1、性別對超重人群皮下脂肪脂聯素mRNA表達的影響【摘要】 目的 探討性別因素對超重人群皮下（SC）脂肪組織脂聯素（APN）mRNA（SA mRNA）表達的影響。方法 選取22例男性超重患者體質量指數（BMI）27 kg/m2,OBM組、26例女性超重（BMI25 kg/m2,OBF組）以及40例正常體質量者（BMI<25 kg/m2,男性為NM組，女性為NF組），實時熒光定量PCR測定腹部SA mRNA的表達，同時測定血糖血清膽固醇(TC)、甘油三酯（TG）、胰島素水平等生化指標。結果 在超重人群中，OBF組的SA mRNA明顯高于OBM組（P<0.05）；但OBF組SA mRNA仍

2、低于NM組（P<0.01）。SA mRNA與BMI、腰臀比(WHR)、TC和TG水平呈負相關(r=-0.290,r=-0.178,r=-0.247,r=-0.178,P<0.05)。逐步回歸分析以SA mRNA為因變量，BMI,WHR,TC,TG以及HOMA等作為自變量，結果顯示，在整體人群中，BMI和TC入選(R2=0.030,P<0.05,R2=0.169,P<0.01)。在OBM組中，只有TC入選(R2=0.274,P<0.01)。結論 女性超重人群SA mRNA高于超重男性，提示SA mRNA的性別差異主要表現在超重人群中，體重適中者則無此關聯。 【關鍵詞

3、】 脂聯素；超重；性別因素；脂肪組織；基因表達脂肪組織不僅是一個能量儲存器官，也是人體內一個重要的內分泌器官1，可以分泌包括脂聯素（APN）在內的多種活性蛋白因子，發揮不同的生物代謝功能。研究表明，APN具有抗動脈粥樣硬化、抗胰島素抵抗和抗炎等作用，在保護肥胖相關疾病，如心血管疾病和糖尿病中發揮重要作用2。本研究選取2004年9月至2006年2月在天津市公安醫院開腹手術的超重患者，檢測其皮下（SC）脂肪組織APN mRNA（SA mRNA）的表達，并測定一系列相關代謝指標的水平，進一步探討SA mRNA表達水平與性別之間的關系。1 材料與方法1.1 對象脂肪組織來自腹部擇期手術的88例患者，其

4、中，超重人群48例，女性超重（OBF組）患者26例，平均年齡（50.659.39）歲，男性超重（OBM組）患者22例，平均年齡（48.0910.77）歲；正常體質量40例，女性（NF組）22例，平均年齡（43.455.81）歲，男性（NF組）18例，平均年齡（49.786.48）歲。超重人群判斷依據體質量指數（BMI），根據亞洲國家大規模臨床研究的結論，男性BMI27 kg/m2或女性BMI25 kg/m2視為超重。所有研究對象均無糖尿病、高血壓、甲亢、Cushing綜合征及其他內分泌代謝疾病，也無惡性腫瘤、心腎功能衰竭、嚴重肝臟疾患及其他嚴重全身性疾病患者；近期未曾服用減肥及其他影響脂肪代謝

5、藥物。1.2 標本采集測量體重、身高、血壓、腰圍、臀圍，并計算BMI、腰臀比（WHR）。空腹取肘正中靜脈血5 ml，取血前夜禁食12 h，禁水8 h，取血后分離血清，2 h內檢測血糖，同批次檢測其他生化指標：血漿葡萄糖、血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）及胰島素，方法同前3。計算胰島素抵抗指數（HOMAIR）=空腹血糖空腹胰島素/22.5。術中取SC（劍突與臍中點的腹白線處腹壁皮下）脂肪組織約23 g，立即放置液氮中冷凍，并移至-80保存。1.3 實時熒光定量PCR擴增APN基因片段提取SC脂肪組織總RNA，逆轉錄為cDNA，APN及管家基因actin的上下游引物及Taq酶探針的引物見表1

6、。反應體系：10 buffer 2.5 l，10 mmol/L dNTP 2 l，MgCl2 3 l（3 mmol/L），APN正義鏈和反義鏈以及actin正義鏈和反義鏈各2 l，APN和actin引物各1 l，Taq DNA 聚合酶0.75 l（3.75 IU），BSA 各0.25 l，模板1 l，滅菌雙蒸水 10.5 l。反應條件（Roche公司Lightcycler熱循環儀）：95 預變性5 min,95 變性10 s，56 （APN）或58（actin）退火10 s，72延伸12 s，共40個循環。表1 RTPCR引物及探針（略）1.4 統計學方法采用SPSS13.0統計軟件，數據以x

7、s表示，計量資料經正態性檢驗，組間比較應用單因素方差分析，兩兩比較使用LSD法；胰島素和HOMAIR以自然對數轉換值進行分析。采用Kendalls taub秩相關分析。多元線性回歸分析采用逐步回歸法。2 結 果2.1 各組人群間一般情況OBM組和OBF組的體質量、BMI明顯高于NM組和NF組（P<0.01）。OBM組WHR較NM組、NF組明顯增高（P<0.01），并且高于OBF組（P <0.05），OBF組WHR高于NM組和NF組（P<0.05）。OBF組和OBM組的TC和TG均明顯高于NM組和NF組（P<0.05）。OBF組的HOMAIR明顯高于NF組（P<

8、;0.05）。其他指標如收縮壓、舒張壓、血糖以及血肌酐和血尿酸各組間差異無統計學意義（P>0.05），見表2。2.2 SA mRNA的性別差異NF組(1.0010.296)與NM組(1.0000.215)SA mRNA基因表達量相比略高，但未達到統計學差異（P>0.05）；在超重人群SC脂肪組織，OBF組SA mRNA表達量(0.1200.057)明顯高于OBM組(0.0280.012)（P<0.05）；OBF組的SA mRNA表達量仍低于NM組（P<0.01）。表2 各組人群間檢測指標比較(略)2.3 SA mRNA的相關分析基因表達量以 CT（CT,adiNCT,a

9、ctin）的值進行統計。CT越大說明達到熒光基值所需的循環數越大，則模板量越小，所以在相關分析中采用CT的值，以保證統計量與模板量的一致性趨勢。在觀察對象總體中，SA mRNA的表達量與性別無相關性（r= 0.119，P>0.05），與BMI、WHR、TC和TG水平呈負相關，見表3；在超重人群中，SA mRNA與性別相關（r= 0.226，P<0.05）。表3 SA mRNA基因表達量的相關分析（略）2.4 SA mRNA的回歸分析逐步回歸分析以SA mRNA為因變量，BMI、WHR、TC、TG以及HOMA等作為自變量，結果顯示，在觀察對象總體中，BMI和TC入選(R2=0.030

10、,P<0.05,R2=0.169,P<0.01)。在OBM組中，只有TC入選(R2=0.274,P<0.01)。總體人群的SA mRNA的回歸方程為：CT=6.127-1.151 TC-0.229 BMI。OBM組的SA mRNA回歸方程為：CT=0.815-1.709TC，分別對總體人群和OBM組的自變量進行假設檢驗。BMI的偏回歸系數在0.05水平具有統計學意義（t為2.057，P<0.05），TC的偏回歸系數在0.05水平具有統計學意義（t分別為3.246，3.111，P<0.01）。3 討 論 脂肪細胞增殖與分化異常可導致肥胖及脂肪發育不良等，尤其是肥胖，

11、已日趨成為世界性的健康問題，而且是冠心病、高血壓、2型糖尿病等許多嚴重疾病的共同致病基礎。APN是一種由脂肪組織特異性分泌并在白色脂肪組織中高表達的多肽類物質，是體內唯一與體脂含量呈負相關的脂肪因子，其所在位點3q27是2型糖尿病和代謝綜合征易感基因位點4，研究表明，噻唑烷二酮（TZD）通過其過氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR）激動劑活性來上調APN基因的表達，從而達到使胰島素增敏的作用，也因此使得APN成為2型糖尿病和代謝綜合征的新治療靶點。 本研究證實，超重女性SA mRNA明顯高于超重男性，但均低于正常體重人群的SA mRNA，正常體重女性和男性SA mRNA比較差異無統計學意義，說明

12、SA mRNA的性別差異更多的表現在超重人群中，推測其可能原因：與性激素有關，在APN發現之初即被觀察到其在女性體內的含量高于男性，而且雌二醇或孕酮并不影響APN水平，男性相對較低的循環APN主要歸因于雄激素的影響5；與體質不銅有關，女性與男性脂肪分布存在差異。Kern等6研究顯示，在同等程度的肥胖人群中尤其BMI<30 kg/m2，女性的體脂含量是男性的兩倍，女性的APN基因表達比男性高65%；與性別間脂肪細胞的數量和大小差異有關，脂肪細胞的大小與胰島素敏感性密切相關，脂肪細胞體積增大，胰島素敏感性下降，APN分泌也不斷下降。此外，相關分析結果顯示，在超重人群中，SA mRNA與性別相

13、關，也證實了這一觀點。在觀察對象總體中SA mRNA與BMI呈負相關，這與之前一些報道正好相反，推其原因可能與研究對象不同有關。 研究證實，APN從脂肪細胞分泌后主要存在于外周血液中，女性血清中APN的濃度高于男性7，Degawa等8研究表明，肥胖女性血清APN降低歸因于腹部SA mRNA的降低，而我們前期研究結果3卻提示循環APN可能主要來源于內臟脂肪組織。Drolet等9研究顯示，腹型肥胖女性的網膜脂肪細胞APN分泌下降程度明顯高于SC，表明循環APN可能主要來源于內臟脂肪細胞的分泌。Hoffstedt等10認為，肥胖人群中SA mRNA下降在血清APN濃度降低環節中起的作用有限，而可能的

14、原因為肥胖人群對APN的消耗增加或是循環APN的降解增加。另外，由于血清APN濃度還存在包括翻譯和(或)分泌水平等轉錄后水平的調節，以及諸多因素的影響，因此，SC脂肪組織APN表達的性別差異是否為導致血清APN的性別差異的原因還有待于進一步的研究。【參考文獻】 1 Nedvdkov J,Smitka K,Kopsk V,et al.Adiponectin,an adipocytederived proteinJ.Physiol Res,2005;54(2):13340.2 Haluzk M,Parzkov J,Haluzk MM.Adiponectin and its role in the

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