1、常用免疫組化試劑介紹一、用于鑒別診斷(一)上皮源性：1. 細胞角蛋白/cytokeratin.CK：目前，商品化的細胞角蛋白有20多種，不同的分子量代表不同類型的上皮標志。通常將CK分為兩大類型：型（低分子量）；型（高分子量）。理論上講，大多數單層上皮表達低分子量的CK；復層上皮多表達高分子量的CK；移形上皮（膀胱）和假復層上皮（呼吸道的被覆上皮）既表達低分子量的CK，也表達高分子量的CK。在癌組織中，低分子量的CK多在腺癌中表達，高分子量的CK多在鱗癌中表達。目前為止，未發現任何一種上皮只含有一種CK，某些上皮可含2-10種不同分子量的CK。因此，目前試圖應用單一的CK免疫表型來確定某種特定

2、的上皮性腫瘤是不可能的。同樣，應用CK來區別腺癌、類癌和間皮瘤也是困難的。因此，CK的免疫組化結果判斷是一個較為復雜的問題，在應用這類標記物作為腺癌和鱗癌的鑒別應特別注意。有必要時，應聯合用多種CK加以綜合判斷。CK的陽性表達還包括有間變癌、雙向分化的滑膜肉瘤、脊索瘤、胚胎癌、間皮瘤、上皮樣肉瘤、胸腺瘤等。CK的陰性表達有：副節瘤單向分化的滑膜肉瘤、軟骨（肉）瘤、精原細胞瘤、淋巴瘤、腦膜瘤、惡黑、惡纖組、軟組織肉瘤（除特殊類型外）。在判斷CK免疫組化結果時應注意幾點：（1） CK的單克隆抗體優于多克隆抗體；（2） CK常出現斑點狀的假陽性反應，應注意識別；（3） 雖然大多數CK多在胞漿表達，但

3、CK17多在胞核表達；（4） 絕大多數CK抗體需用胰酶消化，可增加陽性表達率和染色強度；（5） 部分非上皮性腫瘤（平滑肌肉瘤）可見有CK表達，在診斷時應注意；（6） 淋巴結、扁桃體和脾組織中的濾泡外的網織細胞含有CK8和18以及desmin,在判斷淋巴結轉移癌和肌源性肉瘤轉移時應根據組織學綜合判斷。2.上皮膜抗原（epithelial membrane antigen/EMA）：EMA是上皮細胞分泌的一種乳脂小球膜糖蛋白，廣泛存在于人體各種上皮細胞中（也存在于間皮細胞、漿細胞、組織細胞和T細胞淋巴瘤中），其分布與角蛋白相似，但對內臟腺上皮優于細胞角蛋白，尤其是分化差的癌EMA有時可呈強陽性表達

4、。EMA可作為上皮源性腫瘤的常用標記物。EMA陽性表達的腫瘤有鱗癌、胃腸道腺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、間皮瘤、滑膜肉瘤、甲狀腺乳頭狀癌、上皮樣肉瘤等。在判斷EMA免疫組化結果時應注意幾點：（1） EMA雖然是上皮細胞非常敏感的標記，但一些非上皮性腫瘤（如漿細胞、組織細胞和T細胞淋巴瘤）也可陽性表達。因此在癌和其他間葉性腫瘤鑒別時不能作為唯一的參考標記；（2） EMA對內臟上皮源性腫瘤的敏感性優于體表上皮源性腫瘤，因此在腺癌中的表達明顯高于鱗癌。3.橋粒蛋白：是上皮細胞特有的結構，是一種廣譜的上皮性標記。鱗癌、腺癌、移形細胞癌、未分化癌和間皮瘤、尤文氏肉瘤表達。在判斷橋粒蛋白免疫組化結果時應

5、注意幾點：（1） 橋粒蛋白也可在心肌、腦膜瘤、卵巢的顆粒細胞瘤和淋巴結的網織細胞中表達；（2） 甲狀腺間變癌陽性表達率低；（3） 冰凍切片效果優于石蠟切片。（二）間葉源性腫瘤的標記1.波形蛋白Vimentin：是一種52-58的胞漿蛋白。主要分布于間葉細胞及其起源的腫瘤，是間葉細胞及其腫瘤的特異性標記。橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤和非肌源性軟組織腫瘤如纖維肉瘤、脂肪肉瘤、血管肉瘤、惡纖組、精原細胞瘤、雪旺氏瘤和骨腫瘤Vimentin是一個關鍵標記。此外，血管球瘤、顆粒細胞肌母細胞瘤、淋巴瘤、白血病和惡黑等均可有Vimentin表達。在判斷Vimentin免疫組化結果時應注意幾點：（1） 部分腫瘤（如

6、間皮瘤、滑膜肉瘤、乳腺癌、肺腺癌等）除Vimentin（+）表達外，可同時又有cytokeratin的表達。應結合其組織學形態加以診斷。（2） 福爾馬林固定的組織標本，vimentin 假陰性并不少見，冰凍切片酒精固定的組織可提高其敏感性和可靠性；（3） vimentin不能單獨用于軟組織腫瘤的診斷，多提倡與其他特異性標記物聯合使用。2.結蛋白desmin：是一種分子量為50-55ku的細胞漿蛋白，胚胎和成人橫紋肌或平滑肌及其腫瘤均可表達。子宮、皮膚、胃腸道及其他部位的平滑肌多呈（+）表達。現已發現desmin在良性腫瘤的陽性率和染色強度明顯高于惡性腫瘤；高分化的平滑肌肉瘤和染色強度明顯高于低

7、分化的平滑肌肉瘤。 Suster報道5例皮膚是上皮性平滑肌肉瘤均為（-），而actin 和vimentin均為（+）反應。因此目前認為，多應用配套抗體，即與其他肌源性抗體聯合應用，不能只根據desmin (-)來排除平滑肌肉瘤的診斷。在判斷desmin免疫組化結果時應注意幾點:（1） 非常原始的肌源性腫瘤常不表達 desmin;（2） 某些非肌源性腫瘤也有desmin 表達，如纖維肉瘤、惡纖組、腺泡狀軟組織肉瘤和個別腺癌（3） 常規福爾馬林固定、石蠟包埋的低分化橫紋肌肉瘤可能表現假（-）結果；（4） desmin不能用于區別橫紋肌肉瘤還是平滑肌肉瘤；（5） 血管平滑肌不表達desmin。3.肌

8、動蛋白Actin：是一種具有收縮能力的微絲蛋白，幾乎分布于所有的肌型細胞，根據其結構形式的不同，至少有6種不同的類型，即橫紋肌型、心肌型、平滑肌型（兩種）和非肌源型（兩種）。目前商品化的Actin包括有肌肉型（HHF35），在心肌、平滑肌和橫紋肌細胞及其腫瘤中均有表達，尤其在低分化的橫紋肌肉瘤和平滑肌肉瘤中的表達，其敏感性和特異性均比desmin高;Actin肌源節型，主要用于橫紋肌及其腫瘤的診斷；Actin平滑肌型（Smooth Muscle），主要用于平滑肌及其腫瘤（肉瘤）的診斷。在判斷 actin免疫組化結果時應注意幾點：（1） 三種在肌源性腫瘤的診斷意義上，尚不能作為一個獨立的診斷指標

9、，因為三者之間存在交叉反應；（2） 一些非肌源性腫瘤也可有Actin（+）表達，如皮膚、口腔、喉、涎腺腫瘤以及星形細胞瘤等；（3） 部分器官和組織的非肌上皮細胞也有Actin（+）表達，如肺、食管、胃、十二指腸、膀胱的上皮細胞和肝臟、腎、胎盤以及胰島細胞等；（4） HHF35也可標記肌上皮細胞，但其敏感性和特異性均不如平滑肌型actin；（5） 福爾馬林固定的組織，部分病例可有一些非特異性染色。4.肌紅蛋白myoglobin：myoglobin被認為是存在于正常橫紋肌和橫紋肌腫瘤中的一種分子量為17.8ku的胞漿蛋白，可作為橫紋肌肉瘤的特異性標記。在判斷myoglobin免疫組化結果時應注意幾

10、點：（1） 雖然myoglobin有較高的特異性，但要注意其假（+）反應，尤其是壞死或退變以及殘留的正常橫紋肌均有myoglobin（+），應注意識別；（2） 某些腫瘤如惡黑、浸潤型乳腺癌、軟組織淋巴瘤等也有myoglobin（+），這個可能是瘤細胞破壞橫紋肌時吞噬了myoglobin所致；（3） 烤片溫度過高，>60時可能會破壞其抗原，造成假（-）.（三）神經和內分泌細胞標記：1膠質纖維酸性蛋白GFAP：是一種分子量為47ku的酸性蛋白。研究發現：GFAP不僅在星形神經膠質細胞及其腫瘤中存在，還見于各種類型的星形細胞瘤、混合性膠質瘤、多形性成膠質瘤、室管膜下巨細胞性星形細胞瘤、異位星形

11、細胞瘤、松果體瘤和髓母細胞瘤中向膠質分化，以及含膠質成分的神經鞘瘤等腫瘤中。在判斷GFAP免疫組化結果時應注意幾點：（1） GFAP不僅在星形細胞和膠質細胞中表達，其他腦腫瘤如成血管細胞瘤等也可表達，尤其是伴有星形細胞分化時，因此應注意識別。（2） GFAP作為中樞神經腫瘤的診斷和分類時，應密切結合HE的形態學改變，尤其是兒童的腦腫瘤。（3） GFAP（+）細胞的染色強度和數量與腫瘤分化程度有關，高分化的（+）表達較好，低分化的表達較弱甚至（-）。2.神經纖維細絲蛋白NF：是神經元特異性中間絲蛋白，主要存在于神經細胞內，故作為神經細胞分化的標志。腎上腺內外嗜鉻細胞瘤等也可呈（+）反應。神經節膠

12、質細胞瘤、室管膜瘤、神經鞘瘤等（-）；另外，惡黑也可呈（+）。3.S-100蛋白：早期人們認為，S-100是一種神經系統特異性蛋白存在于膠質細胞和雪旺氏細胞及其腫瘤中，后來的研究證明：S-100也存在于一些非神經源性的正常細胞和腫瘤中，如脂肪組織、脂肪瘤，偶見于脂肪肉瘤；軟骨細胞、軟骨瘤以及一部分軟骨肉瘤等。幾乎所有的黑色素瘤S-100（+）。S-100蛋白染色強度與瘤細胞的分化程度關系不大。在判斷S-100免疫組化結果時應注意幾點：（1）S-100蛋白可在一些非神經源性細胞中表達，包括低分化癌，因此在神經系統腫瘤的診斷時應考慮到這點；（2）S-100蛋白陽性定位在一些細胞中可為胞漿，一些細胞

13、為胞核，另一些細胞為胞漿/胞核共存；（3）由于S-100蛋白敏感性高，特異性差，所以在診斷上應用受到限制。4.神經元特異性烯醇酶NSE：原先認為NSE只存在于神經元中，現已證明，除神經元外，NSE也廣泛存在于各種正常的神經內分泌細胞和許多相應的神經內分泌腫瘤中，包括不同部位的類癌、甲狀腺髓樣癌、嗜鉻細胞瘤、副節瘤、胰島細胞瘤、垂體腺瘤、肺的小細胞癌和皮膚的Merkel癌。而雪旺氏瘤、神經纖維瘤和成神經細胞瘤（-）。NSE（+）表達為胞漿彌漫性著色。現有的資料表明，NSE可在平滑肌、肌上皮細胞、腎小管細胞、淋巴細胞、支氣管上皮細胞和型肺泡細胞中表達，因此NSE的特異性引起懷疑。在判斷NSE免疫組

14、化結果時應注意幾點：（1） 非神經元性腫瘤也有NSE（+）表達，包括膠質瘤、腦膜瘤、雪旺氏瘤、脈絡叢乳頭狀瘤、神經瘤、乳腺纖維腺瘤、乳腺癌和腎細胞癌等；（2） NSE在神經病理學中的診斷價值應根據各種特殊病變加以認識；（3） 雖然NSE在神經源性腫瘤的表達比神經纖維絲蛋白NF更為常見，但不能作為中樞神經系統腫瘤的特異性標記物；（4） 由于NSE特異性差，因此不能單獨使用，應與其他相應的標記物聯合使用。（5） 原始的神經內胚層來源的腫瘤常呈（-）。5.突觸素Syn：是一種突觸前酸性轉膜蛋白，分子量為38ku。SY可在許多神經源性和神經內分泌腫瘤中表達，如髓母細胞瘤、成神經細胞瘤、嗜鉻細胞瘤、副節

15、瘤、節細胞神經瘤、垂體腺瘤、甲狀旁腺瘤、肺和胃腸道類癌、胰島細胞瘤、甲狀腺髓樣癌等大多數神經內分泌腫瘤。在髓母細胞瘤的IHC中，SY比NF更為敏感。同時，SY比嗜鉻素A更敏感，比NSE更特異。對胰島細胞及其腫瘤的診斷比嗜鉻素A更可靠。目前尚未發現SY在非神經源性腫瘤和非神經內分泌腫瘤表達的報道。在判斷Syn免疫組化結果時應注意幾點：（1） 冰凍切片效果最好，福爾馬林固定、石蠟包埋的組織也可，但固定時間不宜過長，一般不超過24h；（2） 如果突觸素含量低，用PAP法和ABC法可能檢測不出（+）結果，最好使用S-P法或與其相似的檢測系統。6.嗜鉻素A/CgA：是一組分子量為68-120ku 的可溶

16、性酸性蛋白。存在于各種正常神經內分泌細胞及其腫瘤中，包括垂體腺瘤、胰島細胞瘤、嗜鉻細胞瘤、甲狀腺髓樣癌、甲狀旁腺瘤和類癌等。目前認為，CgA和SY是對神經內分泌腫瘤特異的標記物。在判斷CgA免疫組化結果時應注意幾點：(1) CgA（+）表達不能說明腫瘤的組織來源?(2) CgA的敏感性不如NSE，在部分神經內分泌腫瘤中，如胰島細胞瘤、生長抑素瘤、分泌催乳素和皮質醇的垂體腺瘤可以不表達；(3) CgA（-）不能排除激素細胞的存在和神經內分泌腫瘤的診斷；(4) 肺小細胞癌、皮膚的Merkel細胞瘤和成神經細胞瘤，CgA的（+）程度不一，灶性表達或（-），只能說明這些腫瘤細胞中含分泌顆粒少而已。（四

17、）淋巴造血細胞的標記在全身各系統疾病的病理診斷中，淋巴組織的病理診斷難度是最大的。在目前應用的單克隆抗體中，淋巴細胞抗體的種類最多，下面介紹幾個常用的：1.白細胞共同抗原LCA：？2. B細胞常用的標記：CD20（L26）：90%B細胞NHL、少數T細胞NHL均陽性，非造血細胞來源的腫瘤（胸腺瘤除外）陰性。3.T淋巴細胞常見標記：CD45RO：陽性細胞見于T細胞、有些B細胞、單核細胞、粒細胞。（五）腫瘤相關抗原：1.癌胚抗原CEA：最先被認為是結腸癌的特異性抗原，隨著研究的深入，發現許多上皮性腫瘤尤其是內胚層來源的腫瘤如胃腸道癌、肺癌、胰腺癌、膽管癌和乳腺癌等均可見CEA表達；同時一些正常的上

18、皮細胞也有表達。在判斷CEA免疫組化結果時應注意幾點：（1） CEA（+）不能作為確認腫瘤的組織來源的標記；（2） 到目前為止，CEA不能用作良、惡性上皮性腫瘤的鑒別診斷；（3） 不管是單克隆還是多克隆抗CEA抗體，在某些腫瘤中可表現有非特異性染色，應注意識別。2.甲胎蛋白 AFP：AFP是由胚胎卵黃囊細胞、胚胎肝細胞和胎兒腸道細胞合成的一種糖蛋白。臨床上常以血中AFP水平增加作為原發性肝細胞癌診斷的重要的指標之一。AFP在肝癌的（+）表達只占60%+-，而一些非腫瘤性的肝細胞（如肝硬化和肝炎）以及轉移性腫瘤的癌旁肝細胞也有AFP表達。在生殖細胞腫瘤中，內胚竇癌和混合性生殖細胞腫瘤，以及胚胎癌

19、中的卵黃囊成分可見AFP（+）表達。在判斷AFP免疫組化結果時應注意幾點：（1） AFP（-）不能排除肝細胞癌的診斷；（2） 發生在骶尾部、腹膜后、縱隔或松果體的一些生殖細胞腫瘤，在常規HE染色中常診斷未分化癌，因此有必要作AFP或HCG免疫組化染色，排除有無生殖細胞腫瘤的可能。（3） 有報道一些非肝性腫瘤如肺癌、乳腺癌和胃腸道癌，尤其是胃肝樣腺癌，AFP可呈（+）。3 前列腺特異性抗原 PSA：PSA是前列腺上皮細胞特有的一種分子量為33ku的糖蛋白，它存在于正常、增生和腫瘤性前列腺上皮細胞中。在判斷PSA免疫組化結果時應注意幾點：（1） PSA不能作為良、惡性前列腺病變的診斷標記；（2）

20、少數前列腺癌PSA（-），因此多與PAP（前列腺酸性磷酸酶）同時檢測，以提高診斷準確率。二、激素類：（一） 雌激素受體ER和孕激素受體PR：ER和PR與乳腺癌預后和內分泌治療的關系已得到公認，目前已成為乳腺癌的常規檢查項目。一般來說，ER和PR（+）的腫瘤緩解率高，復發率低，存活時間長。即使ER和PR中只有一個（+）的病人，其預后也好于兩個受體全（-）的病人。（二） 激素調節蛋白PS2：？三、其他類（一） 細胞增殖活性的評價：一般認為腫瘤的增殖活性越高，侵襲性就越強。傳統的評價方法缺乏客觀性。目前應用較為普遍的有用免疫組化等方法檢測與細胞增殖有關的核抗原。Ki-67、PCNA均是與細胞增殖有關

21、的核抗原，處于靜止期（G0期）的細胞無Ki-67和PCNA。Ki-67和PCNA免疫組化染色均顯示核陽性，通常以標記指數（即陽性細胞數占總數的百分比）來區分細胞增殖活性的高低。一般約定，陽性細胞大于？小于25%（+），25%-50%（+），50%-75%（+），大于75%（+）。（二）癌基因1.c-erbB-2(Her-2/neu) cerB-2是與乳腺癌關系最密切的一種癌基因。在不同類型乳腺癌中的陽性率差別很大。陽性率較高的類型有浸潤性導管癌（22%）、而浸潤性小葉癌和小管癌陽性率很低，僅為7%。正常乳腺上皮、間質細胞和乳腺良性病變一般不表達c-erbB-2。最近有人發現，c-erbB-2陽

22、性的腫瘤對常規化療不敏感，但對Hercetin的治療有效。C-erbB-2與乳腺癌預后的關系尚有爭議，在淋巴結有轉移的病人，c-erbB-2陽性通常預示預后不良，但在無淋巴結轉移的病人中，c-erbB-2與預后的關系尚不明確。3. Bcl-2 Bcl-2最先是在造血系統中發現的一個原癌基因，它通過抑制細胞的死亡而參與腫瘤的發生，Bcl-2的基因產物有阻斷細胞調亡的作用近年來的研究發現，Bcl-2基因及其產物在許多正常組織及癌變組織中均有表達。Bcl-2的免疫組化定位在濾泡性淋巴瘤與反應性淋巴濾泡增生的鑒別診斷中具有重要的價值。反應性淋巴中，淋巴帽區Bcl-2強陽性，但生發中心區幾乎為陰性；而濾

23、泡性淋巴瘤呈現相反的反應類型，即惡性濾泡呈強陽性，其周圍細胞弱給臨床作宣傳最好分成大類進行介紹：1，腫瘤的分類和低分化惡性腫瘤的鑒別診斷.（Classification and diagnosis of poorly differentiated malignant tumors） 2，鑒別轉移癌的原發部位（Identification of the primary site of origin of a metastatic tumor. ）3，淋巴瘤和白血病的分類（Classification of lymphomas and leukemias.）4，確定感染源（Identification of infectious agents. ）5，預后因素分析（Assessment of prognostic factors.） 與臨床治療與判斷預后有關。包括：（1）乳腺癌ER/PR c-erbB-2檢測（2）各種腫瘤細胞耐藥性檢測，Pgp, TopoII, GST-Pi等檢測用于指導臨床個性化的化療（3）細胞增殖活性的判斷Ki67, PCNA檢測增加的內容：二、激素類：（一） 雌激素受體ER和孕激素受體PR：ER和PR與乳腺癌預后和內分泌治療的關系已得到公認，目前已成為乳腺癌的常規檢查項目。一般來說，ER和PR（+）的腫瘤緩解