1、糖的呈色反應和定性鑒定目的要求(1) 學習鑒定糖類及區分酮糖和醛糖的方法。(2) 了解鑒定還原糖的方法及其原理。1. Molish反應-萘酚反應實驗原理糖在濃硫酸或濃鹽酸的作用下脫水形成糠醛及其衍生物與-萘酚作用形成紫紅色復合物，在糖液和濃硫酸的液面間形成紫環，因此又稱紫環反應。自由存在和結合存在的糖均呈陽性反應。此外，各種糠醛衍生物、葡萄糖醛酸以及丙酮、甲酸和乳酸均呈顏色近似的陽性反應。因此，陰性反應證明沒有糖類物質的存在；而陽性反應，則說明有糖存在的可能性，需要進一步通過其他糖的定性試驗才能確定有糖的存在。試劑Molish試劑：取5g -萘酚用95%乙醇溶解至100mL，臨用前配制，棕色瓶

2、保存。1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。操作方法取試管，編號，分別加入各待測糖溶液1 mL，然后加兩滴Molish試劑，搖勻。傾斜試管，沿管壁小心加入約1mL濃硫酸，切勿搖動，小心豎直后仔細觀察兩層液面交界處的顏色變化。用水代替糖溶液，重復一遍，觀察結果。2. 蒽酮反應實驗原理糖經濃酸作用后生成的糠醛及其衍生物與蒽酮（10-酮-9，10-二氫蒽）作用生成藍綠色復合物。試劑蒽酮試劑：取0.2g 蒽酮溶于100mL 濃硫酸中，當日配制。待測糖溶液，同Molish試驗。操作方法取試管，編號，均加入1mL蒽酮溶液，再向各管滴加2 3滴待測糖溶液，充分混勻，觀察各管顏色變化并記錄。3. 酮糖的

3、Seliwanoff反應實驗原理該反應是鑒定酮糖的特殊反應。酮糖在酸的作用下較醛糖更易生成羥甲基糠醛。后者與間苯二酚作用生成鮮紅色復合物，反應僅需20-30秒。醛糖在濃度較高時或長時間煮沸，才產生微弱的陽性反應。試劑Sediwanoff試劑：0.5g 間苯二酚溶于1升鹽酸（H2OHCl=21）(V/V)中，臨用前配制。1%葡萄糖；1%蔗糖；1%果糖。操作方法取試管，編號，各加入Sediwanoff試劑1mL，再依次分別加入待測糖溶液各4滴，混勻，同時放入沸水浴中，比較各管顏色的變化過程。4. Fehling試驗實驗原理費林試劑是含有硫酸銅和酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶液。硫酸銅與堿溶液混合加熱，則生

4、成黑色的氧化銅沉淀。若同時有還原糖存在，則產生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。為防止銅離子和堿反應生成氫氧化銅或堿性碳酸銅沉淀，Fehlin試劑中加入酒石酸鉀鈉，它與Cu2形成的酒石酸鉀鈉絡合銅離子是可溶性的絡離子，該反應是可逆的。平衡后溶液內保持一定濃度的氫氧化銅。費林試劑是一種弱的氧化劑，它不于酮和芳香醛發生反應。試劑試劑甲：稱取34.5g硫酸銅溶于500mL蒸餾水中。試劑乙：稱取125g NaOH 137g酒石酸鉀鈉溶于500mL蒸餾水中，貯存于具橡皮塞玻璃瓶中。臨用前，將試劑甲和試劑乙等量混合。1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。操作方法取試管，編號，各加入Fehlin試劑甲和乙1

5、mL。搖勻后，分別加入4滴待測糖溶液，置沸水浴中加熱2 3min，取出冷卻，觀察沉淀和顏色變化。注意事項（1）Molish反應非常靈敏，0.001葡萄糖和0.0001蔗糖即能呈現陽性反應。因此，不可在樣品中混入紙屑等雜物。當果糖濃度過高時，由于濃硫酸對它的焦化作用，將呈現紅色及褐色而不呈紫色，需稀釋后再做。（2）果糖與Seliwanoff試劑反應非常迅速，呈鮮紅色，而葡萄糖所需時間較長，且只能產生黃色至淡黃色。戊糖亦與Seliwanoff試劑反應，戊糖經酸脫水生成糠醛，與間苯二酚縮合，生成綠色至藍色產物。（3）酮基本身沒有還原性，只有在變成烯醇式后，才顯示還原作用。（4）糖的還原作用生成氧化亞銅沉淀的顏色決定于顆粒的大小，Cu2O顆粒的大小又決定于反應速度。反應速度快時，生成的Cu2O顆粒較小，呈黃綠色；反應速度慢時，生成的Cu2O顆粒較大，呈紅色。溶液中還原糖的濃度可以從生成沉淀的多少來估計，而不能依據沉淀的顏色