1、題目：浮游菌的測試規程編號：SOP-09-106修訂人：修訂日期：由口月日版本：審核人：審核日期：由口月日頒發部門：質量保證部批準人：批準日期：由口月日生效日期：年月日分發部門：質量保證部、中心化驗室浮游菌的測試規程1 目的闡述潔凈室（區）中塵埃粒子的測試方法和就塵埃粒子而言的空氣潔凈度的記錄。2 范圍適用于潔凈室（區）中塵埃粒子潔凈度的監測和潔凈度等級的驗證。3 職責質監員負責潔凈區（室）塵埃粒子的測試質量保證部經理負責監督。4 內容4.1 術語和定義下列術語和定義適用于本規程。4.1.1 菌落 colonyformingunits微生物培養后，由一個或幾個微生物繁殖而形成的微生物集落，簡稱

2、 CFU 通常用個數表示。4.1.2 浮游菌 airbornemicrobe用本規程提及的方法收集懸浮在高空氣中的活微生物顆粒。通過專門的培養基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數。4.1.3 浮游菌濃度 airbornemicrobeconcentration單位體積空氣中含浮游菌菌落數的多少，以技數濃度表示，單位是/m3或個/L4.1.4 糾偏限度 actionlevels對于受控的潔凈室（區），由使用者自行設定微生物含量等級。當檢測結果超過該等級時，應啟動檢測程序對該區域的微生物污染情況立即進行跟蹤。4.1.5 警戒線度 alertlevels對于受控的潔凈室（區），由使用者自行設定一

3、個微生物含量等級，從而給定了一個與正常狀態相比最早警戒的偏差值。當超過該最早警戒的偏差值時，應啟動保證工藝或環境不受影響的程序及相關措施4.2 測試方法4.2.1方法提要本規程采用的方法是計數濃度法。 即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養菌（選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養基），經若干時間和適宜的生長條件讓其繁殖到可見的菌落計數，以判定該潔凈室的微生物濃度。4.2.2人員的職資及培訓潔凈室 （區） 的測試人員應進行本專業的培訓并獲得相應的資格后才能才能履行對潔凈室（區）測試的職責，其中包含涉及的衛生知識和基本的微生物知識。潔凈室（區）的測試人員應選擇與生產操作的空氣潔凈度級別要求

4、相適應的穿戴方式，外面的衣服不能帶進 D 級以上的區域。4.2.3儀器、輔助設備和培養基選擇合適的浮游菌采樣器，包括采用無油的抽氣泵，較低的氣流流速和較大的采樣流量，以保證培養基表面的水分布被吹干。本測試需要具備儀器、輔助設備和培養基如下：a）浮游菌采樣器；b）培養皿；c）高壓消毒鍋；d）培養基；e）恒溫培養箱；4.2.4 浮游菌采樣器原理浮游菌采樣器一般采用撞擊法機理， 可分為夾縫式采樣器、 離心式或針孔式采樣器。夾縫式采樣器由內部風機將氣流吸入，通過采樣器的夾縫式平板，將采集空氣噴射并撞擊到緩慢的平板培養基表面，附著的活微生物粒子經培養后形成菌落。離心式采樣器由于內部風機的高速旋轉，氣流從

5、才樣器的前部進入后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時間撞擊到專用的固型培養條上， 附著活的微生物粒子經培養后形成菌落。針孔式采樣器是氣流通過一個金屬蓋吸入，蓋子上是密集的經過機械加工的特制小孔，通過風機將收集到的細小的空氣直接撞擊到平板培養基表面，附著的活物微生物粒子經培養成型后形成菌落。4.2.5測試要點4.2.5.1必須按照儀器的檢定周期，定期對測試儀器作檢定。應使用檢定合格，并且使用有效期內的儀器。4.2.5.2測試儀器未進入被測區域時，若必需，則先清洗表面吧，或在相應的潔凈室內準備和存放（用保護罩或其他適當地外罩保護儀器）。4.2.5.3在 A 級潔凈室內用紙時，

6、上面應蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在A 級的潔凈室內不能用鉛筆的橡皮。4.2.5.4使用測試儀器時應嚴格按照說明書操作。4.2.5.4.1儀器開機，預熱到穩定后，方可按說明書的規定對儀器進行校正，同時檢查采樣流量，并根據采樣量設定時間。4.2.5.4.2采樣口必須用使用便于消毒及化學性能穩定的材料制造。4.2.5.4.3采樣管嚴禁滲漏，內壁應光滑。4.2.5.4.4采樣管的長度應根據測點的高度定，盡量減少彎曲。4.2.6 培養皿4.2.6.1一般采用（|）90m 佛 15mmlt格的培養皿。可根據所選用采樣器選擇合適的培養皿。4.2.6.2離心式采樣器采用專用的固型培養條4.2.7 培養基大豆

7、酪蛋白瓊脂培養基（TSA 或沙氏培養基（SDA 或其他用戶認可并經驗4.2.8 恒溫培養箱必須定期對恒溫培養箱進行校驗。4.2.9 測試步驟；4.2.9.1測試前儀器、培養皿表面必須嚴格消毒。4.2.9.1.1采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于 A 級潔凈室的采樣器官預先放在被測房間內。4.2.9.1.2用消毒劑擦凈培養皿的外表面。4.2.9.1.3采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內外面，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤。4.2.9.1.4采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的外壁及內壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉并晾干。4.

8、2.9.1.5采樣者應穿戴與被測潔凈區域相應的工作服，在轉盤上放入或調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒或帶無菌手套操作。4.2.9.1.6采樣儀器經消毒后先不放入培養皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發，時間不少于 5min,并檢查流量并根據采樣量調整設定時間。4.2.9.1.7關閉浮游采樣器，放入培養皿，蓋上蓋子。4.2.9.1.8置采樣口于采樣點后，開啟浮游菌采樣器進行采樣。4.2.10 培養4.2.10.1全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。4.2.10.2采用大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA 配制的培養經采樣后，在30c35c 培養箱中培養，時間不得少于 2d;采用沙氏培

9、養基（SDA）配制的培養皿經采樣后，在 20c25c 培養箱中培養,時間不少于 5do4.2.10.3每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。可每批選定 3 只培養皿作對照培養。4.2.11 菌落計數4.2.11.1用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數、標記或在菌落計數器上點計，然后用 510 倍放大鏡檢查，有否遺漏。4.2.11.2若平板上有 2 個或 2 個以上的菌落重疊，可分辯時仍以 2 個或2 個以上菌落計數。4.2.12 注意事項4.2.12.1使用前應仔細檢查每個培養皿質量，培養基及培養皿有變質、破損或污染的不能用使用的。4.2.12.2對培養基、培養條件及其他參數作詳細記錄

10、。4.2.12.3由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養皿面或真面仔細觀察， 不要有遺漏計培養皿邊緣生長的菌落， 并須要菌菌落或培養基沉淀的物區別，必要時用顯微鏡鑒別。4.3 測試規則4.3.1測試條件在測試之前要，要對潔凈室（區）相關參數進行預先測試，這類測試將會提供測試懸浮粒子的環境條件，例如：這種預先測試或可包括：a）溫度和相對濕度的測試。潔凈室（區）的溫度和相對濕度應與其生產及工藝要求相適應（無特殊要求時，溫度控制在 18c26C,相對濕度控制在 45%-65%同為宜）。同時滿足測試儀器的使用范圍；室內送風量或風速的測試的測試，或壓差的測試；高效過濾器的泄漏測試4.3.2

11、測試狀態靜態和動態兩種狀態均可進行測試。靜態測試時，室內測試人員不得多于 2 人。浮游菌測試前，被測定潔凈室（區）由用戶決定是否需要預先消毒。測試時應標明測試時所采用的狀態和室內測試人員數。4.3.3測試時間4.3.3.1在空態或靜態 a 測試時，對單向流潔凈室（區）而言，測試宜在凈化空氣調節系統正常運行時間不少于 10min 后開始。對非單向流潔凈室（區），測試宜在凈化系統正常運行時間不少于 30min 后開始。在靜態 b 測試時，對單向流潔凈是（區），測試官在生產操作人員撤離現場并經過 10min 自凈后開始；對非單向潔凈室（區），測試官在生產操作人員撤離現場并經過 20min 自凈后開始

12、。4.3.3.2在動態測試時，則須記錄生產開始的時間以及測試時間。4.3.4浮游菌濃度的計算4.3.4.1采樣點數量及其布置4.3.4.1.1最少采樣點數目浮游菌的采樣點位置可參照 GB/T16292-2010O4.3.4.1.2采樣點的位置浮游菌的采樣點位置可參照 GB/T16292-2010Oa）工作區測點位置離地 0.81.5m 左右（略高于工作面）b）送風口測點位置離開送風面 30cm 左右。c）可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。4.3.4.2最小采樣量浮游菌每次最小采樣量見表 1。表 1 最小采樣量潔凈度級別米作*L/次A1000B500C100D1004.3.4.3采樣次數

13、每個采樣點一般采樣一次。4.3.4.4采樣注意事項4.3.4.4.1對于單向流潔凈室（區）或送風口，采樣器采樣口朝應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區），采樣口向上。4.3.4.4.2布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口4.3.4.4.3采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側，并盡量少走動。4.3.4.4.4采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染。4.3.4.4.5培養皿在用于檢查時，為避免培養皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行陰性對照試驗，每次或每個區域取 1 個對照皿，與采樣皿同法操作但不得暴露采樣皿，然后與采樣后的培養皿（TSA 或 SDA 一起放入培養箱內培

14、養，結果應無菌落生長。4.3.5記錄測試報告中應包含以下內容測試者的名稱和地址，測試日期；b）測試依據c）試潔凈室（區）的平面位置（必要時標注相鄰區域平面位置）；d）有關測試儀器及其測試方法的描述：包括測試環境條件，采樣點數目及布置圖，測試次數，采樣流量，或可能存在的測試方法的變更，測試儀器的檢定證書等；若為動態測試，則還應記錄現場操作人員數量及位置，現場運轉設備和數量和位置。e）結果：包括所有統計計算資料。4.3.6結果計算4.3.6.1用計數方法得出各個培養皿的菌落數。4.3.6.2每個測點的浮游菌平均濃度的計算，見式（1）。浮游菌平均濃度（個/m3）=菌落數/采樣量（1）示例 1:某測點

15、采樣量為 400L,菌落數為 1,則：浮游菌平均濃度=1/0.4=2.5 個/m3示例 2:某測點采樣量為 2m3,菌落數為 3,則：浮游菌平均濃度=3/2=1.5 個/m34.3.7結果評定4.3.7.1每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定的評定標準中關于細菌濃度的界限。4.3.7.2在靜態測試時，若某測點的浮游菌平均濃度超過評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結果均合格才能判為符合。4.3.8日常監控對于浮游菌的監控，宜設定糾偏限度和警戒限度沿單一方向呈平行流線并且與氣流方向垂直的斷面上風速的氣流，以保證潔凈室（區）的微生物濃度受到控制。應定期以檢查微生物負荷以及消毒劑的效力，并非作傾向

16、分析。靜態和動態的監控都可以采用該方法。對于浮游菌的取樣頻率次，如果出現下列情況應考慮應修改，在評估以下情況，也應確一定其他項目的檢測頻次：一連續超過糾偏和警戒限度；一停工時間比預計延長；一生產期間，空氣凈化系統進行任何重大的維修；一常操做記錄放映出傾向性的數據；一消毒規程的改變；一生物污染等；當生產設備有重大維修或增加設備時；當潔凈室（區）結構區域分布有重大變動時附錄A（規范性附錄）潔凈室（區）采樣點布置A.1 潔凈室（區）采樣點布置宜力求均勻，避免采樣點在局部區域過于稀疏卜列多點采樣的采樣點布置圖示可作參考（見圖 A.1）.圖 A.1 平面采樣點布置圖A.2A 級單向流區域，潔凈工作臺或局部空氣凈化設施的采樣點宜布置在正對氣流方向的工作面上