1、針?biāo)幒嫌么碳ば嵊X(jué)系統(tǒng)對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶功能及海馬自由基系統(tǒng)的影響                     作者：牛文民 劉智斌 楊曉航 牛曉梅 王淵【摘要】  目的探討針?biāo)幒嫌么碳ば嵊X(jué)系統(tǒng)對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶功能及海馬自由基系統(tǒng)的影響作用。方法成年SD雄性大鼠48只，體重（300±10）g。隨機(jī)分為正常對(duì)照組、VD模型組、VD嗅球損毀模型組、嗅三針組、丁香酚刺激組和針?biāo)幒嫌媒M，

2、每組8只。制作VD大鼠模型和VD并損毀嗅球大鼠模型，分別通過(guò)嗅三針電刺激、丁香酚刺激、針?biāo)幒嫌梅椒ǎ瑴y(cè)試大鼠水迷宮學(xué)習(xí)記憶能力并測(cè)定海馬MDA含量、GSHPx和SOD活性。結(jié)果定位航行試驗(yàn)顯示，平均逃避潛伏期和平均游泳路程比較，正常對(duì)照組明顯短于VD模型組（P<0.01）；嗅三針組、丁香酚刺激組和針?biāo)幒嫌媒M均明顯短于VD模型組（P<0.01）；針?biāo)幒嫌媒M短于嗅三針組、丁香酚刺激組（P<0.05）；嗅三針組與丁香酚刺激組相比較，其差異無(wú)顯著性意義（P>0.05）；VD模型組與VD嗅球損毀模型組相比較，其差異無(wú)顯著性意義（P>0.05）。海馬自由基系統(tǒng)檢測(cè)顯示：與正常

3、對(duì)照組比較，VD模型組海馬MDA含量顯著增高（P<0.01），而海馬GSHPx和SOD活性明顯降低（P<0.01）；與VD模型組比較，嗅三針組、丁香酚刺激組和針?biāo)幒嫌媒M海馬MDA含量顯著降低（P<0.01），而海馬GSHPx和SOD活性顯著增高（P<0.01）；針?biāo)幒嫌媒M與嗅三針組、丁香酚刺激組比較，海馬MDA含量降低（P<0.05）。結(jié)論嗅三針和丁香酚均能夠顯著增強(qiáng)VD大鼠學(xué)習(xí)記憶功能、能降低海馬MDA的含量、并且提高海馬GSHPx和SOD的活。 【關(guān)鍵詞】  針?biāo)嶢bstract：ObjectiveTo explore the effect of c

4、ombined acupuncture and medicine on learningmemory abilities，and free radical system of hippocampus in vascular dementia（VD）rats.MethodsThe 48 Sprague Dawley rats were randomly divided into control（1），VD model（2），VD plus removed olfactory bulb model（3）and XIU Three Needles（4），Eugenol（5），combined acu

5、puncture and medicine（6）groups.Morris maze tests were conducted for valuating the learning and memory abilities.The contents of MDA，SOD and GSHPx activity of hippocampus were detected.ResultsIn comparison with group 1，the average escape latency and travel distance prolonged significantly in group 2.

6、In comparison with group 2，it shortened remarkably in groups 4 and 5.No significant differences were found between groups 1 and 2.In comparison with group 6，it prolonged in groups 4 and 5.No significant differences were found between them.The MDA content of hippocampus in VD model group was higher t

7、han that of control group（P<0.05）；The SOD and GSHPx activity group 2 were lower than group 1；the MDA in group 2 was higher than that of groups 4 and 5；The SOD and GSHPx activity of hippocampus in VD model group were lower than those of groups 4 and 5.No significant differences were found between

8、groups 2 and 3.The MDA in group 6 was lower than that of groups 4 and 5；the SOD and GSHPx activity in group 6 were higher than groups 4 and 5.No significant differences were found between groups 4 and 5.ConclusionThe XIU Three Needles and Eugenol increased the learningmemory abilities of VD rats，dec

9、reased MDA，and increased SOD and GSHPx activity of hippocampus.Key words：vascular dementia；olfactory；learningmemory；MDA；SOD；GSHPx；XIU Three Needles；Eugenol；combined acupuncture and medicine         血管性癡呆（Vascular Dementia，VD）是由腦血管疾病因素導(dǎo)致腦組織損害而引起的癡呆綜合征。研究表明，自由基的過(guò)氧化損傷

10、是VD的主要病理機(jī)制之一1。筆者依據(jù)多年來(lái)治療VD的經(jīng)驗(yàn)24，選擇血管性癡呆大鼠作為對(duì)象，探討針?biāo)幒嫌么碳ば嵊X(jué)系統(tǒng)對(duì)VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及海馬自由基系統(tǒng)的影響作用。1  材料和方法1.1  動(dòng)物及分組 成年Sprague Dawley雄性大鼠48只，體重(300±10)g，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常對(duì)照組、VD模型組、VD嗅球損毀模型組、嗅三針組、丁香酚刺激組、和針?biāo)幒嫌媒M，每組8只。1.2  主要儀器 SDQ30雙極射頻電凝器（上海手術(shù)器械廠出品）；Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，（北京現(xiàn)代太極電子有限公司出品

11、）；722型光柵分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠出品）。1.3  大鼠模型制作 按照經(jīng)典的四血管阻斷（4Vesselocclusion，4VO）方法制作血管性癡呆模型5。用10%水合氯醛（0.4ml/100g體重）腹腔注射麻醉大鼠，常規(guī)無(wú)菌操作。頸部背側(cè)后正中切口，暴露第一頸椎橫突孔，電凝燒灼雙側(cè)椎動(dòng)脈，造成永久性閉塞。24h后，頸部腹側(cè)前正中切口，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，用微動(dòng)脈夾可逆性?shī)A閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈5min，共夾閉3次，每次間隔1h。手術(shù)部位施以適量青霉素抗感染，仔細(xì)縫合，常規(guī)飼養(yǎng)。參照陳志蓉報(bào)道的損毀大鼠嗅球的方法6，將VD造模成功的大鼠用水合氯醛麻醉后，固定在立體定位儀上

12、。在大鼠顱頂正中切開皮膚，小范圍分離暴露前囟。在大鼠顱頂正中線位于前囟前面5mm兩側(cè)旁開2mm處，分別鉆兩個(gè)直徑為1mm的小孔。將HS80型電烙鐵的烙頭插入顱內(nèi)，電凝損毀雙側(cè)嗅球。嗅三針組、丁香酚刺激組和針?biāo)幒嫌媒M大鼠均制作VD模型。1.4  實(shí)驗(yàn)方法  實(shí)驗(yàn)時(shí)間為45d。嗅三針穴定位：兩側(cè)迎香及印堂穴。依據(jù)李忠仁教授主編的實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)動(dòng)物選穴標(biāo)準(zhǔn)7，“迎香”穴：大鼠鼻孔外側(cè)上端，有毛與無(wú)毛交界處；“印堂”穴：大鼠兩眼眶上緣中點(diǎn)連線與正中線交點(diǎn)。操作：選用“華佗牌”不銹鋼針，30號(hào)0.5寸毫針。迎香穴向內(nèi)上方斜刺0.3cm，印堂穴向鼻根部平刺0.3cm；電針儀：G6805電針

13、儀，上海醫(yī)療儀器廠出品；刺激參數(shù)：疏密波，頻率80100Hz，刺激強(qiáng)度以保持針刺局部輕微抖動(dòng)為度（電流強(qiáng)度：13mA，電壓：13V）。時(shí)間：留針10min，持續(xù)電刺激，1次/d。5d為1個(gè)療程，休息2d，共進(jìn)行6個(gè)療程。操作：制作1個(gè)僅留有2個(gè)小通氣孔的實(shí)驗(yàn)盒，在實(shí)驗(yàn)盒底部鋪1薄層藥棉，將丁香酚溶劑均勻地噴灑在藥棉上，在其上放置1個(gè)金屬網(wǎng)架。待藥味充分彌散在整個(gè)實(shí)驗(yàn)盒時(shí)，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放在金屬網(wǎng)架上，然后加蓋封閉。10min后，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取出。1次/d，5日為1個(gè)療程，休息2d，共進(jìn)行6個(gè)療程。丁香酚試劑購(gòu)自江西樟樹市本草天然藥用油廠，純度99%。先行嗅三針刺激再行丁香酚刺激。同針?biāo)幒嫌媒M1次/d

14、采取與以上3組相同的捉拿固定，但不施加任何干預(yù)措施。1.5  檢測(cè)指標(biāo) 1.6  統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS12.0軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示，采用單因素方差分析、組間均值進(jìn)行t檢驗(yàn)。2  結(jié)果2.1  Morris水迷宮定位航行試驗(yàn)結(jié)果  見表1。表1  各組大鼠Morris水迷宮定位航行試驗(yàn)結(jié)果比較（略）2.2  各組大鼠海馬MDA含量及GSHPx、SOD活性的比較結(jié)果顯示  見表2。表2  各組大鼠海馬MDA含量及GSHPx、SOD活性的比較（略）3  討論 &#

15、160;  血管性癡呆（VD）屬于中醫(yī)“善忘”、“呆病”、“癡證”等范疇。依據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論，VD是由于心腦血管病變，因缺血性或出血性腦組織損害所導(dǎo)致的認(rèn)知功能障礙，是老年癡呆的常見類型。國(guó)內(nèi)外有關(guān)腦血管疾病的臨床及實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，自由基的過(guò)氧化損傷是VD主要病理機(jī)制之一1。    現(xiàn)有的研究結(jié)果表明，自由基是VD腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞損傷的主要因素。自由基對(duì)學(xué)習(xí)記憶有明顯的損傷作用，它對(duì)智力的損害主要表現(xiàn)為對(duì)細(xì)胞膜上不飽和脂肪酸的破壞和過(guò)氧化以及MDA的產(chǎn)生。MDA是一種大分子交聯(lián)劑，它能交聯(lián)蛋白質(zhì)和核酸，直接影響生物信息的傳遞、轉(zhuǎn)錄和復(fù)制，表現(xiàn)為記憶及智力下降

16、。SOD和GSHPx均為機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化金屬酶類，它們作為機(jī)體內(nèi)在抗氧化體系，能夠直接清除自由基，免除其過(guò)氧化損傷9。    本研究結(jié)果顯示，嗅三針和丁香酚均能夠明顯增強(qiáng)VD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，并且能提高VD模型大鼠海馬SOD和GSHPx活性同時(shí)降低MDA的含量。然而，對(duì)于VD損毀嗅球模型大鼠，嗅三針和丁香酚均未能增強(qiáng)其學(xué)習(xí)記憶能力也沒(méi)有明顯影響海馬SOD、GSHPx活性及MDA的含量。這表明嗅三針和丁香酚均對(duì)于VD大鼠的療效是通過(guò)嗅覺(jué)傳導(dǎo)路對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生作用的，這恰好與筆者先前的研究結(jié)果相一致2。    本研究證實(shí)了嗅三針和

17、丁香酚均對(duì)VD具有確切的治療作用，其作用機(jī)理與調(diào)節(jié)海馬自由基系統(tǒng)密切相關(guān)，針?biāo)幒嫌眯Ч@，其療效的發(fā)揮有賴于嗅覺(jué)傳導(dǎo)路的完整性。【參考文獻(xiàn)】  1牛文民，李忠仁.缺血性腦血管病的自由基損傷病原學(xué)及抗氧化治療的研究進(jìn)展J.上海針灸雜志，2005，24（1）：4345.2劉智斌，牛文民，楊曉航，等.嗅三針治療血管性癡呆的隨機(jī)對(duì)照研究J.針刺研究，2008，33（2）：131134.3Niu Wenmin.Clinical study on treatment of Vascular Dementia with Scalp Acupuncture.JJ Acupuncture and Tuina，2008，6（1）：2425.4劉智斌，牛文民，楊曉航，等.頭部發(fā)際區(qū)排針?lè)ㄖ委熝苄园V呆療效觀察J.中國(guó)針灸，2007