1、UV，CAD和MS同時測量藥物活性成分和反離子摘要：藥物活性成分（API）是藥物中的有效成分，用藥時起重要作用。鑒別和測定API是藥廠研發和生產過程中的關鍵步驟，本文利用新型通用檢測器電噴霧式檢測器（Corona CAD）與紫外、質譜檢測器相連，進行了多種復雜API的分析，方法可靠，數據準確，且提高了檢測效率，擴展了應用范圍，值得在藥廠中大力推廣。 關鍵詞：API，Corona CAD，UV，MS，ICS-5000 1前言 API：活性醫藥物成分（Active pharmaceutical ingredient）指的是藥物活性成分，也就是我們通常所說的原料藥。目前，同時定量分析和成分鑒別藥物活

2、性成分（API）和它的無機反離子比較成熟的方法是使用幾種不同的分析技術，但卻是一個耗時又費力的過程。本應用注解描述了以一個離子色譜ICS-5000為平臺同時使連用三個檢測器正交分析的檢測方法從而提高了檢測效率增強了數據的可靠性。電噴霧式檢測器（CAD）與紫外/可見檢測器和質譜的聯用，不僅可以同時分析API和反離子，還可以測定有機物中無機雜質的含量。 圖1該儀器為進行分析時的安裝示意圖。一個可調流量分配器（1）可準確分配80L/min流量到質譜和0.42 mL/min流量到Corona CAD，當運行方法的總流量為0.5 mL/min時。 2材料與方法 樣品制備 下列標準品均溶解在去離子水中。然

3、后，稀釋成50L加950L乙腈/水（80:20）的注射濃度，具體如下： 鹽酸維拉帕米：120g/mL 溴新斯的明：11g/mL 5,7-二羥基睪酮肌酐硫酸鹽：200g/mL 方法參數 儀器：離子色譜ICS-5000 色譜柱：Sequant ZIC. - pHILIC; 4.6 x 150毫米，5m的 柱溫：30 進樣體積：10微升 流速：0.5毫升/分鐘 流動相A：100 mM的醋酸銨（pH值4.6），甲醇，異丙醇，乙腈（15:5:20:60，v/v/v/v） 流動相B：30 mM醋酸銨（pH值4.6），甲醇，異丙醇，乙腈（50:5:20:25，v/v/v/v） 梯度：見表1 Corona：1

4、00pA范圍，無過濾器 紫外檢測器： 254nm LC - MS：接口：ESI 采集模式：掃描 極性：正 運行時間：1.00秒 工作電壓：1.5kV 開始m / z = 100;結束m / z = 500 掃描速度：500 樣本瓶：聚丙烯或認證的硼硅酸鹽材質 表1梯度參數表 3結果與討論 選擇3種不同反離子鹽原料藥，以同樣的色譜方法分析。梯度分析，考慮到保留API和其反離子的特異性，流動相B從20到70。圖2-4被分為四個部分，每一部分都是從A到D，數據是在每個樣本單獨運行時采集的。紫外線信號下的保留時間比Corona CAD提前.10秒左右，質譜信號比Corona CAD滯后.12秒左右，由

5、于涉及到離子化和管路延遲。該系統設置能夠定量和質量鑒別API中的每個組成成份。 使用Corona CAD還有很多優勢，與其說類似于紫外/可見這類通用檢測器，倒不如說是液相色譜/質譜的有力補充。Corona CAD可以檢測質量相同的多種化合物。不同于紫外/可見光譜，Corona CAD并不需要調整波長，也不關依賴于生色基團。Corona CAD對不同結構的化合物有著相似的響應因子。因此，與此相關的優勢是Corona CAD可根據峰面積百分含量對不同分析物的質量百分含量半定量，而紫外檢測器無法實現。MS也沒有這種能力，因為分析依賴于被測物的電離程度。 紫外/可見波長設置為254nm，因為每個感興趣

6、的化合物都含有一個共軛的環狀結構。確切的說每個分析物的紫外最大吸收值尚未確定。比較圖A到圖B顯示了API中的每個化合物在紫外和CAD中的圖譜。反離子在紫外圖譜中看不到，但清晰顯現在每個CAD圖譜中。在5,7-二羥基睪酮肌酐硫酸鹽圖譜中，見圖4，同時包含了API中的有機鹽和無機鹽。應用ZIC-pHILIC色譜柱可同時分析三種成分且都可被Corona CAD檢測。 Corona CAD可以作為一個獨立檢測器來測定大量的有機化合物和鹽離子。它也可以與其他檢測器一起運行，提供正交技術可獲得更多在單獨使用一個檢測器時可能丟失的信息。從這些實驗收集的數據表明Corona CAD可與ICS-5000 / MS系統并用，提供重要信息，并協助進行方法開發。 Corona CAD與MS聯用提供了一個機會，來獲得可能在紫外/可見中丟失的個別化合物的質量鑒定。一旦待測物的組份被確定，進一步的量化工作可以通過獨特的Corona CAD來完成，而ICS-5000/CAD-MS系統則被釋放出來用于另外的項目。 g質譜維拉帕米（MW = 455.6）保留時間（3.6分鐘）。掃描從100到500amu陽離子模式。 g。質譜新斯的明（MW= 2.233）保留時間5.7分鐘。 圖4A：5,7-二羥基睪酮（DHT）肌酐硫酸鹽（上柱.2g