或藥物動力學生物標志物n聯合已知的分期因素，獲取更精確的預后n判斷病人是否需要輔助化療n檢測癌癥復發n輔助診斷n實時活檢腫瘤的生物學行為n闡明預后和預計的分子學特征n檢測抗藥情況基于獲得連續樣本的便利性n提高對生物過程機制的了解n發現并鑒定新治療靶點CTCCTC的應用：從細胞計數到分子特性的應用：從細胞計數到分子特性FISHFISH分析分析CTCC