1、1目的：建立島津LC-2030高效液相色譜儀使用、維修、保養操作規程，確保儀器的正確操作。2范圍：本規程適用于島津LC-2030高效液相色譜儀使用、維修、保養。3責任：化驗室負責人，化驗員。4內容：4.1概述本系統由四元低壓梯度系統輸送泵、自動進樣器、UV檢測器、柱溫箱、LabSolutions色譜數據工作站和電腦等組成。4.2原理儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱固定相內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通

2、過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來。4.3技術參數流量設定范圍0.000110 mL/min流速精度±1% 或 ±2µL/min最大操作壓力44MPa進樣數216個樣品外形尺寸mm410×500×605mm波長重現性±0.1nm溫控精度±0.1波長范圍190700nm噪聲±2.5×10-6AU漂移100×10-6AU/h4.4設備安裝位置設備名稱放置房間LC-2030型高效液相色譜儀精密儀器室4.5操作方法準備.1準備所需的流動相，用合適的0.45µ

3、m濾膜過濾，超聲脫氣2030min。.2根據待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（注意方向）。.3配制樣品和標準溶液（也可在平衡系統時配制），用合適的0.45µm濾膜過濾。.4檢查儀器各部件的電源線、數據線和輸液管道是否連接正常。開機接通電源，依次開啟高效液相色譜儀開關，電腦主機、顯示器，待高效液相色譜儀自檢結束后，打開色譜工作站。等度洗脫.1排氣打開Purge，點擊程序中的“自動排氣”，系統自動進行排氣，若使用多通道，根據實際需要選擇通道進行排氣；如果不出液，用針頭接上“p”的管路，進行抽氣，至到有液體從“Purge”這個管路排出。.2參數設定.2.1波長設定：在數據采集窗口的時間程序視

4、圖中檢測器A，選擇波長(1)輸入所需波長。.2.2流速設定：在數據采集窗口的時間程序視圖中泵，選擇泵總流量，輸入所需流速。.2.3流動相比例設定：在數據采集窗口的時間程序中泵，選擇所用泵，輸入泵項下所需的濃度比例。.3設置好后，點擊“下載”系統自動按照設置好的方法，進行走基線。.4基線平穩后，方可進樣。可以進行單次分析或批處理分析。.4.1單次分析:單擊數據采集窗口助手欄上的“單次開始”圖標；設置“樣品名”“方法文件”“數據文件”“樣品瓶”“樣品架”“進樣體積”等信息；點擊確定，系統即自動進行單次分析。.4.2批處理分析:單擊數據采集窗口助手欄上的“批處理”圖標；從文件菜單中選擇新建批處理文件

5、；設置“樣品名”“方法文件”“數據文件”“樣品瓶”“樣品架”“進樣體積”等信息；點擊保存，保存批處理文件；點擊批處理助手欄中的“批處理開始”，系統即執行批處理程序。梯度洗脫.1排氣:打開Purge，點擊程序中的“自動排氣”，系統自動進行排氣，若使用多通道或梯度，根據實際需要選擇通道進行排氣；如果不出液，用針頭接上“p”的管路，進行抽氣，至到有液體從“Purge”這個管路排出。.2參數設定.2.1波長設定：在數據采集窗口的時間程序視圖中檢測器A，選擇波長(1)輸入所需波長。.2.2流速設定：在數據采集窗口的時間程序視圖中泵，選擇泵總流量，輸入所需流速。.3 梯度洗脫設置程序:在數據采集窗口的時間

6、程序視圖，選擇時間程序圖標中的LC時間程序；設置程序洗脫的時間及流動相比例；設置完后應以controllerstop（控制儀器停止）為結尾；點擊“時間程序”查看設置時間程序是否正確；點擊“泵”選擇泵，調節壓力限制(最大壓力設為20.0MPa)；.4 設置好后，點擊“下載”系統自動按照設置好的方法，進行走基線。.5 基線平穩后，方可進樣。可以進行單次分析或批處理分析。.5.1單次分析:單擊LC實時分析窗口助手欄上的“單次開始”圖標；設置“樣品名”“方法文件”“數據文件”“樣品瓶”“樣品架”“進樣體積”等信息；點擊確定，系統即自動進行單次分析。.5.2批處理分析:單擊數據采集窗口助手欄上的“批處理

7、”圖標；從文件菜單中選擇新建批處理文件；設置“樣品名”“方法文件”“數據文件”“樣品瓶”“樣品架”“進樣體積”等信息；點擊保存，保存批處理文件；點擊批處理助手欄中的“批處理開始”，系統即執行批處理程序。泵的清洗 檢測完畢后，如流動相無鹽、酸及緩沖液，可直接用甲醇或乙腈沖洗30分鐘即可，如流動相含有鹽、酸及緩沖液，先用甲醇:水=10:90沖流30分鐘，再用甲醇沖洗30分鐘即可。 樣品測試完畢后，繪制標準曲線。方法如下：.1點擊“LabSolutions”中的再解析圖標，LC再解析開始；.2單擊再解析助手欄中的LC數據分析圖標，出現LC數據分析窗口；.3選擇文件菜單中的打開數據文件，然后選擇與測量

8、的數據文件，數據文件打開；.4單擊助手欄中的向導圖標，出現化合物向導；.5請確保設置了正確的積分參數，然后單擊下一步；.6記錄要識別的峰的保留時間，然后單擊下一步；.7指定定量計算方法和校準曲線類型，然后單擊下一步；.8設置識別的方法，然后單擊下一步；.9提供化合物表的詳細設置，然后單擊完成；.10單擊LC數據助手欄中的應用到方法圖標；.11命名方法文件并單擊保存；.12單擊確定而不進行任何更改；.13單擊再解析助手欄中的校準圖標；.14打開用于生成校準曲線的方法文件；.15拖入需要作校準曲線的數據，即得出校準曲線。使用校準曲線計算數據濃度.1選擇文件菜單中的打開數據文件，然后指定數據文件名；

9、.2選擇文件菜單中的加載方法參數，然后指定方法文件名，出現方法參數屏幕；.3使用方法文件中的校準曲線計算數據的濃度。出具報告.1根據需要設置相應的報告格式；.2把測定的數據拖入設置好的報告模塊中，即得報告。關機全部分析完畢后，先關檢測器和柱溫箱電源，再用適宜的溶劑清洗色譜系統。依次關閉系統控制器、泵和微機電源，拔下各插頭，做好使用記錄。4.6泵的使用和維護注意事項為了延長泵的使用壽命和維持其輸液的穩定性，必須按照下列注意事項進行操作：.1防止任何固體微粒進入泵體，因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒，而常用的方法是濾過，可采用微孔濾

10、膜（0.2µm或0.45µm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。.2流動相不應含有任何腐性物質，含有緩沖液的流動相不應保留在柱內，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。如果將含緩沖液的流動相留在泵內，由于蒸發或泄漏，甚至是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環和柱塞等。因此，必須泵入加入少量甲醇或乙腈和純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇水）。.3泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，最終產

11、生漏液。.4輸液泵的工作壓力決不要超過規定的最高壓力，否則會使高壓密封環變形，產生漏液。.5流動相應該先脫氣，以免在泵內產生氣泡，影響流量的穩定性如果有大量氣泡，泵就無法正常工作。如果輸液泵產生故障，須查明原因，采取相應措施排除故障。.1沒有流動相流出，又無壓力指示。原因可能是泵內有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量下運轉，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環磨損，需更換。.2壓力和流量不穩。原因可能是氣泡，須要排除；或者是單向閥內有異物，可卸下單向閥，進入丙酮內超聲清洗。有時可能是砂濾棒內有氣泡，或被鹽的微細晶粒或滋生的微生物部分堵塞，這時

12、，可卸下砂濾棒浸入流動相內超聲除氣泡，或將紗濾棒浸入稀酸內迅速除去微生物，或將鹽溶解，再立即清洗。.3壓力過高的原因是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。關于試劑.1試劑類別：有機溶劑、無機化合物、水.2試劑的要求：.2.1有機溶劑的級別優級純以上專用試劑。.2.2無機化合物要求分析純以上。.2.3水要求是去離子純凈水。流動相.1無氣泡，通過超聲脫氣，通氦氣等方法進行脫氣。.2純凈無雜質，常用方法為用0.45µm微孔過濾膜進行過濾。色譜柱的注意事項.1壓力：注意每根柱的耐壓（最大使用壓力）。.2pH的范圍：不同柱子的pH值范圍有所

13、不同。.3清洗：柱子需要必要的清洗，請用戶參考柱子的說明書。.4保存：長時間不使用柱子時需要用合適的試劑進行保存，請參考柱子的說明書。關于吸濾過濾器堵塞.1現象：塞吸現象、管路中不斷產生氣泡.2處理方式：將吸濾頭1從溶劑管中拔出，放在正己烷或稀硝酸（一般10%中超聲清洗。在線過濾器堵塞.1現象：不連接柱子及管路、混合器（松開泵進混合器或柱子的管路接頭），設定泵流速為1ml/min，泵壓力大于0.3MPa，說明在線過濾器堵塞。.2處理方式：一般建議用戶更換新的過濾器，也可以將在線過濾器拆下，用稀硝酸（濃度小于10%），進行超聲清洗。壓力波動的原因及處理方法.1產生波動的原因：有氣泡；密封圈有磨損

14、，產生微量的泄液；進口單向閥中有異物（較常見）；在線過濾器，管路，柱子進口處有鹽析出或雜物；.2處理方法：流動相進行脫氣，排除流路中的氣泡；更換密封圈； 清洗進出口單向閥，將單向閥置于燒杯中，用異丙醇進行超聲清洗；檢查并清洗過濾器及流路。引起柱壓升高的原因.1色譜柱長時間使用后用戶發現柱壓比以往要高出許多，造成此情況可能由以下幾個因素引起。在線過濾器堵；高壓混合器堵；進樣器堵；流路中部分細管堵； 流通池堵；柱子內部吸附樣品產生堵。.2確認方法：進行分段檢測，確認的確是柱子壓力高還是以上5點原因中某個引起的。進樣峰分叉的原因.1流路及柱子等沒有做任何改變的情況下，分析樣品時，被檢測峰產生分叉，則

15、說明保護柱或分析柱柱效下降，需再生保護柱或分析柱。.2柱的出口到檢測池的管路偏長或管路內徑寬所致（常用內徑0.3mm以下）,導致樣品擴散,造成峰分叉。什么情況下需更換D2Lamp（氘燈）.1顯示D2LampERROR時，一般情況下認為氘燈不良需更換。.2氘燈超過使用時間（理論為2000小時），需要更換氘燈。造成檢測池能量低的原因.1氘燈使用時間過長（大于2000小時），燈老化所致。.2光路系統受到污染或老化。說明：檢測池能量高低以參比池為準。 檢測池中有氣泡如何排除一般情況下，很小的氣泡會停留在檢測池中，所以需要在池管路出口1處加一個背壓管，池中氣泡不易在池中產生。（加背壓：出口處加上一段阻尼管增加壓力）如何清洗流通池一般情況下，請用戶不要將池拆散，而是用儀器附帶的工具進行清洗。常用流程：水-甲醇-異丙醇-甲醇，或再用稀硝酸沖洗池流路。基線漂移，噪音增大的原因。.1所用試劑不純.2整個流路系統不干凈.3流動池污染.4氘燈使用時間過長.5電壓不穩，或者有環境干擾.6柱子污染等因素梯度洗脫時可能產生的干擾峰在進行梯度洗脫時，由于溶劑的變化，導致吸光度背景值的該改變。所以會產生基線上下波動，這是正常現象。由于不斷的洗脫，特別是水及無機鹽混合的流路，流過柱子后部分雜質被柱子吸附，隨著體系洗脫