1、中Information on Traditional信息Medicine2010 年第 27 卷第 3 期Vol. 27，No. 3，2010·20·翻白草總黃酮作用的藥效學(xué)研究鳳( 黑龍江中大學(xué)，黑龍江 哈爾濱150040)摘 要:目的:研究翻白草總黃酮富集物藥理作用。方法:以小劑量鏈脲佐菌素( STZ) 腹腔注射大鼠模型，灌胃給予高劑量36g·( kg·d) 1 、中劑量18g·( kg·d) 1 加高脂飼料誘導(dǎo) 2 型和低劑量9g·( kg·d) 1 的翻白草總黃酮富集物，測(cè)定大鼠的空腹血糖( FBG) 、

2、糖耐量 2h 血糖、血清( FINS) 、胰島素敏感性指數(shù)( ISI) 、超氧化物歧化酶( SOD) 、丙二醛( MDA) ，并用 HE 染色法胰島對(duì)大鼠進(jìn)行病理切片觀察。結(jié)果:中、高劑量的翻白草總黃酮能顯著降低大鼠的空腹血糖值和血糖耐量，提高胰島素敏感指數(shù)，減輕胰島素抵抗，提高機(jī)體 SOD 活性，降低血清清胰島MDA 含量，并對(duì)胰島細(xì)胞起到保護(hù)修復(fù)作用。結(jié)論:翻白草總黃酮通過(guò)減輕胰島素抵抗和保護(hù)修復(fù)胰島細(xì)胞多種機(jī)制治療 2 型:翻白草;黃酮; 號(hào):R285. 5。;藥效學(xué)文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1002 2406(2010)03 0020 05Study on Pharmacology of

3、 Decreasing Blood Glucose of Flavonoid from Potentilla Discolor BungeSUN Hai feng，CHANG Hong，YANG Ting，WANG Jiang feng( Heilongjiang University ofMedicine，Harbin 150040)Abstract:Objective: To study the pharmacology of Decreasing Blood Glucose effects of the total flavonoidsfrom Potentilla Discolor B

4、unge. Methods: The type 2 diabetes ms in rats is made by fedding high lipidsfoods together with injecting the streptozotocin( STZ) of small dose，then perfusing the rats stomach with the total flavonoids of Potentilla discolor Bung in high doze36g·( kg·d) 1 、medium doze18g·( kg·d)

5、 1 and low doze9g·( kg·d) 1 ，determinating the fasted blood glucose( FBG) ，the glucose tolerance test(2HPG)， the fasting insulin levels( FINS) ，the insulin sensitivity index ( ISI) ，the activity of SOD，and the amount of MDA，and detecting the pancreas islet B cells by HE. Results: the total

6、 flavonoids of Potentilla discolor Bungin high doze and medium doze had significantly effect of decreasing FBG and FINS on diabetic rats，improvingglucose tolerance and insulin sensitivity index and reducing insulin. Potentilla discolor Bung can in-crease the activity of SOD，decrease the amount of MD

7、A，protect and repair pancreas islet cells.:the total flavonoids of Potentilla discolor Bung can treat the two type diabetes mellitus by decreasing the insulin，protecting and repairing the islet cell.Key words:Potentilla Discolor Bunge; Flavonoids; decrease blood glucose;Pharmacology咳血、吐血、癰腫瘡毒等1。近年來(lái)民

8、間流行用翻白翻白草為薔薇科委屬植物翻白草( Potentilladiscolor Bunge. ) 的帶根全草，主要分布在北半球的溫帶和寒帶。本草綱目載其:氣味甘，微苦，性平，無(wú) 毒;有清熱解毒、涼血止血功效，主治肺熱咳喘、瀉痢、草治療草具有其并取得一定療效?，F(xiàn)有研究表明，翻白作用2，3。翻白草所含的黃酮類成分為的主要有效成分4，本實(shí)驗(yàn)以翻白草總黃酮富集物為材料，研究其對(duì) 2 型大鼠空腹血糖、糖耐量、血清胰島素等指標(biāo)的影響，探討翻白草治療 2 型的作用機(jī)制，為翻白草的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。基金項(xiàng)目:黑龍江省科技攻關(guān)計(jì)劃( GC06C40504)作者簡(jiǎn)介:(1964) ，男，教授，中藥學(xué)博士，主要從

9、事中藥及中藥化妝品研究。材料儀器PHB 5 筆式酸度計(jì)( 上海偉業(yè)儀器廠); 日立1與開(kāi)發(fā)1. 1收稿日期:2009修回日期:2010120221012010 年第 27 卷第 3 期Vol. 27，No. 3，2010中Information on Traditional信息Medicine·21·KY2000 半自動(dòng)生化儀(開(kāi)元醫(yī)療設(shè)備有限公采用喂養(yǎng)高糖高脂飼料加腹腔注射小劑量鏈脲佐 菌素( STZ) 的方法。75 只 Wistar 雄性大鼠自購(gòu)置后適應(yīng)性飼養(yǎng) 3 天后，將大鼠隨機(jī)分為兩組，空白組 10 只給予基礎(chǔ)飼料，模型組 65 只喂以高糖高脂飼料 1 個(gè)司);恒溫

10、水浴箱( 江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠);微量移液槍( 上海榮泰生化工程 托利多上海);電子分析天平( 梅);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀( 上海亞榮生化儀器廠);K Q500E 型醫(yī)用超聲波器( 昆山月后，于實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水 12h，模型組腹腔注射 1% 的 STZ 溶液 50mg·kg 1 ，正常組給予同體積的檸檬酸 檸檬酸鈉緩沖溶液。72h 后尾靜脈采血測(cè)空腹血糖，選擇血糖值大于 11. 1mmol·L 1 的大鼠作為市超聲儀器)。藥品與試劑翻白草總黃酮富集物( 黑龍江中1. 2大學(xué)生藥學(xué)提供);糖脈康顆粒( 成都中匯制藥國(guó)藥準(zhǔn)字 Z10970026 );0. 9% NaCl 注射液( 哈藥，

11、實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型，除空白組 10 只外，共有 40 只大鼠成模。將其隨機(jī)分為模型對(duì)照組、糖脈康組、翻白草總黃酮富集物高、中、低劑量組五組，每組 8 只。制藥六廠);鏈脲佐菌素( 美國(guó) sigma 公司提供，批號(hào):S0130);胰島素放射免疫試劑盒( 北京市福瑞生物工實(shí)驗(yàn)給藥方案空白對(duì)照組和模型對(duì)照組大鼠灌胃給予等體積生2. 3程公司);葡萄糖注射液( 哈藥三精制藥有限公司);蔗糖( 沈陽(yáng)市新西試劑廠生產(chǎn));葡萄糖(市理鹽水。陽(yáng)性對(duì)照組大鼠灌胃給予 1. 35g ·);冰醋酸( kg·d) 1 糖脈康溶液;翻白草總黃酮高、中、低劑量組分別灌胃給予 36g·( kg&#

12、183;d) 1 、18g·( kg·d) 1 、9g·( kg·d) 1 翻白草總黃酮藥液。實(shí)驗(yàn)各組均連續(xù)灌胃 15d?？泼軞W化學(xué)試劑市耀華化學(xué)市凱通化化工有限公試劑學(xué)試劑公司);檸檬酸);檸檬酸鈉(醇(市司);葡萄糖測(cè)定試劑盒( 上海榮盛生物技術(shù)有限公司，批號(hào):20090101) ;SOD 試劑盒( 南京建成生物工程，批號(hào):20090527) ;丙二醛( MDA) 測(cè)試盒( 南京2. 4各實(shí)驗(yàn)組大鼠空腹血糖的測(cè)定大鼠連續(xù)灌胃 15d 后，各組均禁食不禁水 12h，隨后眼內(nèi)眥取血，置離心管中 3500r·min 1 離心 10min，按血糖試

13、劑盒，采用葡萄糖氧化酶法結(jié)合分光光度法 測(cè)定大鼠空腹血糖值。，批號(hào):20090527) 。建成生物工程1. 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康 wistar 大鼠 75 只，體重(200 ± 20 ) g，雌雄各半( 上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司)。各實(shí)驗(yàn)組大鼠糖耐量的測(cè)定2. 5大鼠連續(xù)灌胃 15d 后，禁食不禁水 12h，檢測(cè)空腹血糖值作為零時(shí)血糖值，隨后按 3g·kg 1 劑量灌胃給予各組大鼠葡萄糖溶液，分別在注射后 0. 5h、1h 及 2h 測(cè)定大鼠血糖值，觀察各實(shí)驗(yàn)組大鼠血糖變化情況。2方法2. 1 藥品及試劑配制方法檸檬酸 檸檬酸鈉緩沖溶液的配制:精密稱取檸檬酸 2. 100g，溶于

14、100mL 重蒸餾水中，精密稱取檸檬酸鈉 2. 900g，溶于 100mL 重蒸餾水中，將檸檬酸溶液和檸檬酸鈉溶液按 1 1. 32 配成 pH 值為 4. 4 的溶液( 現(xiàn)用現(xiàn)配并用酸度計(jì)準(zhǔn)確測(cè)定) ，用 0. 22m 濾膜除菌，備用。1% 鏈脲佐菌素溶液的配制:精確稱取鏈脲佐菌素100mg，溶于 10mL 檸檬酸 檸檬酸鈉緩沖溶液中，搖勻( 此操作在冰盒上進(jìn)行，并且避光，所配溶液在30min 內(nèi)用完)。2. 6各實(shí)驗(yàn)組大鼠血清胰島的測(cè)定檢測(cè)糖耐量后第 2 天，各實(shí)驗(yàn)組禁食不禁水 12h， 眼內(nèi)眥取血，置離心管中 3500r·min 1 離心 10min，精密吸取血清 100L，按

15、照放射免疫試劑盒說(shuō)明操作，測(cè)定大鼠血清胰島。大鼠胰島素敏感性指數(shù)的測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組2. 7胰島素敏感性指數(shù)( insulinsensitivity index，ISI)計(jì)算公式為 ISI = Ln1 /( FINS × FBG) ，其中 FINS 為高糖高脂飼料的: 由 10% 豬油，2. 5%血清胰島，F(xiàn)BG 為空腹血糖含量。將實(shí)驗(yàn)各組醇，1% 膽酸鈉，20% 蔗糖，以及 66. 6% 的基礎(chǔ)飼料組成。翻白草總黃酮富集物低、中、高劑量組配制方法: 精密稱取翻白草富集物粉末 14. 2g、28. 4g、56. 8g，分別加入 282mL 蒸餾水，搖勻即得;糖脈康顆粒溶液:取糖脈康顆粒 4

16、0g 加入 148mL 蒸餾水，搖勻，待用。FINS 和 FBG 值分別代入公式計(jì)算胰島素敏感性指數(shù)值。大鼠超氧化物歧化酶( SOD) 的2. 8測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)糖耐量后第 2 天，各實(shí)驗(yàn)組禁食不禁水 12h， 眼內(nèi)眥取血，置離心管中 3500r·min 1 離心 10min，用半自動(dòng)生化儀檢測(cè)超氧化物歧化酶( SOD)。大鼠模型的造模與分組2. 2中Information on Traditional信息Medicine2010 年第 27 卷第 3 期Vol. 27，No. 3，2010·22·富集物中、高劑量組在糖負(fù)荷后 0. 5h 達(dá)峰值，血糖升高幅度均明

17、顯小于模型組( P < 0. 05) ，2h 后降低至糖負(fù)荷前血糖水平附近，與模型組血糖比較有顯著性差2. 9 各實(shí)驗(yàn)組大鼠 MDA 的測(cè)定檢測(cè)糖耐量后第 2 天，各實(shí)驗(yàn)組禁食不禁水 12h，眼內(nèi)眥取血，置離心管中 3500r·min 1 離心 10min，用半自動(dòng)生化儀檢測(cè) MDA。異( P < 0. 01) ，表明翻白草對(duì)作用。大鼠的糖耐量有各實(shí)驗(yàn)組大鼠胰腺組織形態(tài)的觀察2. 103. 3 各實(shí)驗(yàn)組表 3。大鼠血清胰島結(jié)果見(jiàn)大鼠麻醉采血處死后，迅速取出脾臟周圍的胰腺，置于福爾液中固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4m 切片，HE 染色后進(jìn)行光鏡檢查。( x ± s)

18、表 3各實(shí)驗(yàn)組大鼠血清胰島結(jié)果各實(shí)驗(yàn)組表 13組別例數(shù)( n)1 )血清胰島素( IU·mL3. 1大鼠血糖水平結(jié)果見(jiàn)表 1。空白對(duì)照組8. 26 ± 1. 928各實(shí)驗(yàn)組大鼠血糖水平( x ± s)模型組825. 75 ± 7. 84例數(shù)( n)給藥前血糖給藥后血糖組別( mmol·L1 )( mmol·L1 )陽(yáng)性組816. 68 ± 4. 84空白對(duì)照組模型組陽(yáng)性組翻白草總黃酮低劑量組翻白草總黃酮中劑量組翻白草總黃酮高劑量組85. 62 ± 1. 325. 13 ± 1. 0617. 07 

19、7; 4. 7翻白草總黃酮低劑量組817. 39 ± 4. 25815. 31 ± 3. 3翻白草總黃酮中劑量組815. 16 ± 4. 08*815. 21 ± 3. 7712. 36 ± 5. 24815. 34 ± 3. 2610. 94 ± 6. 0710. 34 ± 1. 98*翻白草總黃酮高劑量組89. 49 ± 4. 87*9. 31 ± 5. 61*815. 28 ± 3. 32注:與模型對(duì)照組比較， P < 0. 01，* P < 0. 05。815. 1

20、8 ± 2. 86翻白草總黃酮富集物高劑量組、中劑量組血清胰注:與模型對(duì)照組比較， P < 0. 01，* P < 0. 05。翻白草總黃酮富集物高劑量組、中劑量組空腹血模型組( P < 0. 05 );低劑量組血島素顯著低于清胰島素值與0. 05)。模型組比較無(wú)顯著差異( P>模型組( P < 0. 05 );低劑量組空糖值顯著低于腹血糖值與 0. 05)。3. 2 各實(shí)驗(yàn)組表 2模型組比較無(wú)顯著性差異( P>3. 4各實(shí)驗(yàn)組大鼠胰島素敏感性指數(shù) 結(jié)果見(jiàn)表 4。表 4大鼠糖耐量 結(jié)果見(jiàn)表 2。各實(shí)驗(yàn)組大鼠糖耐量( x ± s)各實(shí)驗(yàn)組大

21、鼠胰島素敏感性指數(shù)( x ± s)例數(shù)( n)組別例數(shù)( n)胰島素敏感性指數(shù)血清葡萄糖( mmol·L1 )組別空白對(duì)照組83. 74 ± 1. 720h0. 5h1h2h模型組86. 08 ± 5. 81空白對(duì)照組模型組陽(yáng)性組85. 13 ± 1. 06 8. 75 ± 2. 417. 73 ± 3. 34 6. 04 ± 1. 15陽(yáng)性組85. 32 ± 3. 74817. 07 ± 4. 726. 32 ± 3. 3123. 32 ± 2. 8320. 54 

22、7; 3. 37812. 35 ± 5. 2422. 56 ± 4. 5519. 27 ± 3. 8713. 31 ± 2. 02翻白草總黃酮低劑量組85. 24 ± 3. 15翻白草總黃酮低劑量組810. 94 ± 6. 0723. 89 ± 2. 2220. 54 ± 2. 6815. 53 ± 2. 98翻白草總黃酮中劑量組4. 96 ± 3. 18*8翻白草總黃酮高劑量組4. 56 ± 1. 32*8翻白草總黃酮中劑量組9. 49 ± 4. 87 19. 09

23、77; 2. 47* 16. 42 ± 2. 51* 11. 54 ± 3. 02*8注:與模型對(duì)照組比較， P < 0. 01，* P < 0. 05。翻白草總黃酮富集物高劑量組、中劑量組胰島素翻白草總黃酮高劑量組19. 19 ± 3. 21* 16. 89 ± 2. 54* 11. 78 ± 2. 78*89. 31 ± 5. 61模型組( P < 0. 05 );低劑模型組比較無(wú)顯著差異敏感性指數(shù)顯著高于量組空腹血糖值與 ( P > 0. 05)。3. 5 各實(shí)驗(yàn)組結(jié)果見(jiàn)表 5。注:與模型對(duì)照組比較， P

24、 < 0. 01，* P < 0. 05。正常組大鼠血糖于灌胃給與 3g · Kg 1 葡萄糖0. 5h 后迅速升高并達(dá)峰值，以后血糖開(kāi)始下降。模型組大鼠血糖于糖負(fù)荷后持續(xù)升高，雖于 2h 有所降低， 但與糖負(fù)荷前血糖濃度相比變化不大。翻白草總黃酮大鼠超氧化物歧化酶值( SOD)2010 年第 27 卷第 3 期Vol. 27，No. 3，2010中Information on Traditional信息Medicine·23·各實(shí)驗(yàn)組大鼠 SOD 值( x ± s)附圖:表 5組別例數(shù)( n)SOD( NU·mL1 )空白對(duì)照組8

25、378 ± 29. 85模型組8305. 68 ± 24. 19陽(yáng)性組8311. 76 ± 20. 15翻白草總黃酮低劑量組8321. 3 ± 60. 7350. 26 ± 12. 29*翻白草總黃酮中劑量組8翻白草總黃酮高劑量組345. 05 ± 23. 1*8注:與模型對(duì)照組比較，* P < 0. 05。翻白草總黃酮富集物高劑量組、中劑量組 SOD 顯圖 1 空白組大鼠胰島組織形態(tài)模型組( P < 0. 05);低劑量組 SOD 與糖著高于尿病模型組比較無(wú)顯著差異( P > 0. 05)。3. 6 各實(shí)驗(yàn)組表 6

26、大鼠 MDA 值 結(jié)果見(jiàn)表 6。各實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠 MDA 值( x ± s)組別例數(shù)( n)MDA( nmol·mL1 )空白對(duì)照組85. 95 ± 1. 13模型組87. 62 ± 0. 79陽(yáng)性組86. 73 ± 1. 14翻白草總黃酮低劑量組87. 33 ± 1. 03圖 2模型對(duì)照組大鼠胰島組織形態(tài)翻白草總黃酮中劑量組6. 26 ± 0. 91*8翻白草總黃酮高劑量組86. 45 ± 0. 97*注:與模型對(duì)照組比較， P < 0. 01，* P < 0. 05。翻白草總黃酮富集物高劑量組、中劑量組

27、 MDA顯著低于模型組( P < 0. 05);低劑量組 MDA 與模型組比較無(wú)顯著差異( P > 0. 05)。3. 7 各實(shí)驗(yàn)組大鼠胰腺組織形態(tài)空白對(duì)照組大鼠( 圖 1):胰島呈圓形或橢圓型，邊界清晰，胰島細(xì)胞排列規(guī)整;模型對(duì)照組大鼠( 圖 2): 胰島明顯萎縮，邊界模糊，胰島細(xì)胞排列紊亂，其數(shù)量較正常對(duì)照組明顯減少，并有明顯的細(xì)胞腫脹、壞死現(xiàn) 象，細(xì)胞核可見(jiàn)染色不清或深染，有核固縮現(xiàn)象;陽(yáng)性對(duì)照組大鼠( 圖 3):胰島邊界較清晰，細(xì)胞數(shù)量較模型對(duì)照組有所增加，細(xì)胞形態(tài)較好，無(wú)明顯細(xì)胞腫脹、壞死，核清晰;翻白草總黃酮低劑量組( 圖 4) 與模型對(duì)照?qǐng)D 3陽(yáng)性對(duì)照組大鼠胰島組織形

28、態(tài)組相近，胰島程度小;翻白草總黃酮中( 圖 5) 、高( 圖 6) 劑量組大鼠胰島的結(jié)構(gòu)形態(tài)有不同程度，胰島邊界較清晰，細(xì)胞數(shù)量較模型對(duì)照組增加，其中高 劑量組胰島恢復(fù)結(jié)果顯著，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，無(wú)明顯腫脹 壞死，無(wú)核固縮現(xiàn)象，接近正常胰島結(jié)構(gòu)。說(shuō)明翻白草中、高劑量能修復(fù)胰島組織，表現(xiàn)出促進(jìn)圖 4翻白草總黃酮低劑量組大鼠胰島組織形態(tài)胰島組織再生的作用，且其高劑量效果優(yōu)于陽(yáng)性。中Information on Traditional信息Medicine2010 年第 27 卷第 3 期Vol. 27，No. 3，2010·24·清除自由基的酶，可阻斷自由基，促使產(chǎn)生 LPO 的鏈?zhǔn)?/p>

29、反應(yīng)，從而保護(hù)細(xì)胞不受自由基的損害。大鼠抗氧化防御體系受抑制，自由基產(chǎn)生率大于清除率， 而LPO 的升高與SOD 活性降低呈負(fù)相關(guān)，同時(shí)與血糖升高呈正相關(guān)，說(shuō)明血糖升高與自由基引起的脂質(zhì)過(guò) 氧化有直接關(guān)系7，8。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清 MDA 含量及SOD 活性結(jié)果:實(shí)驗(yàn)高、中劑量組的血清 SOD 活性明顯增高，血清 MDA 含量明顯減少，說(shuō)明翻白草總黃酮可以提高大鼠機(jī)體 SOD 活性，清除自由基，并抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用。胰島細(xì)胞觀察結(jié)果顯示，翻白草總黃酮中、高劑量 組都不同程度修復(fù)胰島 細(xì)胞，表明翻白草具有顯著的修復(fù)胰島組織，促進(jìn)胰島組織再生，從而促進(jìn)胰島素圖 5翻白草總黃酮中劑量組大鼠胰島組織形態(tài)胰島素 細(xì)胞缺陷。參考文獻(xiàn):1，等. 10 種委的生藥學(xué)研究J. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19(12) :3039 3041.，郭新民.