1、實驗研究針灸對老年癡呆模型小鼠防治作用的實驗研究成都中醫藥大學 99博士生 (610075 張衛陜西延安衛校 (716000 劉來虎指導教師 :殷克敬摘要 :本實驗采用皮下注射東莨菪堿造成小鼠阿茨海默氏病 (AD 模型 , 通過針刺百 會 、 水溝 , 艾灸命門 , 觀察針灸對小鼠學習記憶能力及生化指標的影響 。結果表 明 :針灸能明顯改善模型小鼠的學習記憶能力 , 增強腦內乙酰膽堿酯酶活性 , 提高大腦乙酰膽堿含量 。 提示針灸對 AD 有顯著的防治作用 。主題詞 :癡呆 , 老年性 針灸療法百會水溝命門動物 , 實驗阿茨海默氏病 (A lzhei m ers disease AD 俗稱老年

2、性 癡呆 , 是指老年前期或進入老年后大腦功能進行性退化 , 某些神經遞質的改變 (主要為乙酰膽堿及其酶類 引起的 智力進行性下降 , 并伴有情感障礙的大腦器質性疾病 。據 世界衛生組織統計 , 在老年癡呆患者中 AD 約占 50 60%1。現代醫學對本病病因 、 發病機理的認識仍不太清楚 。 雖經多年探索出多種藥物 , 但均存在療效欠佳 、 服藥時間 長 、 毒副作用大等弊端 。 中醫雖無 AD 病名 , 據其臨床表現 可歸為 “癡呆” 、 “善忘” 、 “神疑” 等病范疇 , 并對其病因 、 病 機及治療做了一些論述 , 但實驗研究尚不多見 。本實驗旨 在觀察針灸對實驗性 AD 小鼠的學習

3、記憶能力 、 腦內乙酰 膽堿 (A ch 含量 、 乙酰膽堿酯酶 (A chE 活性的影響 , 從而 為臨床提供實驗依據 , 并對其作用機理進行初步探討 。 1材料與方法 1. 1實驗材料 :1. 1. 1動物及分組 :選用昆明種健康 10月齡小鼠 45只 , 均為雌性 , 體重 37. 5±2. 5g 。 由西安醫科大學實驗動物中心提供 。 小鼠適應性 飼養 1周后 , 按每組 15只隨機分為模型組 (A 組 , 模型加 針灸組 (B 組 , 模型加西藥對照組 (C 組 。1. 1. 2主要藥品及試劑 :氫溴酸東莨菪堿注射液 :0. 3m g m l (上海禾豐制藥有限公司 , 批

4、號 :970906 , 腦復康 片 :0. 4g 片 (西安醫科大學制藥廠 , 批號 :970811 , 氯化乙 酰膽堿 :1. 0g 支 (北京東環聯合化工廠 , 批號 :970508 , 乙 酰膽堿酯酶 (A chE 活性試劑盒 :(北京中生生物工程技術 公司 , 批號 :970905 。1. 1. 3主要儀器 :Y 型迷路 , 按陳奇 3方法制作 ; 721分光光度計 , 上海第三分析儀器廠 。1. 2實驗方法 :1. 2. 1造模及處理方法 :A 組按每天 1m g kg 體重皮下注射東莨菪堿計算 , 每鼠腹部皮下每天 注射 0. 12m l , 后模擬抓取固定 。 連續 10d (為

5、第 1療程 , 休 息 3d 再連續注射 10d (為第 2療程 。 B 組處理同 A 組 , 并 于每次東莨菪堿注射后抓取固定行針灸治療 。C 組處理同 A 組 , 并于每次東莨菪堿注射后灌胃腦 復康 0. 4m l (按 5m g kg 研末加 2倍量水稀釋 。1. 2. 2針灸方法 :選穴 :根據文獻論述選取 “百會” 、 “水溝” 、 “命門” 。參考 中國獸醫針灸學 并結合人體穴位 而定位 , 于動物頭部正中兩耳間取 “百會” , 鼻唇溝上 1 3取 “水溝” , 第 2腰椎脊突下取 “命門” 。 穴位及針具用 75%酒精消毒 , 采用 30號 、 0. 5寸不銹鋼毫針 , “百會”

6、 平刺 1 2mm ; “水溝” 向鼻端斜刺 12mm , 行捻轉法 , 角度 360度 左右 , 頻率 150次 m in , 行針 1m in ; “命門” 采用艾條懸灸 法 , 距穴位 3c m , 以有溫熱感而動物不煩躁為度 , 每次 3m in 。 每日針灸 1次 , 10次為 1療程 , 間歇 3天后進行第 2療程 。1. 2. 3標本采集及指標檢測 : 指標采集 :去處死亡 及不合格小鼠 , 每組選取 10只小鼠用于指標檢測 。 行 為指標觀測 :按陳奇方法以 Y 型水迷宮觀測 , 分別以小鼠 連續 5次正確達到安全平臺前錯誤次數為指標 。 大腦 A chE 活性測定 :取左側大

7、腦精確稱重后置于玻璃勻漿器 中 , 按腦組織 10m g 與緩沖液 1. 0m l 的比例加入冰冷的 0. 1mo l L , PH 7. 4PBS 制成勻漿 , 放置 1h 后 3000r m in 離 心 10m in 取上清液 , 按試劑盒要求 , 比色法進行檢測 3。 大腦 A ch 含量測定 :取右半側大腦精確稱重 , 置于 玻璃勻漿器 中 與 10倍 量 0. 01N HC l 勻 漿 , 放 置 1h 后 3000r m in 離心 10m in , 取上清液按生物鑒定法進行檢 測 4。統計學處理 :各實驗數據均采用均數±標準差 (X ±S 表示 , 每組樣本

8、均數組間比較采用 t 檢驗 。2實驗結果2. 1小鼠空間學習記憶能力測試結果見表 1。 表 1各組小鼠記憶能力測試結果 (次 , x ±S 組別 n 治療前 第 1療程后 第 2療程后 ABC1010106. 53±1. 306. 51±1. 306. 56±1. 216. 64±1. 783. 36±1. 2333. 31±0. 8536. 92±1. 38 4. 00±1. 0933 2. 19±1. 1733備注 :3示與 A 比較 P <0. 05, 33示與 A 比較 P <

9、; 0. 01由表 1知治療前 A 、 B 、 C 三組間連續 5次正確達到 安全平臺前錯誤次數無顯著差異 , 經第 1療程后 B 和 C 組表現出與 A 組的差異 , 其錯誤次數明顯少于 A 組 (P < 0. 05 , 第 2療程后 B 和 C 組與 A 組的差別更加顯著 (P 336陜西中醫 2001年第 22卷第 10期<0. 01 。2. 2各組動物大腦 A chE 活性及 A ch 含量的檢測 結果見表 2。表 2各組動物大腦生化指標比較 (x ±S 組別 n A chE 活性 (u g A ch 含量 (ug g A B C 10101092. 91

10、7;43. 32139. 30±16. 9733134. 82±14. 75332. 83±0. 76 5. 87±1. 0233# 4. 81±0. 6633備注 :#與 C 組比較 P 0. 05由表 2可知經治療后 B 組和 C 組與 A 組比較在大腦 A chE 活性及大腦 A ch 含量 方面均有顯著升高 (P <0. 01, P <0. 01 , 且 B 組大腦 A ch 含量也明顯高于 C 組 (P <0. 05 。3討論 3. 1選穴依據 :中醫學認為 AD 其病位 在腦 , 辨證以腎精不足 , 髓海空虛為本

11、, 痰瘀蒙蔽清竅為 標 , 治療應以補腎益精為主 , 開竅醒神為輔 。命門穴屬督脈 , 有補腎填精的作用 , 為治療腎虛 、 腦 髓不足的要穴 。百會位于巔頂 , 古稱 “三陽五會” , 督脈 、 膀 胱經 、 肝經在此入絡于腦 。 靈樞海論 記載 :“腦為髓 海 , 其輸上在于其蓋” , 針刺此穴可直通腦竅 , 具醒神開竅 之功 。 水溝穴則為開竅醒神的要穴 。 此三穴均屬督脈與腦 緊密相連 , 對于腦部疾患有良好效果 。3. 2針 灸 治 療 AD 的 機 理 探 討 :自 1974年 D ranchm an 研究指出腦內乙酰膽堿與記憶 、 認識有密切 關系以來 , 二十多年的研究結果使人

12、們認識到了中樞膽 堿能神經系統學習 、 記憶及情感方面具有特殊的作用 。 1976年后通過大量的研究表明 AD 患者最具特征的神經 生化方面的改變為大腦皮質 、 海馬中 A ch 含量的顯著減 少 , 膽堿乙酰化酶 (ChA T 及 A chE 活性的顯著降低 , 降 幅可達 60 90%。 腦內乙酰膽堿代謝過程如下 :膽堿 +乙 酰輔酶 A +ChA T A ch +輔酶 A ; A ch +H 2O +A chE 膽堿 +乙酸 。 ChA T 是 A ch 的生物合成酶 , 僅存在于膽堿 能神經元中 , 是衡量膽堿能神經元的指標 。 A chE 是 A ch 的水解酶 , 為觀察膽堿能神經

13、元的另一重要指標 。此二者 相輔相成共同維持腦內 A ch 含量的動態平衡 , 并且它們 的改變程度與構成 AD 病理改變的腦組織老年斑 、 神經原 纖維纏結的嚴重程度也密切相關 。 本實驗表明針灸可顯 著提高 AD 模型小鼠腦組織 A ch 含量及 A chE 活性 , 并由 此推知針灸可提高 AD 小鼠腦組織中 ChA T 活性 。 針灸 治療可使 AD 模型小鼠腦組織 A ch 含量及 ChA T 、 A chE 活性均明顯升高 , 表明針灸可使 AD 小鼠中樞膽堿能神經 系統處于積極活動狀態 。 腦組織 A ch 含量的增加是在既 提高腦組織 A ch 合成又加快 A ch 釋放降解的

14、情況下達到 的新的動態平衡 , 是在 A ch 利用率加快的情況下得以實 現的 。參考文獻1丁銘臣 . 老年性癡呆 . 實用內科雜志 , 1993; 13(6 3262陳奇 . 中藥藥理研究方法學 . 北京 :人民衛生出 版社 , 1994; 8953陳勤 . 抗衰老研究實驗方法 . 北京 :中國醫藥科 技出版社 , 1996; 1084黃俊華 . 乙酰膽堿的微量生物測定 . 針刺研究 , 1981; 6(1 72(收稿 2000211220 阿膠與偽品的性狀鑒別寧夏石嘴山市第二人民醫院 (753000 侯桂霞王惠霞阿膠系一種名貴常用的中藥材 , 其性平 、 味甘 , 主要 功能為滋陰潤燥 、

15、 補血 、 止血 。 人們常以此入藥或保健補 品 , 現在市場上有假阿膠出售 , 服用后影響疾病治療 , 達 不到治病強身作用 。 現將識別方法介紹如下 :阿膠的性狀鑒別 :阿膠為脊索動物門哺乳綱馬科動 物驢的皮 , 經煎熬 , 濃縮而成干燥的膠塊 。 呈長方形或方 形膠塊 。 常用簡單檢查方法 :外觀直視檢查 :呈黑褐色 或棕黑色 , 平滑而有光澤 , 碎片對光照視顯琥珀色半透明 狀 , 質堅脆易碎 , 不發軟粘合 。以色勻 、 質脆 、 半透明 、 斷面 光亮 、 無腥氣者為佳 。 水試法 :阿膠 1520g , 置燒杯中 , 加適量水 , 加熱溶化 , 溶液呈紅茶色 , 透明 , 清而不濁 。 口嘗 :取阿膠熱水溶液口嘗 , 微帶腥味 , 味甜 。偽品阿膠性狀鑒別 :現在市場上有一種 “新阿膠” 是 用豬皮熬制所得的 , 呈方塊狀 , 表面棕褐棕色 , 對光照視 不透明 , 斷面不光亮 。 于水中加熱熔化 , 液面有一層脂膠 油 , 具肉皮湯味 。成分與阿膠相似 , 可以代替阿膠 。另外 , 有