1、肌苷對海人藻酸引起紋狀體損傷的保護作用(1)    【關鍵詞】 肌苷Protective effect of inosine on intrastriatal kianic acid injection induced lesion in the rat【Abstract】 AIM:    To establish the animal model of intrastriatal kainic acid (KA) injection and to investigate the effect of systema

2、tic administration of inosine on the striatal lesion size and the number of NADPHd positive neurons in this model. METHODS:    KA was stereotaxically injected into the left striatum of rats. Ten rats were divided into 2 groups: Inosine group (n=5), receiving ip inosine administra

3、tion, (50 gL-1, 75 mgkg-1) , 3 times each day, from 1 day prior to operation to day 3 postoperatively when the rats were sacrificed, and control group (n=5), receiving normal saline instead of inosine. Nissl stain and NADPHd histochemistry were then performed to investigate the difference of lesion

4、size and NADPHd positive neurons between inosine and saline treated groups. RESULTS: Inosine decreased the size of KAinduced striatal lesion area and increased the number of NADPHd positive neurons. CONCLUSION: Inosine can attenuate KAinduced striatal lesion and show protective effect on NADPHd posi

5、tive neurons in the striatum. These findings provide a pontential clinical use of inosine in the CNS disease.【Keywords】 kainic acid; inosine; corpus striatum; NADPHd positive neuron【摘要】 目的： 建立大鼠紋狀體內注射海人藻酸（KA）模型，并觀察肌苷對紋狀體損傷面積及NADPH脫氫酶（NADPHd）陽性神經元數目的影響. 方法： 采用紋狀體內注射KA制備模型. 10只大鼠分成2組（n=5），分別于手術前1 d給予肌

6、苷或等量生理鹽水（對照組），腹腔注射，每日3次，持續給藥至手術后第3日結束，利用尼氏染色和NADPHd的組織化學方法，觀察肌苷組和對照組紋狀體損傷面積及NADPHd陽性神經元數目的差別. 結果： 肌苷可以使KA引起的紋狀體損傷面積減小并增加NADPHd陽性神經元的數目. 結論： 肌苷可以減輕興奮性毒素KA引起的紋狀體損傷，并對紋狀體內的NADPHd陽性神經元具有保護作用.【關鍵詞】 紅藻氨酸，肌苷，紋狀體， NADPHd陽性神經元0引言肌苷在臨床上被廣泛地應用于各個領域，傳統觀點認為在中樞神經系統，肌苷是一種無活性的代謝中間產物，但是最近研究表明肌苷在體外可保護神經元免于損傷. 史明等1發現，

7、在用ZnSO4損傷PC12（一種常用的神經元模型）后，單純給予肌苷即可提高PC12細胞的存活. 由于興奮性毒素的損傷是各種神經退行性疾患的一個重要的共同機制，因此，我們使用興奮性毒素海人藻酸（KA）損傷紋狀體模型2，探討肌苷是否在體對興奮性毒性引起的神經細胞損傷具有保護作用.1材料和方法1.1材料成年SD雄性大鼠10只(第四軍醫大學實驗動物中心提供)，體質量250300 g. 利用日本Narishiga公司立體定向儀制作紋狀體內注射KA模型. 10只大鼠分成兩組(n=5)，分別于術前1 d給予肌苷（50 gL-1, 75 mgKg-1）或等量生理鹽水腹腔注射，每日3次. 持續給藥至術后第3日結

8、束.1.2方法統計學處理： 使用SPSS軟件進行student t檢驗. 對于因方差不齊不能采用student t的數據，使用 Wilcoxon(秩和檢驗)統計方法對其進行分析.2結果2.1尼氏染色手術后3 d，KA損傷側紋狀體明顯萎縮，側腦室擴大. 損傷區較周圍組織顏色淺淡，并與周圍正常腦組織之間有一明顯的分界線，易于區分. 且在損傷中央切片上占據了大部分紋狀體，但皮質未被累及（Fig 1A）. 該區內大細胞神經元數目明顯減少，但是膠質細胞增生明顯. 肌苷組與生理鹽水組相比，損傷區域更小一些（Fig 1B）. 定量分析證實肌苷組與生理鹽水組比較，在被檢的5個層面，損傷面積均有不同程度的減小（

9、Tab 1）.2.2NADPHd組化染色KA損傷后，紋狀體中心NADPHd神經元完全消失, NADPHd陽性神經纖維密度顯著減低. NADPHd陽性神經元的減少和NADPHd陽性纖維密度減低，從損傷區中心至邊緣呈漸變趨勢. 損傷區周緣殘存的NADPHd陽性神經元, 形態較單一, 梭形者居多, 胞體較小, 神經纖維不連貫，斷斷續續，突起較少而短，NADPHd陽性纖維密度也較低. 肌苷組與對照組相比，損傷區形態未見區別，但損傷區周緣殘存細胞比例更高一些（Fig 2），在所檢驗的5個平面，殘存細胞與對側細胞數目的比值均有不同程度的提高（Tab 1）. 本篇論文是由3COME文檔頻道的網友為您在網絡上

10、收集整理餅投稿至本站的，論文版權屬原作者，請不要用于商業用途或者抄襲，僅供參考學習之用，否者后果自負，如果此文侵犯您的合法權益，請聯系我們。圖1尼氏染色Fig 1Nissl staining(略)圖2NADPH脫氫酶陽性神經元(略)表1肌苷對KA引起的大鼠損傷面積及NADPHd陽性神經元數目的影響(略)3討論通過本實驗，我們證明了肌苷對KA局部注射引起的紋狀體損傷有保護作用. 在以前的實驗中，肌苷被直接注射入CNS神經元的胞體處以促進其側枝出芽4. 但是在本實驗中我們探討了腹腔注射肌苷對CNS保護的可能性. 這是因為，肌苷分子質量很小（268.3 ku）,易于透過血腦屏障5. 而在KA損傷后，

11、血腦屏障也失去其完整性6，因此，外周給予肌苷即可能可以對抗KA的毒性作用. 我們的實驗證實了這一點.    關于肌苷對CNS保護作用的詳細機制還不清楚. Litsky等7實驗表明，肌苷可以在膠質細胞存在的前提下，提高神經元對呼吸鏈抑制劑魚藤酮的抵抗能力. 肌苷的這一作用被認為與膠質細胞內的嘌呤核苷酸磷酸化酶（Purine Nucleoside Phosphorylase, PNP）有關，PNP可以催化肌苷生成1磷酸核糖和次黃嘌呤（HX）. 1磷酸核糖可以通過磷酸戊糖途徑及糖酵解途徑異生形成ATP，通過維持細胞內的能量代謝而提高神經元對外界損傷的抵抗力8.

12、 HX則可以在次黃嘌呤氧化酶催化下最終生成尿酸，而尿酸是過亞硝酸鹽和體內其他氧化物的清除劑9. 隨著Benowitz等發現肌苷可以通過一些直接機制促進神經元突起的延伸4. 關于尋找肌苷的新的作用靶點受到了研究者的重視. 史明等1發現，肌苷可以在體外促進PC12細胞抵抗ZnSO4的損傷，而PC12細胞作為一種經常被使用的神經元模型，缺少PNP，因此，我們推測肌苷對神經元的保護作用可能由其他一些通路得以介導. 而其中一個比較有可能的分子是PARPPoly(ADPribose) polymerase. Cosi等10的實驗表明，紋狀體內注射KA會引起24 h后紋狀體PARP的內在活性及總活性的不同程

13、度提高，從而提示PARP可能參與了興奮性毒素對紋狀體損傷的過程. PARP是DNA損傷修復中的關鍵分子，但是過度激活PARP，則因為大量消耗了細胞內的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD ）并進而使胞內ATP池耗竭，造成細胞的壞死性死亡. 而肌苷因為與NAD 分子中的部分結構十分相似11，所以可與NAD 競爭結合PARP，因此可以作為一種PARP的競爭性抑制劑而發揮作用，從而阻止ATP的耗竭12. 另外PARP的活性被肌苷抑制后還可阻止一氧化氮合酶的作用過程，使NO的合成量減少，結果使過亞硝酸鹽生成減低，保護了細胞的膜性結構，從而提高細胞的存活11.通過上述討論，我們可以看到，我們觀察到的肌苷對紋狀體

14、NADPHd陽性神經元的保護作用可能是肌苷多方位作用的結果. 與體外相比，有多種途徑可能介導了肌苷在體對神經元的保護作用. 而肌苷不僅容易獲得，無副作用，并曾有報道肌苷可以順利地透過血腦屏障，所以口服或肌注即可能對中樞神經系統產生作用. 因此，在神經退行性疾病的早期，預防性的給予肌苷，有可能安全、方便的延緩神經退行性疾病的進程.【參考文獻】1 Shi M, You SW, Meng JH, Ju G, Direct protection of inosine on PC12 cells against zincinduced injury J. Neuroreport, 2002;13(4):

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17、, Skolnick P. Anticonvulsant doses of inosine result in brain levels sufficient to inhibit 3H diazepam binding J. Psychopharmacology (Berl), 1981;75 (2): 175-178.6 Bolton SJ, Perry VH. Differential bloodbrain barrier breakdown and leucocyte recruitment following excitotoxic lesions in juvenile and a

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