1、聰液對癡呆大鼠模型腦內淀粉樣前體蛋白基因表達的影響【摘要】 目的 探討呆聰液對癡呆大鼠模型腦內淀粉樣前體蛋白(APP)基因表達的影響。方法 22月齡SD大鼠采用海人酸破壞腦基底核法造成學習和記憶功能障礙的癡呆動物模型。造模后的大鼠隨機分為癡呆模型組、呆聰液(低、中、高劑量)組，同時設正常對照組，每組10只。呆聰液低、中、高劑量組每日呆聰液灌胃(低5 g/kg、中10 g/kg、高20 g/kg)，癡呆模型組和正常對照組每天用生理鹽水(10 ml/kg)灌胃，共1個月。通過水迷宮法和反轉錄聚合酶鏈反應觀察呆聰液對癡呆模型大鼠學習記憶能力和腦內APP基因表達的影響。結果 老齡癡呆模型大鼠

2、學習記憶能力下降，腦內APP基因表達增強。呆聰液高、中、低劑量組能明顯提高學習記憶能力，降低腦內APP mRNA含量，并有一定的量效關系，與癡呆模型組比較差異有顯著性(P【關鍵詞】  呆聰液;海人酸;動物癡呆模型;淀粉樣前體蛋白;基因表達研究表明，老年癡呆患者都有腦底動脈硬化、海馬區額葉老年斑及神經元纖維纏結的病理變化。中樞meynert基底核神經元缺失伴膽堿能神經元功能障礙，海馬區膽堿乙酰轉移酶活性降低，可出現不同程度的腦萎縮。因此，中樞膽堿能神經功能障礙與癡呆程度密切相關。為進一步闡明呆聰液治療老年癡呆的作用機制，本文在研究呆聰液對老齡鼠癡呆模型腦M受體及免疫功能影響的基礎上1，

3、探討呆聰液對老齡鼠癡呆模型腦M受體基因及β淀粉樣蛋白(Aβ)受體基因表達的影響。1 材料與方法1.1 動物 選用22月齡SD大鼠50只，體重250300 g，雌雄兼用，由山東大學醫學院動物試驗中心提供。1.2 方法淀粉樣前體蛋白(βAPP) mRNA，βactin APP上游引物：(5′3′)AATCCTGCAGTACTGCCAAG,下游引物：(5′3′)TGGCAACAGTACTGCCAAG;βactin上游引物：(5′3′)CAACTTTACCTTGGCCACTACC，

4、下游引物：(5′3′)TACGACTGCAAACACTCTACACC，產物150 bp。RTPCRAPP的PCR循環條件：94變性30 s，62退火30 s，72延伸1 min;βactin的PCR循環條件為94變性30 s，55 退火30 s，72延伸1 min，完成35個循環后，取PCR產物8 μl在1.5%的瓊脂糖凝膠上電泳，5 V，45 min，用自動成像儀(美國FOTODYNE公司)觀察拍照。重復實驗的電泳圖譜用STORM 860熒光掃描分析儀(美國DYNAMIC公司)分析，相對表達量根據各電泳區帶與內對照βactin的面積之比來計算

5、。以βactin為內參照，按公式βAPP/βactin計算βAPP mRNA水平。1.3 統計學處理 數據以x±s表示，使用SPSS10.0統計軟件處理。2 結 果癡呆模型組βAPP mRNA的表達量(1.551±0.054)較對照組(1.483±0.005)明顯升高(P0.05)，呆聰液低、中、高各劑量組βAPP mRNA表達量分別為1.476±0.007、1.380±0.005、1.382±0.004，與癡呆模型組比較明顯降低(P0.05)。RTP

6、CR擴增產物瓊脂糖電泳結果顯示呆聰液中劑量組效果最佳(圖1)。1.Marker 2.空白對照組 3.癡呆模型組 4.低劑量中藥組 5.中劑量中藥組 6.高劑量中藥組圖1 RTPCR擴增產物瓊脂糖電泳圖3 討 論老年癡呆是一種記憶能力減退、認知功能障礙、行為異常為特征的腦退行性疾病。近年研究發現，環境和基因突變導致APP代謝異常，在神經元細胞外產生Aβ沉積，并造成神經元損傷2。Lin等3研究發現，大腦皮層膽堿能系統功能的完整性對保持正常的APP 水平和調節APP代謝有重要意義。APP 水平的升高與膽堿能活性下降有關，對那些大腦膽堿能系統核基質受損的大鼠用N甲基D天門冬氨酸鹽處理，能提高

7、APP的mRNA水平和合成APP的能力。許多研究還證實，老年癡呆與神經細胞的氧化應激有關，Aβ可以增加活性氧(reactive oxygen species,ROS)的產生4,ROS又反過來促進氧化應激反應，產生脂質過氧化物，引起蛋白質和DNA的功能改變，最終導致神經細胞死亡5。為了進一步研究老年癡呆病的發病機制及臨床中藥混合制劑呆聰液的作用機制，本研究利用海人酸制備老齡大鼠癡呆模型進行了中藥呆聰液對癡呆大鼠模型腦內βAPP基因表達影響的探討，結果顯示癡呆模型組能明顯提高腦內βAPP基因表達水平，使學習記憶能力顯著下降。中藥呆聰液能顯著改善老齡大鼠的記憶力和學習功

8、能。呆聰液的三個不同劑量組雖然都能抑制腦內βAPP基因表達水平，但是中劑量組效果最佳。在改善學習記憶能力的同時，抑制了βAPP基因的轉錄，降低了βAPP mRNA的含量，并表現出一定的量效關系。【參考文獻】  1 岳啟安，趙淑梅，高敬宗，等.呆聰液對老齡大鼠癡呆模型腦M受體作用的實驗研究J.中國中西醫結合雜志，2000;20(11)：8468.2 劉建輝.早老性癡呆病淀粉樣蛋白A研究進展J.生物醫學工程學雜志，2003;20(2)：3714.3 Lin L,Georgievska A,Mattson A,et al.Cognitive changes a

9、nd modified processing of amyloid precursor protein in the cortical and hippocampal system after cholinergic synapse loss and muscarinic receptor activationJ.Proc Natl Acad Sci USA,1999;96(21):12108.4 Butterfield DA,Martin L,Carney JM,et al.Amyloid peptide displays H2O2like reactivity towards aqueous Fe2+,nitroxide spin probes and synaptosomal membrane proteinsJ.Life Sci,1996;58:217.5 Beckman JS,Chen