1、編號：FAL-YZ-005.1R2A培養基適用性驗證報告編制/日期審核/日期評審會簽姓名部門職務評審意見日期批準/日期科技發展有限公司目 錄序號內容頁號1目的32范圍33依據34職責權限35驗證方法35.2驗證內容和結果385.3驗證結論96附件10-12R2A培養基適用性驗證報告1.目的因2015版藥典純化水檢驗用培養基變更,依1105 非無菌產品 微生物限度檢查方法,通過此次實驗對所更換的R2A瓊脂培養基進行適用性檢查，以證明該方法及所采用的培養基適用于純化水微生物限度檢查日常檢測。2.范圍適用于本公司純化水的微生物限度檢查。3依據中華人民共和國藥典（2015年版）4. 職責權限姓名部門分

2、工職責組長：組織確認或驗證工作，批準方案和報告負責編制方案、實施、總結報告及微生物檢測負責設備樣品提供, 配合實施方案的工作負責微生物檢測5. 驗證方法5.1R2A培養基的適用性檢查R2A培養基應進行培養基的適用性檢查。菌種 試驗用菌株的傳代次數不得超過5 代,試驗用菌種應采用適宜的菌種保藏技術進行保存，以保證試驗菌株的生物學特性。菌液制備銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的微生物培養基質控品,使用前注入1.1ml稀釋液充分溶解后,在漩渦混合器上振蕩混勻,制成1ml(相當于10100cfu/0.1ml)菌懸液。適用性檢查 取銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌各10100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注R2

3、A瓊脂培養基，每株試驗菌平行制備2 個平皿，混勻，凝固，置3035培養不少于5天，計數； 結果判定 被檢定的固體培養基上的菌落平均數與對照培養基上的菌落平均數的比值在0.52范圍內，且菌落形態大小應與對照培養基上的菌落一致。判該培養基的適用性檢查符合規定。實驗前的準備5.1.6.1儀器設備設備名稱設備編號設備 狀態 壓力蒸汽滅菌器10-11-53未檢定 己檢定在有效期內激光塵埃粒子計數器Y09-3016未檢定 己檢定在有效期內溫濕度計JWS-A3未檢定 己檢定在有效期內微壓差表B10093624未檢定 己檢定在有效期內微壓差表B10090070未檢定 己檢定在有效期內細菌培養箱SPX-100B

4、-Z未檢定 己檢定在有效期內霉菌培養箱MLX-150-1未檢定 己檢定在有效期內確認人: 日期:5.1.6.2操作環境微生物限度檢查應在環境潔凈度10000 級下的局部潔凈度100 級的單向流空氣區域內進行。檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染。單向流空氣區域、工作臺面及環境應定期按醫藥工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現行國家標準進行潔凈度驗證。器具 無菌培養皿：（直徑90mm） 1ml注射器5.2計數方法的驗證當建立純化水微生物限度檢查法時，應進行細菌、霉菌及酵母菌計數方法的驗證，以確認所采用的方法適合于該產品的細菌、霉菌及酵母菌數的測定。若產品的組分或原檢驗條件發

5、生改變可能影響檢驗結果時，計數方法應重新驗證。驗證時，按供試液的制備和細菌、霉菌及酵母菌計數所規定的方法及下列要求進行。對各試驗菌的回收率應逐一進行驗證。菌種及菌液制備 同計數培養基的適用性檢查驗證方法 驗證試驗至少應進行3 次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。（1）試驗組薄膜過濾法計數時，取1ml純化水，過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入10100cfu 試驗菌，過濾，濾膜置于R2A瓊脂培養基上。（2）菌液組 將相當于10100cfu/ml菌懸液置于100ml PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液過濾。（3）供試品對照組 取1ml純化水供試液置于100ml PH7.0無菌氯

6、化鈉-蛋白胨緩沖液，過濾，按菌落計數方法測定供試品本底菌數。結果判斷 在3 次獨立的平行試驗中，試驗組菌落數減去供試品對照組菌落的值與菌液對照組菌落數的比值應在0.52范圍內。5.2.4.試驗樣品純化水 稀釋液和試劑： PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液器具 無菌培養皿：（直徑90mm） 一次性注射器驗證用微生物名稱及其編號菌株名稱編號銅綠假單胞菌CMCC(B) 10 104枯草芽孢桿菌CMCC（B）63 501培養基名稱生產商培養基批號有效期瓊脂培養基S（R2A瓊脂）青島尼賽欣合生物技術有限公司20151009201810085.2.5驗證試驗操作5.2.5.1試驗菌的制備和稀釋銅綠假單胞菌

7、、枯草芽孢桿菌的微生物培養基質控品,使用前注入1.1ml稀釋液充分溶解后,在漩渦混合器上振蕩混勻,制成1ml(相當于10100cfu/0.1ml)菌懸液.再用PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液將其稀釋制成10100cfu/ml的菌懸液。5.2.5.2將試驗分為3組A樣品試驗組 取純化水1ml，置于裝有PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml的三角燒瓶中或均質袋中，充分振搖1分鐘。每張濾膜抽濾100ml的供試液,用PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml沖洗濾膜,最后加入10100cfu試驗菌, 每株試驗菌平行制備2個平皿,按膜過濾法測定其菌數。B菌液組 將10-100cfu/ml菌懸液

8、置于裝有100ml PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液的三角燒瓶中或均質袋中，充分振搖1分鐘。每張濾膜抽濾100ml的供試液通過一張濾膜,平行制備兩個.以測定所加的菌數。C供試品對照組 取純化水1ml，置于裝有PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml的三角燒瓶中或均質袋中，充分振搖1分鐘。每張濾膜抽濾100ml的供試液,用PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml沖洗濾膜，平行制備2個平皿,按膜過濾法計數測定供試品的本底菌數。5.2.5.3培養枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌在3035下培養不少于5天，將點計菌落數。并將結果記錄于附件。5.2.6試驗結果試驗組的菌的回收率接入菌種菌落計數（cf

9、u/皿）回收率試驗組供試品對照組菌液組銅綠假單胞菌平均值枯草芽孢桿菌平均值表中：回收率=（試驗組的平均菌落數供試品對照組的平均菌落數的值）÷菌液組的平均菌落數×100%。檢測人: 復核人: 復核日期:5.3驗證結論  5.3.1計數性培養基適用性檢查結論: 試驗組菌落數減去供試品對照組菌落的值與菌液對照組菌落數的比值應在0.52范圍內，且菌落形態大小應與對照培養基上的菌落一致。判定R2A瓊脂培養基的適用性檢查符合規定?？捎糜诒竟炯兓⑸锵薅葯z查實驗。校正因子(修正系數)校正因子=1/回收率 批號: 產品試驗組的微生物生長檢查記錄：菌種名稱產品試驗組計數結果（cfu/皿）平均值銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌菌液組的微生物生長檢查記錄菌種名稱菌液組計數結果（cfu/皿）平均值銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌供試品對照組的微生物生長檢查記錄供試品供試品對照組計數結果（cfu/皿）平均值12測試人/測試日期： 復核人/復核日期：批號: 產品試驗組的微生物生長檢查記錄：菌種名稱產品試驗組計數結果（cfu/皿）平均值銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌菌液組的微生物生長檢查記錄菌種名稱菌液組計數結果（cfu/皿）平均值銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌供試品對照組的微生物生長檢查記錄供試品供試品對照組計數結果（cfu/皿）平均值12測試人/測試日期： 復核人/復核日期：批號: